脂肪组织在毛囊生长调控中的双重作用

在皮肤微环境中,脂肪组织呈现出与毛囊相应的周期性振荡,参与毛发生长和毛囊周期的调控。一方面脂肪组织来源的干细胞、血管基质组分以及脂肪组织移植在多种类型脱发的临床治疗中显示出疗效,提示脂肪组织对于毛囊的正向调控作用。另一方面,肥胖与雄激素性秃发或斑秃之间存在显著的临床关联,肥胖状态下脂肪细胞存在功能障碍和分泌失调,其诱发的炎症反应可通过多种途径对毛发生长产生负面影响。因此,脂肪组织在调控毛囊生长中兼有促进和抑制的两重作用,了解这些调节机制对于探索脱发的病理过程,以及开发脱发治疗的新策略具有重要意义。

顶体酶活性对体外受精-胚胎移植结局的影响

目的:探讨精子顶体酶活性对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)结局的影响。方法:选择909对在本院生殖中心就诊的不孕夫妇,其中女方检查为正常或仅为输卵管因素不孕。采用改良巴氏法染色和Na-苯甲酰-DL-精胺酸-P-硝酰基苯胺(BAPNA)法分别对丈夫的精液进行精子形态学分析和精子顶体酶活性测定。结果:顶体酶异常组中各项精液参数,包括正常形态精子百分率、精子活动率、活动力、快速前向运动精子百分率及精子密度均显著低于顶体酶正常组(P<0.01);顶体酶活性与精液常规分析上述各参数之间存在非常显著的正相关(P<0.01);两组间取卵数、卵裂率、优质胚胎率、胚胎冷冻率、无可移植胚胎周期百分率、胚胎移植数和流产率均无显著性差异(P>0.05);顶体酶正常组的受精率、仅一个胚胎移植的周期百分率、着床率及临床妊娠率均明显高于顶体酶异常组(P<0.01)。结论:顶体酶活性异常与精液常规分析各主要参数的异常密切相关,可导致体外受精率显著下降。顶体酶活性检测在IVF结局预测中起着重要作用。

胚胎质量对体外受精妊娠结局的影响

目的 :探讨胚胎质量对体外受精 (IVF)妊娠结局的影响。方法 :对 1 998年 6月～ 1 999年 6月间的 1 6 2对夫妇 ,1 95个周期的平均年龄、卵裂率、卵裂球构成比、胚胎形态、移植胚胎数、内膜厚度、种植率及多胎妊娠率进行了分析。结果 :妊娠周期与非妊娠周期的平均年龄无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ;胚胎受精率 (74.7%∶ 6 3.5 % )、卵裂率 (74.8%∶ 6 8.1 % )、全部 I级胚胎移植数 (6 0 .4%∶ 43.7% )、至少 1个 I级胚胎移植数 (39.6 %∶31 .7% )有显著性差异 (P<0 .0 5 ) ,卵裂球数构成比、移植胚胎数均有极显著性差异 (P<0 .0 1 ) ;内膜厚度有显著性差异 (P<0 .0 5 )。而正在妊娠 /活婴组与流产组上述各项指标均无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ,仅不同 I级胚胎移植数的多胎妊娠率有非常显著的差异 (P<0 .0 0 5 )。结论 :根据本实验室结果认为 ,形态学可作为评定胚胎质量的参数 ,但一旦临床妊娠 ,根据形态学评定的胚胎质量并不影响妊娠的结局。I级胚胎移植数与多胎妊娠的发生密切相关。

全基因组扩增技术在产前诊断中的应用

目的:探讨全基因组扩增技术(WGA)结合微阵列比较基因组杂交技术(Array-CGH)在低DNA浓度的产前样本中的应用价值。方法:对18例有产前诊断指征的孕妇进行侵入性产前诊断,所抽取的羊水或绒毛样本经DNA提取后因DNA浓度较低行全基因组扩增,再应用微阵列比较基因组杂交技术分析。结果:所检测的18例样本中,有3例异常,均提示为45,X0,其余芯片结果正常。随访15例正常a CGH结果的胎儿,有9例出生后正常。结论:应用WGA技术辅助微阵列比较基因组杂交技术对早孕期超声提示异常的胎儿进行产前诊断是可行的,它不仅缩短了发报告的时间也保持了应用a CGH技术检测的敏感性和精确性。

双色FISH检测人精子染色体非整倍体方法的建立

目的 建立用双色FISH检测人精子染色体非整倍体的方法。方法 采用双色荧光原位杂交 (FISH)方法取适量精子标本用EDTA/PBS处理 ,然后用二硫苏糖醇 (DTT) ,使精子去凝集。固定后滴片 ,然后与双色荧光直接标记探针杂交。结果 在OLYMPUS荧光显微镜下可以清楚看到精子头部的蓝色杂交信号 ,头部有 1个绿色荧光杂交信号的精子为X染色体精子 (X精子 ) ,有 1个红色荧光杂交信号的精子为Y染色体精子 (Y精子 )。精子头部有 2个荧光杂交信号的精子为染色体数目异常精子。结论 双色荧光原位杂交 (FISH)方法可以用于测定人精子染色体非整倍体率的变化。

