基于IP联合蛋白质组学探讨ENG互作蛋白在bEnd.3细胞中的作用

目的本研究拟筛选并验证在脑微血管内皮细胞(bEnd.3)中Endoglin(ENG)的互作蛋白及其作用。方法采用蛋白质组学和生物信息学技术鉴定并富集ENG互作蛋白,对这些互作蛋白进行亚细胞定位、GO功能注释、IPR注释和蛋白互作网络等分析。将以上分析筛选出的ENG互作蛋白,采用免疫共沉淀(IP)实验、细胞免疫荧光(IF)和蛋白免疫印迹(WB)技术进行验证和对比,探究ENG互作蛋白在棕榈酸(PA)、基因沉默和过表达ENG处理bEnd.3细胞中的表达变化及作用。结果通过蛋白质组学分析,bEnd.3细胞中ENG互作蛋白在亚细胞定位分析中细胞骨架相关成分呈现出较高的占比;通过GO注释和IPR注释进一步发现,是细胞骨架中的中间纤维和微丝蛋白呈现较高的富集状态。ENG与细胞骨架蛋白互作热力图结果显示,与对照组相比,PA处理的bEnd.3细胞中微丝蛋白Filamin B(Flnb)数值显著降低。IP和IF结果显示,bEnd.3细胞中ENG与Flnb存在蛋白互作和共定位情况。WB结果显示,bEnd.3细胞在PA处理条件下,ENG和Flnb蛋白表达均下降;在ENG沉默条件下,Flnb蛋白随ENG表达的减少而降低;在ENG过表达条件下,Flnb蛋白随ENG表达的增加而升高。结论ENG互作蛋白广泛参与到多种相关的生物途径以及信号通路之中,ENG在bEnd.3细胞中与Flnb蛋白存在相互作用且二者具有共定位现象,ENG还能够调控PA处理的bEnd.3细胞Flnb蛋白表达水平。

小檗胺对脂多糖诱导小鼠抑郁样行为和学习记忆的调节作用

目的探讨小檗胺对LPS诱导慢性神经炎症模型小鼠行为改变的作用及机制。方法连续7 d给予腹腔注射脂多糖的方法建立小鼠神经炎症模型;小檗胺腹腔注射给药治疗;检测各组小鼠行为学、尼氏染色观察小鼠海马病理形态及炎症相关蛋白的表达水平变化。结果与对照组相比,模型组的小鼠海马CA1区、CA3区神经元数量明显减少;在水迷宫实验中,随着接受训练的天数逐渐增加,逃逸潜伏期逐渐增长,目标象限的滞留时间下降;在强迫游泳实验中,模型组小鼠的静止不动时间增加;小鼠血清中的炎症因子的含量增多;小鼠的海马组织中NLRP3及RHOA/ROCK信号通路相关蛋白的表达水平均增加。与模型组相比,通过小檗胺给药治疗的干预,模型组小鼠海马CA1和CA3区神经元数量增多,同时,随着训练天数的增加,逃逸潜伏期逐渐减少,而目标象限滞留时间增多;强迫游泳中模型组小鼠的静止时间减少;小鼠血清炎症因子含量减少;小鼠海马组织中NLRP3及RHOA/ROCK信号通路相关蛋白的表达水平均降低。结论小檗胺可以改善脂多糖诱导的小鼠抑郁样行为和调节学习记忆,可能与NLRP3和RHOA/ROCK信号通路有关。

