药学本科生物化学与分子生物学课程思政教学改革

《高等学校课程思政建设指导纲要》明确了课程思政建设的总体目标和重点内容,对高校提高人才培养质量、深化教育教学改革提出了进一步要求。基于此,课程组对药学类专业本科生的生物化学与分子生物学课程进行教学改革,在课程顶层设计、实践教学、特色与创新、建设成效等方面展开讨论,以探索提高生物化学与分子生物学课程思政建设成效的可行思路与方法。

细胞色素P4502D6缺陷型等位基因的家系分析

利用等位基因特异扩增法（ＡＳＡ）为基础的基因分型法，对细胞色素Ｐ４５０２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）缺陷型等位基因携带者的９个家庭共３８人进行了基因分型，并与用右旋美沙芬为探针的表型分型法进行对比，发现两种方法的结果是一致的。

细胞色素P4502D6酶缺陷等位基因的分析

细胞色素Ｐ４５０２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）第１７９５位胸腺嘧啶核苷缺失造成ＣＹＰ２Ｄ６酶活性缺陷，该等位基因被称为ＣＹＰ２Ｄ６Ｔ．对该等位基因的测定有助于准确预测ＣＹＰ２Ｄ６表现型．利用等位基因特异扩增法的基本原理，建立了测定ＣＹＰ２Ｄ６Ｔ的方法．经３９６例测定，证明比利用ＰＣＲ扩增后再酶切的方法更为快捷、更少污染，为该项测定应用于临床奠定基础．

利用电泳滴定曲线选择多核苷酸磷酸化酶快速离子交换层析的最佳条件

目的 :选择多核苷酸磷酸化酶快速离子交换层析的最佳条件。方法 :制备大肠杆菌提取物的电泳滴定曲线 ,根据该曲线选择快速离子交换层析MonoSI柱的洗脱缓冲液的pH。结果 :根据该滴定曲线选择pH 8.0作为快速离子交换层析MonoSI柱的洗脱缓冲液的pH ,在该条件下只一步层析 ,得到的多核苷酸磷酸化酶的比活性提高2 50 0倍。结论

细胞色素P450 2D6等位基因CYP2D6C的特异扩增法测定

细胞色素Ｐ４５０２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）第２７０３－５位ＡＡＧ缺失造成表达产物第２８１位赖氨酸缺失的等位基因称为ＣＹＰ２Ｄ６Ｃ．利用等位基因特异扩增法（ＡＳＡ）原理，建立了ＡＳＡ－ＰＣＲ测定ＣＹＰ２Ｄ６的方法．经３９６例测定，说明本法快捷，污染少．测定结果显示ＣＹＰ２Ｄ６Ｃ不属于ＣＹＰ２Ｄ６酶缺陷等位基因，表型仍为快代谢．

环境污染物内暴露剂量测量的应用研究现状及其前景

环境污染物的内暴露剂量检测可以用于职业健康评价、环境监控、国家普查等多个领域。近年来,为了考察日益严重的环境污染对人体的危害影响,环境污染物的内暴露剂量测量方法在国内外迅速发展。随着"多污染多效应模型"的提出和环境污染物内暴露剂量测量方法的不断完善,反映了这一技术在健康生活环境建设中的重要应用价值。

一个新的肿瘤相关基因──CYP2C19

细胞色素Ｐ４５０ ２Ｃ１９（ＣＹ２Ｃ１９）又称为Ｓ－美芬妥英羟化酶，它的两个突变型等位基因ＣＹＰ２Ｃ１９ｍ１和ＣＹＰ２Ｃ１９ｍ２是引起ＣＹＰ２Ｃ１９酶活性缺陷的原因，运用等位基因特异扩增法（ＡＳＡ）对肺癌患者、膀胱癌患者及正常人进行了ＣＹＰ２Ｃ１９基因分型研究，以探索ＣＹＰ２Ｃ１９酶活性与肺癌、膀胱癌易患性的关系，经过对７４例肺癌患者、５０例膀胱癌患者和７０例对照组的测定。