CD23与B细胞分化

ＣＤ２３分子是Ｃ型血凝素家族类的ＩｇＥＦｃ受体。它选择性地表达于成熟Ｂ细胞表面，是Ｂ细胞分化过程中表达最短暂的分子之一。本文在简要介绍ＣＤ２３分子的基础上，综述了Ｂ淋巴细胞分化研究的新进展；结合我们实验室的工作，探讨了ＣＤ２３分子与Ｂ细胞活化和分化的可能关系；一些研究结果表明，ＣＤ２３分子不但是Ｂ细胞特定分化阶段的标志，该分子也能够向细胞内传递与细胞增殖和分化有关的化学信号。

植入前诊断中胚胎活检的动物实验研究

目的 以小鼠胚胎为材料进行植入前胚胎活检的研究。方法 通过输卵管冲洗,获得4～8细胞期胚胎,用“一”字机械法、化学法和激光法分别对4、8细胞的胚胎进行活检,观察其囊胚形成及孵出情况并进行比较。结果 “一”字机械法、化学法、激光法胚胎活检后胚胎的囊胚形成率、囊胚孵出率与未活检对照组比较无显著性差异(P >0 .0 5 )。“一”字机械法与化学法、激光法的囊胚形成率有显著性差异(P <0 .0 5 )、囊胚孵出率无显著性差异(P >0 .0 5 )。化学法与激光法的囊胚形成率、囊胚孵出率均无显著性差异(P >0 .0 5 )。logistic回归分析表明:细胞数越多越有利于胚胎进一步发育。结论 用“一”字机械法进行单个卵裂球活检,不影响胚胎的进一步发育,是一种较好的胚胎活检方法。

胚胎种植前诊断中胚胎活检的动物实验研究

目的 :以小鼠胚胎为材料进行种植前遗传学诊断 (preimplantationgeneticdiagnosis ,PGD)胚胎活检 (Biop sy)的临床前研究。方法 :通过输卵管冲洗 ,获得 4～ 8细胞期胚胎 ,用机械法分别对 4、8细胞的胚胎进行活检 ,然后继续培养 ,观察其囊胚形成及孵出情况并进行比较。结果 :活检胚胎的囊胚形成率 ( 4细胞期 78 8% ,n =6 6 ;8细胞99 0 % ,n =10 0 )、囊胚孵出率 ( 4细胞期 84 6 % ,n =5 2 ;8细胞 94 9% ,n =99)与未活检对照组比较差异无显著意义(P >0 0 5 )。结论 :在小鼠胚胎 4细胞或 8细胞期进行单个卵裂球活检 ,不影响胚胎的进一步发育。机械法是一种较好的胚胎活检方法。

植入前小鼠胚胎活检的实验研究

目的 以小鼠胚胎进行植入前胚胎活检的研究。 方法 通过输卵管冲洗 ,获得 4～ 8细胞期胚胎 ,用“一”字机械法和化学法分别对 4、8细胞的胚胎进行活检后继续培养 ,比较其囊胚形成及孵出情况。 结果 “一”字机械法胚胎活检后胚胎的囊胚形成率 (4细胞期 78 8% ,n =6 6 ;8细胞 99 0 % ,n =10 0 )、囊胚孵出率 (4细胞期 84 6 % ,n =5 2 ;8细胞期 94 9% ,n =99) ;化学法胚胎活检后胚胎的囊胚形成率 (4细胞期 74 1% ,n =5 8;8细胞期 92 9% ,n =12 7)、囊胚孵出率 (4细胞期88 4 % ,n =4 3;8细胞期 95 8% ,n =118)。两法均与未活检对照组比较无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,且两者的囊胚形成率、囊胚孵出率均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。Logistic回归分析表明 ,细胞数越多越有利于胚胎进一步发育 ;而是否活检与活检方法对胚胎发育潜能无显著影响。 结论 用“一”字机械法在小鼠胚胎 4或 8细胞期进行单个卵裂球活检 ,不影响胚胎的发育 ,是一种较好的胚胎活检方法。