PPARδ激动剂GW501516对高糖致体外神经-血管单元损伤的保护作用及机制研究

目的探讨PPARδ激动剂GW501516对高糖诱导的体外神经-血管单元(neuro-vascular unit,NVU)损伤的保护作用及其机制。方法体外分离、纯化和培养SD大鼠海马神经元(neurons,Neu)、星形胶质细胞和脑微血管内皮细胞,并建立NVU共培养体系。将NVU共培养体系细胞分为:对照组、高糖组(HG组)、HG+GW501516低、中、高浓度组(25、50、100 nmol·L^(-1))和HG+GW501516(100 nmol·L^(-1))+ANA12(TrkB抑制剂,5μmol·L^(-1))组。采用跨内皮电阻(transendothelial resistance,TEER)检测和渗漏实验检测评价NUV屏障功能;CCK-8实验检测共培养体系中Neu细胞增殖活性;ELISA法检测细胞上清液中炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β水平;化学法检测Neu细胞中氧化应激指标SOD、MDA和NO水平;流式细胞术检测Neu细胞凋亡水平;Western blot检测Neu细胞中PPARδ、Bax、Bcl-2、cleaved-caspase-3以及BDNF/TrkB通路相关蛋白BDNF、p-TrkB和TrkB表达水平。结果与对照组比较,HG组TEER值降低、渗漏值升高,Neu细胞增殖活性降低,上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β及Neu细胞中MDA和NO水平升高,SOD水平降低,Neu细胞凋亡率及细胞中Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,而PPARδ、Bcl-2、BDNF和p-TrkB/TrkB蛋白表达水平降低(P<0.05);与HG组比较,不同浓度GW501516处理后TEER值升高、渗漏值降低,Neu细胞增殖活性升高,上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β及Neu细胞中MDA和NO水平降低,SOD水平升高,Neu细胞凋亡率及细胞中Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,PPARδ、Bcl-2、BDNF和p-TrkB/TrkB蛋白表达水平升高(P<0.05),且具有浓度依赖性;然而,加入ANA12干预后会逆转GW501516对高糖条件下NVU损伤的改善作用。结论PPARδ激动剂GW501516通过激活BDNF/TrkB信号通路的转导改善高糖诱导的体外NVU损伤。

HPLC法同时测定野豌豆中芦丁、金丝桃苷和槲皮素的含量

目的：建立野豌豆药材中芦丁、金丝桃苷和槲皮素三个活性成分的HPLC含量测定方法。方法：采用Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱（250 mm ×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-1‰磷酸水溶液,梯度洗脱,流速：0.8 ml·min-1,检测波长：370 nm,柱温：30℃。结果：芦丁、金丝桃苷和槲皮素的线性范围分别为4.090~130.940μg ·ml-1（r=0.9999）、4.600~147.200μg ·ml-1（r=0.9999）和0.810~25.780μg·ml-1（r =0.9998）；平均回收率分别为103.45%（RSD=1.25%）、98.96%（RSD=1.77%）和102.88%（RSD=0.84%）（n=6）。结论：本方法稳定,重复性好,操作简单,可用于野豌豆药材的质量控制。

他汀类药物不良反应的研究进展

他汀类药物在预防动脉粥样硬化、改善预后方面已积累了大量一致的临床研究证据。总体上大多数他汀的耐受性良好,但对他汀不良反应的认识也经历了一个逐渐变化的过程。近年来对他汀类药物肌肉毒性、肝脏损害、神经系统不良反应、新发肿瘤和糖尿病等的担忧和争论始终没有停止。因此现就他汀类药物不良反应及其相关因素研究进展做一综述。

Tirzepatide通过抑制氧化应激和炎症改善糖尿病肾损伤

目的探讨Tirzepatide对糖尿病(DM)SD大鼠肾损伤的改善作用。方法高脂喂养联合STZ腹腔注射构建大鼠DM模型,治疗组大鼠灌胃给予Tirzepatide。ELISA检测大鼠肾组织中SOD活化和MDA含量;HE和PAS染色检测肾脏结构变化和糖原沉积;qRT-PCR检测IL-6、IL-1β、TNF-α的基因表达;Western blot法检测PKC-α、p-NF-κB/NF-κB、iNOS蛋白的表达。结果与DM组相比,Tirzepatide治疗组大鼠肾脏组织中SOD显著上调,MDA含量显著下调(P<0.05);尿白蛋白和尿肌酐排泄减少,肾脏结构改善。Tirzepatide治疗组PKC-α、p-NF-κB/NF-κB、iNOS蛋白表达水平均下调,IL-6、IL-1β、TNF-α基因表达均下调,显示炎症通路被抑制。结论Tirzepatide可能通过抑制氧化应激和炎症通路缓解DM大鼠肾脏组织的氧化损伤。