体细胞突变与个性化靶向治疗新思路

大量研究已经证明DNA和各种疾病之间或多或少地存在一定的联系。先天获得的基因多态性决定了个体对疾病易感性的差异,后天发生的体细胞突变是直接造成疾病的原因。人类生存在一个特定的环境中,遗传因素和环境因素相互交织,共同作用于人类。自出生起,DNA就会不断受到内源性物质和外源性物质的作用,体细胞突变不断累积,一旦形成肇事突变(drivermutation)或肇事突变组合(driver mutation pattern),就会产生病变细胞,进而发展成病变组织、病变器官,最后产生可被检查发现和主观感知的疾病。体细胞突变的位点是随机发生的,不同的个体就有不同的突变类型。虽然疾病的发生是由一定的肇事突变引起的,但是,突变的具体部位各不相同,因此,疾病是个性化的。目前临床大量难治性疾病大多是症状类似,而发病机制是个性化的,由于其个性化实质无法掌握便成了临床难治性疾病。个性化疾病其实需要个性化治疗,目前颇受临床青睐的靶向治疗药物更需要针对正确目标。无关突变(passenger mutation)虽然与疾病的发生没有直接关系,但是,研究证明它们也可能是疾病治疗过程中的有效靶标。近年,随着全基因组测序技术和生物信息学的发展,人类处理大量基因信息的能力有了很大提高。同时,随着对疾病机制的深入研究,新型靶向药物的数量逐年增加。体细胞突变的信息是否是选择靶向药物使用的个性化标志物,这个崭新的研究思路进入人们的视野,为许多难治性疾病带来了治愈的希望。

一步法分析细胞色素P450 2D6酶活性缺陷等位基因CYP2D6A和CYP2D6B

目的：ＣＹＰ２Ｄ６Ａ和ＣＹＰ２Ｄ６Ｂ是引起细胞色素Ｐ４５０２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）酶活性缺陷的最主要的等位基因，对ＣＹＰ２Ｄ６Ａ和ＣＹＰ２Ｄ６Ｂ的检测可准确（＞９２％）预测ＣＹＰ２Ｄ６慢代谢者。本研究利用等位基因特异扩增法，建立了一步ＰＣＲ法测定ＣＹＰ２Ｄ６Ａ和ＣＹＰ２Ｄ６Ｂ等位基因。方法：等位基因特异扩增法分析ＣＹＰ２Ｄ６Ａ和ＣＹＰ２Ｄ６Ｂ等位基因；右美沙芬作为探针药物测定表型。结果：经１３０例测定，说明本法更为快捷、更少污染。结论：本法的建立为该项测定应用于临床。

电泳滴定曲线及其应用

电泳滴定曲线法是一种双向电泳法,第一向等电聚焦,以获得固定的pH梯度;然后加样,进行第二向电泳,得到的电泳滴定曲线图,直接反映了在各种pH下,各蛋白质组分之间在迁移率上的差异。该法在选择蛋白质分离纯化的最佳条件;研究蛋白质的突变;研究分子间相互作用等领域,已表现出广阔的应用前景。

开设循环制生物化学实验的体会

开设循环制生物化学实验的体会浙江医科大学陈枢青，许汉祥，刘子贻，申屠礼明，徐芝兰近几年来，我校的招生数不断增加，招收的年制和专业也不断扩大，从过去的四年制药学专业，五年制医学专业、ｐ腔专业，增加到现在的三年制医学专科、护理专科，四年制药学本科，五年制...

ASA法测定细胞色素P4502D6酶缺陷等位基因CYP2D6E

目的 :建立细胞色素P4 50 2D6(CYP2D6)第 3 0 2 3位A→C突变造成CYP2D6酶活性缺陷的等位基因CYP2D6E的测定方法。方法 :利用等位基因特异扩增法 (ASA)为基本原理 ,设计两对引物分别扩增野生型等位基因和突变型等位基因。结果 :经 3 96例测定 ,发现 2例CYP2D6E与CYP2D6B的异突变型纯合子 ,其表现型均为慢代谢者。阳性对照说明本法重复性好 ,阴性对照显示本法无污染问题。结论 :本法比PCR -RFLP法更为快捷、更少污染。

大肠杆菌多核苷酸磷酸化酶的快速高效纯化

利用快速蛋白质液相层析仪从大肠杆菌纯化到2500倍的多核苷酸磷酸化酶,回收率45.5％,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示为单一组分,经测定未检出RNA酶、磷酸单酯酶和5’-核苷酸酶活性。

利用右美沙芬区分细胞色素P4502D6纯合子与杂合子快代谢者

本研究目的是建立准确的细胞色素Ｐ４５０２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）的右美沙芬表型测定法，以发现ＣＹＰ２Ｄ６纯合子与杂合子快代谢者的表型差异。通过提高右美沙芬的检测灵敏度（１ｎｇ·ｍｌ－１）而建立的ＨＰＬＣ分析法，对已知基因型的３组共１６８位受试者进行表型测定。结果发现不仅快代谢者与慢代谢者在代谢率上有很大差异，纯合子快代谢者与杂合子快代谢者之间在代谢率上也有差异。提示ＣＹＰ２Ｄ６基因表达时。

遗传偏差在新药临床试验中勿容忽视

目的：研究临床药理实验室数据库中的受试者是否有遗传偏差。方法：对数据库中的受试者和随机组织的受试者进行了ＣＹＰ２Ｄ６基因分型对照研究。结果：ＣＹＰ２Ｄ６慢代谢者在１３６位随机受试者中有９人（６６％），而在１３８位临床药理实验室数据库的受试者中只有１人（０７％），两组经统计有显著性差异。推测慢代谢者因易于体会到药物毒副作用，而易于从数据库中退出，造成数据库中受试者的遗传偏差。结论：新药试验时的受试者应随机组织或对其进行基因分型分析，以确保无遗传偏差。

