细粒棘球蚴AgB8/2基因的原核表达及免疫学鉴定

旨在克隆细粒棘球蚴AgB8/2基因,优化原核表达体系,鉴定纯化蛋白并初步确定其诊断价值。采用RT-PCR扩增AgB8/2基因cDNA,构建原核表达载体pET-AgB8/2并在大肠杆菌BL21（DE3）中表达,优化表达条件。纯化的AgB8/2融合蛋白经Western blot鉴定正确后,采用斑点免疫金渗滤法初步验证其血清学诊断价值。结果显示,克隆的AgB8/2基因包含了273bp的完整ORF,序列分析表明与其它已报道的AgB8/2cDNA序列的同源性在99%-100%之间。优化的表达条件为,当菌液OD600值为0.6时,加入终浓度为0.05mmol/L的IPTG,37℃,振荡培养5h。纯化的蛋白经Western blot鉴定为目的蛋白。克隆的AgB8/2基因高度保守,原核表达载体pET-AgB8/2构建正确并高效表达可溶性融合蛋白,可作为特异性抗原应用于斑点免疫金渗滤法检测血清抗体。

内蒙古羊源细粒棘球蚴Eg95基因原核表达及蛋白鉴定

在克隆内蒙古羊源细粒棘球蚴疫苗候选基因Eg95的基础上,构建原核表达载体pET-Eg95并转化E.coliBL21(DE3),优化表达体系,获得Eg95纯化蛋白。将Eg95基因从克隆质粒pMD19-T-Eg95亚克隆到原核表达载体pET44a(+)上,构建原核表达载体pET-Eg95,转化E.coli BL21(DE3)诱导表达,优化表达条件。纯化的Eg95融合蛋白经SDS-PAGE和Western Blot鉴定其正确性和免疫学活性。原核表达载体pET-Eg95在大肠杆菌中高效表达,优化的原核表达条件为:当菌液OD600值为0.6时,加入终浓度为0.1mmol/L的IPTG,37℃,振荡培养5h。纯化后的蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定为目的蛋白并具有生物学活性。原核表达载体pET-Eg95构建正确并可高效表达可溶性Nus-Eg95融合蛋白,可作为特异性抗原应用于免疫印迹法检测血清抗体。

细粒棘球蚴FABP基因的原核表达及蛋白鉴定

构建原核表达载体pET-FABP,优化表达条件,采用免疫学方法鉴定纯化的FABP融合蛋白。载体pMD19-T-FABP和pET-44a(+)经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切,将回收的FABP片段与pET-44a(+)连接,构建原核表达载体pET-FABP并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,优化表达条件,纯化FABP融合蛋白,Western blotting鉴定。成功构建了原核表达载体pET-FABP并在大肠杆菌中高效表达。纯化后的蛋白经SDS-PAGE和Western blotting鉴定正确。构建的表达载体pET-FABP可以在大肠杆菌中大量表达Nus-FABP融合蛋白,为进一步研制FABP亚单位疫苗奠定了基础。

细粒棘球蚴特异性抗原基因P-29的原核表达及免疫学鉴定

目的对细粒棘球蚴P-29基因进行克隆、表达和免疫反应性分析。方法以细粒棘球蚴总RNA为模板,反转录PCR扩增P-29基因,将其克隆至原核表达载体pET44a(+)中,构建重组原核表达载体pET-P-29,转入大肠埃希菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察重组蛋白的表达情况,用蛋白纯化试剂盒纯化蛋白,蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白与细粒棘球蚴病患者血清的免疫反应性。结果PCR、双酶切和DNA测序结果表明,重组质粒pET-P-29构建成功。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白Nus-P-29的相对分子质量(Mr)约为93000,纯化后的蛋白浓度为0.78mg/ml。重组蛋白Nus-P-29能被细粒棘球蚴病患者血清识别。结论细粒棘球蚴P-29基因表达成功,纯化后的重组蛋白Nus-P-29具有较强的免疫反应性。

广东省率顺县学习《廉政准则》进行“五查五看”

近日，该县积极组织党员领导干部学习《中国共产党党员领导干部廉洁从政若干准则》，并对照《廉政准则》认真开展“五查五看”活动：查学习，看是不是认真自觉；查思想，看是不是积极进取；查工作，看是不是尽职尽责；查作风，看是不是务求实效：查行为，看是不是廉洁奉公，切实做到真学、真懂、真用，确保学习取得实效。

扯不断的故乡情结

革命老区梅州市丰顺县汤南镇隆烟村,有一位72岁高龄、入党45年的老共产党员——罗森通,退休后,在家乡的土地上带领村民奔康致富,乐此不疲。地处贫困山区的隆烟村祖祖辈辈以耕几亩薄田为生,改革开放后,人们外出打工的多了,生活水平有了提高,但村容村貌,还是脏、乱、差,道路坑坑洼注,雨天泥泞遍地,村委仍在破旧祠堂办公,村里没有集体财产。1999年,从农械厂退休回乡的罗森通,已年近古稀,生活安逸舒适,儿女事业有成,正是坐享清福、安度晚年之时,当他看到家乡依然贫穷落后,便决定参加隆烟村选举干部活动,并说服家人,支持他参选。在首次民主选举中,罗森通众望所归,被选为村委会主任、党支部书记。上任伊始,罗森通便提出计划建设全长10多公里、涉及1400多户人家。