人脐静脉内皮细胞分离培养和鉴定

目的建立简便、可靠、高效的体外分离培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的方法。方法利用2型胶原蛋白酶消化处理脐带分离HUVEC,采用内皮细胞培养基(ECM)进行培养。相差倒置显微镜观察细胞形态,免疫荧光技术检测冯·维勒布兰德因子(v WF)的表达,流式细胞术检测细胞表面CD31的水平鉴定细胞的纯度,体外成管实验检测冻存后内皮细胞的功能。结果成功分离培养出纯度高、活性好的HUVEC。原代HUVEC分离1周即可汇合成单层,细胞呈典型的鹅卵石状排列,免疫荧光技术证明细胞广泛表达v WF、CD31阳性细胞频数达93.1%。冻存后的细胞依然能形成管腔结构,证明标准化的冻存方法能很好地维持细胞的功能。结论建立了简便、可靠、高效的体外分离培养HUVEC的方法。

茶籽壳不同部位提取物清除二苯基苦基苯肼自由基作用

目的:研究茶籽壳的不同部位提取物清除二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基的作用。方法:采用系统溶剂法将茶籽壳的乙醇萃取物分成石油醚、乙酸乙酯、正丁醇及水四个部位提取物,采用DPPH自由基体系法测定其抗氧化活性,并和没食子酸、抗坏血酸进行比较。结果:茶籽壳的乙酸乙酯部位提取物0.25 mg·ml^(-1)对DPPH的清除能力达到95%;0.3 mg·ml^(-1)的正丁醇部位提取物对DPPH清除率达到95%:水部位提取物0.35 mg·ml^(-1)清除率也达到85%;石油醚部位提取物没有活性。结论:茶籽壳的乙酸乙酯、正丁醇及水提取物有抗氧化活性。其中,乙酸乙酯部位的抗氧化能力最强。

复方总黄酮对小鼠慢性酒精性肝病治疗作用的研究

目的探讨复方总黄酮对慢性酒精中毒小鼠肝损伤的治疗作用。方法选用SPF级C57BL/6小鼠100只随机分为5组,正常组、正常+高剂量药物组、模型组、模型+低剂量药物组、模型+高剂量药物组,每组20只。采取用酒精自由饮法建立小鼠慢性酒精肝中毒模型,同时用复方总黄酮进行干预,实验6个月。观察小鼠体重变化及计算肝体质比,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平,肝丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)等指标,制作肝组织石蜡切片并HE染色观察其形态学变化。结果酒精模型组小鼠体重减轻,肝体质比增大,血清TC、TG、肝MDA明显增高,肝SOD、GSH-Px、CAT降低,肝组织脂肪变。模型+复方总黄酮给药组较模型组各种中毒症状均有所缓解;肝脂肪病变程度明显减轻。结论酒精通过脂质过氧化反应损伤肝脏,复方总黄酮可以提高抗氧化酶水平抑制脂质过氧化。

小檗碱对棕榈酸诱导大鼠心肌细胞H9c2脂毒性损伤的影响

目的:探讨小檗碱对棕榈酸(PA)诱导大鼠心肌细胞H9c2脂毒性损伤的影响。方法:在正常培养的H9c2细胞中,采用细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞存活率;采用ELISA试剂盒检测细胞裂解液中氧化还原指标:丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH);采用免疫印迹法Western blot检测细胞内能量感受器磷酸化AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)/AMPK及肝激酶B1(LKB1)、沉默调节蛋白1(SIRT1)和成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)的蛋白表达。结果:PA在100μmol·L^(-1)浓度时,处理H9c2细胞24 h以上产生明显细胞毒性,与正常对照组(不含PA)比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。使用5μmol·L^(-1)小檗碱预处理H9c2细胞4 h可以逆转PA对H9c2中MDA、SOD和GSH的影响,同时细胞存活率明显上升,差异有统计学意义(P<0.05)。同时,在给予小檗碱治疗后,p-AMPK/AMPK、LKB1、SIRT 1和FGF-21蛋白的表达水平亦显著增加(P<0.05)。但使用FGF21的干扰RNA(siRNA)后,小檗碱激活AMPK的现象几乎被逆转,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:小檗碱可显著改善PA诱导的心肌细胞脂毒性,其机制可能与经典的FGF-21/AMPK信号通路有关。