ASA法测定细胞色素P450 2D6等位基因CYP2D6*6

细胞色素Ｐ４５０２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）基因２０６４Ｇ→Ａ突变，造成表达产物２１２位上谷氨酸变成甘氨酸，从而引起酶分子失活，被称为ＣＹＰ２Ｄ６＊６．利用等位基因特异扩增法，建立了ＡＳＡ－ＰＣＲ测定ＣＹＰ２Ｄ６＊６的方法．经３９６例测定，说明本法快捷、准确．测定结果显示ＣＹＰ２Ｄ６＊６与ＣＹＰ２Ｄ６Ｔ共存，如果只为准确预测ＣＹＰ２Ｄ６酶活性。

胸腺多肽

1966年Goldstein等首先提出“胸腺素”的概念。1975年Hooper等部分提纯了胸腺素组分,命名为胸腺素组分5(Thymosin Fraction 5,TF-5).该组分已被证明是30种以上9—50肽的混合物。从此,研究胸腺素活性成分的工作大部分从TF-5开始。TF-5对于去胸腺或去免疫功能的动物模型具有重建免疫功能的作用,对人的先天性免疫缺陷性疾病和免疫抑制的癌症病人也有疗效。1977年,南京大学分子生物学研究室与泰州生物化学制药厂合作提取猪胸腺素TF-5,对麻风病、系统性红斑狼疮、Behcet综合症、皮肌炎、疣病毒感染,慢性肾炎等疾病进行疗效观察,发现有一定的药用价值。

多核苷酸磷酸化酶的研究进展(综述)

多核苷酸磷酸化酶(Polynucleotide Phosphorylase EC.2.7.7.8,简称PNP酶)具有催化ADP,IDP等末端磷交换反应、催化核苷二磷酸的聚合及多核苷酸的磷酸解的作用,被广泛地应用于核酸的研究.作为工具酶的PNP酶已被人们熟知,但作为生物体中的PNP酶却没有得到人们的重视.近年,一些研究结果表明,PNP酶在生物体中也有非常重要的意义.本文就该酶的分子结构、基因结构、作用机理和生理功用四个方面作一简单综述.

酶联免疫吸附试验法研究PEG-rhG-CSF与rHSA-hG-CSF在小鼠体内的药代动力学

研究重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)、聚乙二醇修饰的重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF)与重组人血清白蛋白-粒细胞集落刺激因子融合蛋白(rHSA-hG-CSF)在小鼠体内的药代动力学,验证两种方法对rhG-CSF半衰期(T1/2)的影响。小鼠分别皮下给药rhG-CSF,PEG-rhG-CSF与rHSA-hG-CSF后,在不同时间点采血并分离血清,采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法测定血清中rhG-CSF的浓度,用3P87药动学软件进行曲线拟合并计算参数。结果显示,rhG-CSF,PEG-rhG-CSF与rHSA-hG-CSF的半衰期(T1/2)分别为2.1,14.2和10.6h,后两者半衰期分别为rhG-CSF的7倍、5倍;PEG-rhG-CSF和rHSA-hG-CSF的达峰时间Tpeak分别为rhG-CSF的15倍、13倍。通过ELISA法检测比较rhG-CSF,PEG-rhG-CSF与rHSA-hG-CSF在小鼠体内的药代动力学,表明PEG修饰与白蛋白融合技术可以延长rhG-CSF的半衰期。

浙江省汉族与畲族CYP2C19基因多态性研究

目的 调查浙江省汉族与畲族CYP2C19基因多态性。方法 采用PCR体外扩增CYP2C19的两个多态性位点CYP2C19*2(m1)和CYP2C19*3(m2),m1的PCR扩增产物用Sma I酶切,m2的PCR产物用BamH I酶切,琼脂糖电泳检测。结果 汉族与畲族各种基因型出现频率为:wt／wt:0.412,0.411;wt／ml:0.345,0.387;wt/m2:0.108,0.055;ml／ml:0.081,0.123;ml／m2:0.054,0.018;m2／m2:0.000,0.006。汉族与畲族CYP2C19不同等位基因出现频率:wt:0.639,0.632;ml:0.280,0.325;m2:0.081,0.043。结论 浙江省汉族m2出现频率高于畲族,且差异显著(P<0.05);畲族ml出现频率高于汉族。CYP2C19各种基因型:wt／wt出现频率汉、畲两民族相近;wt／m2,ml／m2基因型汉族大于畲族;wt／ml,ml／ml畲族明显高于汉族。