双色FISH检测人精子染色体非整倍体方法的建立

目的:建立用双色ＦＩＳＨ检测人精子染色体非整倍体的方法。方法:采用双色荧光原位杂交(ＦＩＳＨ)方法取适量精子标本用ＥＤＴＡ/ＰＢＳ处理,然后用二硫苏糖醇(ＤＴＴ),使精子去凝集。固定后滴片,然后与双色荧光直接标记探针杂交。结果;在ＯＬＹＭＰＵＳ荧光显微镜下可以清楚看到精子头部的蓝色杂交信号,头部有１个绿色荧光杂交信号的精子为Ｘ染色体精子(Ｘ精子),有１个红色荧光杂交信号的精子为Ｙ染色体精子(Ｙ精子)。精子头部有２个荧光杂交信号的精子为染色体数目异常精子。结论:双色荧光原位杂交(ＦＩＳＨ)方法可以用于测定人精子染色体非整倍体率的变化。

3种新型改性玉米秸秆生物炭对Cd~(2+)吸附特性的比较

为比较3种新型改性生物炭对溶液中镉(Cd)的吸附行为,以玉米秸秆生物炭为原料,制备巯基改性生物炭(S-BC)、铁改性生物炭(Fe-BC)和氮掺杂生物炭(N-BC),分析改性前后生物炭的元素组成、比表面积、表面官能团等性质的变化,通过系统的吸附试验,比较3种改性生物炭对Cd的吸附性能和作用机理。结果表明:与未改性生物炭(BC)相比,N-BC和Fe-BC比表面积分别增加了6.3和9.0倍,总孔体积分别增加了2.68和4.08倍。S-BC因改性后表面光滑,使得生物炭比表面积减小,但其表面官能团变化明显,S-BC在2 977 cm^(-1)处出现新的吸收峰对应脂肪族(C-H)的伸缩振动,而且在1 089 cm^(-1)、1 044 cm^(-1)位置出现双特征吸收峰。3种生物炭对Cd^(2+)的吸附主要为化学吸附过程为主,且Langmuir吸附等温线模型所拟合的热力学吸附优于Freundlich吸附等温模型,推测N-BC、Fe-BC、S-BC 3种生物炭对Cd^(2+)的吸附过程为单分子层物理吸附。通过Langmuir模型计算可以得到几种生物炭对Cd^(2+)最大吸附量表现为Fe-BC (69.11 mg·g^(-1))>N-BC (61.92 mg·g^(-1))>S-BC (53.85 mg·g^(-1))>BC (40.34 mg·g^(-1))。

人脂肪干细胞的分离培养与生物学特性

背景:高效、稳定地获得大量较高纯度的人脂肪干细胞,是其在组织工程学及再生医学中广泛应用的基础和前提。目的:探索体外培养脂肪干细胞的适宜条件,从而提高其增殖能力。方法:采用胶原酶消化的方法,从人腹部皮下块状脂肪中分离出脂肪干细胞,经贴壁筛选法纯化细胞、低糖培养基体外培养扩增。Giesam染色后观察细胞形态;绘制细胞生长曲线并进行细胞周期分析,观察分析传代后染色体核型改变;选取第3代脂肪干细胞做流式细胞鉴定、EdU细胞增殖能力检测以及克隆形成实验。结果与结论:分离培养的原代脂肪干细胞形态不一,经传代后的细胞形态趋于长梭形,排列紧密呈漩涡状生长。细胞生长曲线呈S形,细胞周期分析及EdU掺入法结果显示体外培养的脂肪干细胞具有较强的增殖能力。经染色体核型分析结果提示,体外培养不会引起脂肪干细胞的核型改变。第3代脂肪干细胞经流式细胞仪检测CD29,CD44,CD90,CD105均呈阳性表达,而CD34和CD45呈阴性;克隆形成率为8.8%;在一定的诱导条件下,脂肪干细胞能够向脂肪细胞及成骨细胞分化。结果说明采用胶原酶消化法可成功分离培养人脂肪干细胞,且具有较强的增殖能力。

1q21.1微缺失胎儿合并长骨发育异常1例

孕妇31岁,孕1产0,因停经19周,B超示长骨发育异常3 d于2013年5月30日收入院。孕妇平素月经规律,末次月经2013年1月15日,停经40 d自验尿妊娠实验阳性。停经9周B超示：宫内妊娠,胚胎存活,如孕7＋周大小,推算预产期2013年10月29日。孕早期有轻度恶心、呕吐等早孕反应,持续1＋周,孕4＋月开始自觉胎动。孕13＋3周,本院唐氏筛查提示：唐氏综合征低风险。孕18＋2周本院B超示：双顶径39 mm,头围139 mm,肱骨长13mm,股骨长14 mm,长骨呈不同程度弯曲,胎盘位于子宫后壁,单活胎。

miR-148a克隆及逆转录病毒载体构建

目的克隆微小RNA hsa-miR-148a并构建逆转录病毒表达载体。方法将PCR扩增得到的miR-148a前体序列和pMSCV载体经双酶切连接产生pMSCV-miR-148a逆转录病毒表达载体,双酶切后测序鉴定,筛选阳性克隆。用pMSCV-miR-148a和PIK packaging质粒以磷酸钙共沉淀法转染包装细胞293FT,包装产生逆转录病毒。将病毒感染NIH3T3细胞进行滴度测定。结果经双酶切鉴定和测序证实,成功构建了miR-148a的逆转录病毒表达载体pMSCV-miR-148a。并测得病毒滴度为5×108CFU/ml。结论以miR-148a前体序列构建的逆转录病毒表达载体pMSCV-miR-148a能够产生高滴度的逆转录病毒,为深入研究miR-148a的生物学功能奠定了基础。