组合式折流板反应器处理模拟废水的研究

本文对由缺氧区-厌氧区-好氧区构成的新型组合式折流板反应器(CBR)处理模拟废水的过程进行了研究。通过实验研究了水力停留时间(HRT)、回流比、溶解氧浓度、碳氮比等因素对CBR去除COD、氨氮和总氮效果的影响。结果表明CBR具有良好的抗冲击负荷能力,在水力停留时间24h、回流比为200%、碳氮比为13的情况下,反应器具有最佳处理效果,COD、氨氮和总氮去除率分别达到90%,98%和80%。

HPLC法同时测定葛花中大豆苷、鸢尾苷和染料木素含量的研究

为了建立葛花中大豆苷、鸢尾苷和染料木素3种异黄酮成分的HPLC测定方法,试验采用色谱柱为Eclipse XDB-C18（4.6 mm×150 mm,5μm）,流动相为乙腈-1‰磷酸水溶液,梯度洗脱（0~20 min,13%乙腈;20~30 min,27%乙腈;30~40 min,32%乙腈;40~50 min,36%乙腈;50~60 min,43%乙腈）,流速为0.8 m L/min,检测波长为264 nm,柱温为30℃的HPLC方法进行检测。结果表明：大豆苷、鸢尾苷和染料木素的线性范围分别为0.126~5.040 mg/m L（R2=0.999 7）,0.096~3.840 mg/m L（R2=0.999 6）和0.034~1.360 mg/m L（R2=0.999 9）;平均回收率分别为99.22%（RSD=1.11%）、103.89%（RSD=1.89%）和99.93%（RSD=1.53%）。说明该方法能够将葛花中多种异黄酮类成分分离,准确可靠,专属性强,结果稳定,可用于葛花药材的质量控制。

瓣环与左室流出道椭圆率比值及瓣环离心指数对TAVR患者远期预后的预测价值

目的分析探讨主动脉根部因素瓣环与左室流出道(LVOT)椭圆率比值、瓣环离心指数对经导管主动脉瓣置换术(TAVR)患者远期预后的预测价值。方法回顾性分析2016年1月至2022年5月于新疆医科大学第一附属医院心脏中心行TAVR治疗的主动脉瓣狭窄(AVS)患者86例,根据患者瓣环离心指数与瓣环形态的关系,分为离心指数<0.1组(n=62)及离心指数≥0.1组(n=24),同时根据患者瓣环与LVOT形态相似程度优劣将患者分为椭圆率比值>1组(n=23)及椭圆率比值≤1组(n=63)。分别比较瓣环离心指数、瓣环与LVOT椭圆率比值对患者远期预后的影响,并用Cox回归分析影响TAVR患者预后的预测因素。使用ROC曲线、校准曲线、DCA曲线分析预测能力的效能、精准度、临床效用。结果多因素Cox回归结果:瓣环离心指数<0.1(HR:0.13,95%CI:0.02~0.86,P=0.034)、瓣环与LVOT椭圆率比值>1(HR:7.98,95%CI:1.85~34.39,P=0.005)、无冠状窦下瓣膜植入深度>5 mm(HR:5.29,95%CI:1.51~18.55,P=0.009)是TAVR术后远期(1年)永久起搏器植入(PPI)的独立预测因素。ROC曲线、校准曲线、DCA曲线分析结果分别提示:瓣环与LVOT椭圆率比值、瓣环离心指数联合瓣膜植入深度预测远期PPI的效能较好(AUC:0.919,95%CI:0.822~1.000,P<0.001),精准度较高(C指数为0.894,95%CI:0.809~0.979,P<0.001),且具有一定临床效用。结论作为AVS患者主动脉根部差异的评估方式,瓣环与LVOT椭圆率比值、瓣环离心指数对TAVR患者远期预后具有一定预测价值,且联合已知预测因素瓣膜植入深度预测远期PPI的效能较好、精准度较高,具有一定临床效用。

阿司匹林对糖尿病慢性并发症的防治作用

糖尿病是一组胰岛素分泌不足或胰岛素分泌缺陷而导致的代谢性疾病,它的根本原因是血糖升高。糖尿病并发症发生率极高。糖尿病急性并发症主要是酸中毒;而慢性并发症主要是对终末段微小血管的持续损伤,如视网膜病变、糖尿病肾病、糖尿病足、大血管病变等。阿司匹林作为一种传统的解热镇痛抗炎药使用已有一百多年历史,随着循证医学的发展,阿司匹林在临床中的应用已向防治心血管疾病、结肠和直肠癌、阿尔兹海默病等新的领域拓展。

贯叶金丝桃素在神经精神疾病中的作用机制研究

贯叶金丝桃素是中药贯叶金丝桃的重要活性成分,除了抗抑郁效果,贯叶金丝桃素在其他神经精神疾病中具有潜在的治疗作用。本文从其对神经递质、TRPC6、细胞因子影响等方面对现阶段贯叶金丝桃素在神经精神疾病中的作用机制进行归纳和阐述,为进一步深入研究奠定基础。

构建不同周龄载脂蛋白E基因敲除动脉粥样硬化模型小鼠血脂和病理学观察

背景:载脂蛋白E基因敲除小鼠形成的动脉粥样硬化病变与人类全身动脉粥样硬化好发处相近,是目前建立动脉粥样硬化理想的动物模型。目的:研究载脂蛋白E基因敲除小鼠不同周龄动脉粥样硬化的病理进程,探讨不同饮食对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化发生发展的影响。方法:将8周龄雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠,随机分为2组,分别给予高脂饮食和普通饮食喂养8,12,16,20,24周。结果与结论:血清学指标检测显示,不同周龄的高脂饮食组血清中总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白胆固醇水平显著高于普通饮食组(P<0.05),呈时间依赖性。大体和冰冻切片油红O染色结果显示,高脂饮食组动脉粥样硬化管腔斑块面积显著高于普通饮食组(P<0.05),呈时间依赖性,此时两组各周龄小鼠管腔斑块面积相比均有显著性意义(P<0.05),小鼠在高脂饮食16周时主动脉可见明显的脂质斑块。结果表明,实验成功构建了载脂蛋白E基因敲除动脉粥样硬化模型小鼠,此模型形成脂质条纹和纤维增生病变的时间较普通饮食组更快。