乙肝病毒S蛋白暴露时间对人精子胞膜完整性及功能的影响

目的:探讨乙肝病毒S蛋白(HBs)与人精子体外共孵育不同时间后人精子胞膜完整性及功能的变化情况。方法:人精子与25μg/m L HBs共孵育0、1、2、3、4 h后,酶标仪检测精子细胞内丙二醛(MDA)含量;Annexin V-FITC/PI双染法检测HBs对精子早期凋亡指标磷脂酰丝氨酸外翻情况,流式细胞术检测精子细胞内活性氧(ROS)、半胱氨酸蛋白酶-3,-8,-9(Caspase-3,-8,-9)活化,TUNEL结合流式细胞术检测精子DNA的损伤。结果:人精子与25μg/m L HBs共孵育后,MDA水平、ROS阳性精子、Annexin V+/PI-精子、Caspase-3,-8,-9阳性精子比率、TUNEL阳性精子比率显著升高,且Annexin V+/PI-精子、Caspase-8,-9阳性精子比率、TUNEL阳性精子比率的升高与HBs呈时间依赖趋势。结论:HBs蛋白与人精子共孵育时间增长可加剧对人精子功能的损伤。

以4种基因诱导产前诊断绒毛细胞建立诱导性多能干细胞

背景:诱导性多能干细胞因具有多能性特征,可以诱导分化为特定的细胞,包括神经细胞、造血细胞等。目的:建立产前诊断绒毛细胞来源的诱导性多能干细胞。方法:运用反转录病毒介导4种基因hOct4、hSox2、hc-Myc、hKlf4诱导产前诊断绒毛细胞,对建立的诱导性多能干细胞进行多能性、体内外分化能力、核型等鉴定。结果与结论:建立的诱导性多能干细胞能维持自我更新状态,在蛋白和mRNA水平上高表达全能性的标志基因,具有体内、外分化潜能;在体外长期培养能维持正常核型。说明4种全能性基因转入绒毛细胞可获得具有多能性的诱导性多能干细胞,这为胎儿的细胞自体移植治疗提供理想来源,为产前诊断疾病机制研究提供很好的细胞模型。

辅助生殖技术中HBV携带者胚胎发育和IVF结局的回顾分析

【目的】探讨乙肝病毒(HBV)感染以及不同感染模式的夫妇胚胎发育情况和体外授精/卵胞浆内单精子显微注射(IVF/ICSI)结局。【方法】回顾性分析行IVF/ICSI治疗,637个HBV感染患者周期与1 892个未感染者周期的基础参数以及临床结局,同时进一步比较不同模式HBV感染者之间的临床结局。基础参数包括女方年龄、月经第3天基础内分泌水平、不孕原因、原发还是继发不孕、不孕年限、第几次周期、卵巢刺激方案是长方案还是短方案、IVF还是ICSI。临床结局包括比较各组人群在获卵数、受精率、卵裂率、着床率、临床妊娠率、流产率方面有无差异。【结果】一方或双方感染HBV的夫妻与未感染的夫妻在基础参数方面没有显著性差异。获卵数、受精数、卵裂数、优质胚胎数、冷冻胚胎数、着床率、妊娠率以及流产率与未感染组比较没有差异(P均>0.05),不同模式的HBV感染者之间着床率、妊娠率和早期流产率均没有显著差异(P均>0.05)。【结论】HBV感染夫妇的胚胎继续发育的潜能和IVF结局与未感染者相似。不同模式的HBV感染者IVF结局相似。

基因芯片发现基因组拷贝数变异死胎1例

孕妇,汉族,25岁,孕1产0。因停经25＋周,发现胎动减少2周于2013年9月20日到我院门诊部就诊。三维超声检查提示胎儿如孕23周,单死胎,颅骨变形,脑部回声紊乱。孕期无特殊,否认发热、药物服用史及放射线接触史,否认近亲结婚和遗传病史,家族中无类似病患者及畸形史。孕妇及其丈夫外观发育无异常,智力正常。孕中期唐氏筛查提示13三体、18三体、21三体和神经管畸形低风险。孕妇及其丈夫选择终止妊娠。引产后尸检发现胎儿头颅变形,躯干、四肢水肿,胎盘、脐带无异常。