重组9型腺相关病毒载体转染动脉粥样硬化模型小鼠主动脉:最佳在体表达时间点的确定

背景:重组9型腺相关病毒载体对心肌组织具有较高的亲和力,关于携带增强型绿色荧光蛋白报告基因的重组9型腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus serotype 9-enhanced green fluorescent protein,r AAV9-e GFP)在动脉粥样硬化模型小鼠主动脉中的表达情况还不确定。目的:探索携带r AAV9-e GFP转染动脉粥样硬化模型小鼠主动脉最佳的在体表达时间点。方法:给予30只Apo E-/-小鼠连续高脂饮食饲养16周建立为动脉粥样硬化模型,然后随机取其中25只通过尾静脉注射转染5.0×1011 vg(virus genomes)r AAV9-e GFP,另5只作为对照组给予生理盐水。转染病毒的动脉粥样硬化模型小鼠分别于转染后14,21,28,35,60 d处死,留取主动脉组织,应用激光共聚焦显微镜观察增强型绿色荧光蛋白荧光表达情况,Western blot法检测主动脉增强型绿色荧光蛋白的蛋白表达,观察增强型绿色荧光蛋白体内表达情况,确定病毒在体表达最佳时间点。结果与结论:r AAV9-e GFP可有效转染动脉粥样硬化模型小鼠主动脉血管,增强型绿色荧光蛋白可在主动脉组织中表达,其表达强度随着转染时间的增加而逐渐增强,于转染35 d时表达最强,60 d趋于稳定,各时间点主动脉斑块中增强型绿色荧光蛋白表达的水平差异有显著意义(P<0.001)。表明r AAV9-e GFP可有效在动脉粥样硬化模型Apo E-/-小鼠主动脉中表达,r AAV9-e GFP可成为动脉粥样硬化治疗的最佳载体。

小檗碱调控线粒体功能改善2型糖尿病引起的肝脏脂质代谢紊乱

目的探讨小檗碱对糖尿病肝脏病变的作用,及线粒体参与其中的相关分子机制。方法实验分为3组:正常组(WT),糖尿病组(db/db)和小檗碱治疗组(db/db+BBR)。HE染色观察肝脏组织形态改变;检测血浆总胆固醇(TC)、总三酰甘油(TG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的水平;Western blot法检测肝组织线粒体相关蛋白的改变。结果与正常组相比,db/db组中TG、TC、LDL-C的含量明显增加,而HDL-C含量明显降低,ALT、AST蛋白水平也显著提高;与db/db组相比,小檗碱治疗组各指标明显改善,差异具有统计学意义(均P<0.05)。同时,小檗碱显著改善糖尿病性肝脏引起的空泡化。此外,小檗碱激活线粒体自噬发生和线粒体生成途径,改善糖尿病性肝脏病变。结论小檗碱具有改善糖尿病性肝脏病变的作用。

RP-HPLC法同时测定金钱草中槲皮素、山奈酚和异鼠李素含量的研究

为了同时检测金钱草中槲皮素、山奈酚和异鼠李素3种成分的含量，试验采用色谱条件为Agilent ZORBAX EclipseXDB-C18色谱柱（4．6mm×150mm，5μm），流动相为甲醇-水，等度洗脱（0～30min，48％甲醇），流速为0．8mL／min，检测波长为370nm，柱温为30℃的方法进行检测。结果表明：槲皮素、山奈酚和异鼠李素的线性范围分别为0．00183—0．02930mg／mL、0．00102～0．01630mg／mL和0．00116～0．01860mg／mL；平均回收率分别为99．8％、104．4％和99．7％。

达格列净调节糖尿病大鼠心肌SK2蛋白表达

目的探讨达格列净(dapagliflozin,Dapa)对糖尿病大鼠心肌小电导钙激活钾通道2(small conductance calcium-activated potassium channel 2,SK2通道)蛋白的影响以及可能作用机制。方法体内:高糖高脂饮食联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(35 mg·kg^(-1))构建2型糖尿病模型,并给予达格列净(1 mg·kg^(-1)·d^(-1))治疗干预;体外:Dapa(5μmol·L^(-1))处理原代心肌细胞并暴露于高糖(30 mmol·L^(-1));心脏超声检测各组大鼠的心功能情况;DCFH-DA荧光探针检测活性氧(reactive oxide specis,ROS)的水平;Western blot检测SK2、NOX4、p38MAPK、p-p38MAPK的蛋白表达水平。结果Dapa改善糖尿病大鼠心脏功能;Dapa降低ROS的产生;Dapa上调SK2的蛋白表达;Dapa抑制NOX4,p38MAPK及p-p38MAPK的蛋白表达;沉默NOX4基因后,Dapa降低了心肌细胞NOX4含量并促进了SK2的表达。结论Dapa可通过抑制NOX4/p38MAPK信号通路部分修复糖尿病大鼠心肌SK2的低表达。