广东省猪链球菌2型菌株毒力基因及分子分型分析

目的掌握广东地区猪链球菌2型菌株毒力因子及分子分型情况,为诊断、治疗和制定防控措施提供科学依据。方法选取荚膜多糖(cps2J)、溶菌酶释放蛋白(mrp)、溶血素(sly)、谷氨酸脱氢酶(gdh)、胞外因子(ef)等5个猪链球菌2型主要毒力基因,分别设计引物对分离自病人、病猪的22株猪链球菌2型菌株进行PCR检测,并对菌株进行MLST分型分析。结果 22株菌分为5种毒力基因型,其中cps2J+/mrp+/sly+/gdh+/ef+型别为病人及病猪菌株所共有,cps2J+/mrp+/sly-/gdh-/ef+、cps2J+/mrp+/sly-/gdh+/ef+为病人菌株所特有,cps2J+/mrp-/sly+/gdh+/ef+、cps2J+/mrp-/sly-/gdh+/ef-为病猪菌株所特有;MLST分型结果显示,22株分为ST1、ST7和ST28三个型别,其中ST1、ST7型为病人和病猪菌株所共有,均同属于ST1克隆复合物,ST28型为病猪所特有。结论广东地区病人、病猪的猪链球菌2型菌株毒力基因型及MLST分子分型均呈现多样化,且部分型别为两者所共有,为阐明猪传染给人提供了直接的证据。

广东省布鲁氏菌病病原学特征分析

目的从表型和分子生物学水平鉴定广东省2005-2006年分离的布鲁氏菌菌株,应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法分析与省内及既往菌株的同源性。方法运用常规方法鉴定了6株布鲁氏菌菌株,进一步用BCSP31-PCR技术和PFGE方法进行种的水平区分及同源性分析。结果6株菌均为羊种3型,属特异性基因BCSP31阳性,菌株间的PFGE分型相似值介于69.2%～100%。结论广东省这2年分离的布鲁氏菌菌株均为羊种3型,与1985年比较发生了种的改变,PFGE方法可在种的水平区分布鲁氏菌的3个种。

广东省布鲁氏菌菌株脂肪酸成分分析

目的探讨脂肪酸成分分析方法对广东布鲁氏菌菌株进行分型的可能性,获得广东布鲁氏菌脂肪酸成分的本底资料。方法选择历年从广东不同地区分离到的29株布鲁氏菌进行了菌体脂肪酸成分分析,利用MIDI公司Sherlock系统的软件进行聚类分析。结果广东布鲁氏菌的主要脂肪酸成分为19:0cycloω8c酸、16:0酸、18:0酸,其中牛种菌的19:0cycloω8c酸含量最高,羊种次之,猪种最低,其中羊种和猪种布鲁氏菌19:0cycloω8c酸、18:0酸含量差异有统计学意义,1965年和近3年的羊种布鲁氏菌株19:0cycloω8c酸、18:0酸含量差异有统计学意义。结论菌株的脂肪酸成分稳定,但各种间脂肪酸含量存在差异,一定的欧氏距离时,可以在种的水平上区分布鲁氏菌的3个种。

2001-2003年广东省钩端螺旋体病监测结果分析

[目的]通过监测,了解广东省人群及宿主动物中钩体病菌群的变化,为预防钩体病的爆发流行,合理有效地制定预防措施。[方法]采集相关人群及宿主动物血清用显微镜凝集试验(MAT)进行抗体测定;采集相关人群全血、宿主动物脏器做钩端螺旋体分离培养及分群鉴定。[结果]健康人血清、疑似病人血清、宿主动物血清平均抗体阳性率分别为33.90%、4.59%、36.69%;在疑似病人血中分离培养出秋季热群钩体1株;在鼠肾中分离培养出21株钩端螺旋体,其中爪哇群14株、秋季热群4株、黄疸出血群2株和澳洲群1株;在猪肾、蛙肾中均未分离到钩端螺旋体。[结论]广东省人群及宿主动物钩体隐性感染水平较高,人群中血清抗体阳性的菌型以黄疸出血群为多,而宿主动物以爪哇群为多。鼠类动物脏器分离培养及血清抗体阳性率较高,显示老鼠仍然是传播钩体的主要传染源之一,提示我们要警惕由于菌群的更迭而引起钩体病的爆发流行。

两种技术在广东地区布鲁氏菌菌株分型中的应用与评价

目的：对脉冲场凝胶电泳方法（PFGE）和多位点可变数目串联重复序列分型（MLVA）两种分子分型方法在布鲁氏菌分型研究中的应用进行比较和评价。方法采用PFGE和MLVA分子分型方法对60株布鲁氏菌地方株和3株标准菌株（16M、544A、1330S）进行分型比较。结果63株菌株间PFGE相似性系数介于72．1％～100％，在94．4％相似水平可区分羊、猪、牛3个种，在100．0％相似水平上可分为14个群29种PFGE型别，分辨力为0．9575；MLVA相似性系数介于16．9％～100％，在52．3％相似水平可区分羊、猪、牛3个种，在100．0％相似水平上可分为8个群47种MLVA型别，分辨力为0．9852。结论PFGE和MLVA均可在一定的相似系数从种的水平区分羊、猪、牛3个种，但不能区分同种异型；两种方法均可用于布鲁氏菌的分子分型，MLVA较PFGE具有稍高的分辨能力。

广东省人感染猪链球菌2型10株病原学特征

目的分析广东省2005～2006年分离的10株2型猪链球菌菌株的病原学特征,为诊断、治疗和制定今后防控措施提供科学依据。方法对10株菌进行常规方法鉴定及PCR技术检测。结果经血清学分型和生化鉴定,10菌株均为猪链球菌2型,其中9株菌三种基因(菌种基因(16SrRNA)、荚膜多糖编码基因(CPS2J)和溶菌酶释放相关蛋白基因(mrp))均阳性,1株菌mrp基因检测阴性。结论广东省人感染猪链球菌病由2型猪链球菌引起。

2011-2019年广东省输入性疟疾疫情分析

目的分析广东省输入性疟疾疫情态势,为维持广东省消除疟疾状态制订有效的防控策略。方法收集广东省2011-2019年疟疾监测数据进行回顾性描述。结果2011-2019年广东共报告输入性疟疾病例1524例,其中恶性疟占75.26%(1147/1524)、间日疟占14.30%(218/1524)、三日疟占5.91%(90/1524)、卵形疟占1.97%(30/1524),混合疟10例、诺氏疟1例和未分型28例。全省19个地市有病例报告,报告发病数前三位的地市为广州(51.84%,790/1524)、深圳(19.49%,297/1524)、佛山(5.64%,86/1524),三个地市报告数占全省病例数的76.97%(1173/1524)。病例主要来源于非洲、东南亚等国家,输入病例排在前三位的分别为尼日利亚(20.47%,312/1524)、加纳(8.27%,126/1524)和喀麦隆(6.50%,99/1524)。病例男女性别比为7.51∶1;发病人群主要为20~49岁的男性(76.25%,1162/1524)。病例从事职业前三位的为商业服务(25.98%,396/1524)、劳务输出工人(24.54%,374/1524)和家务及待业(9.38%,143/1524),共占总病例数的59.91%(913/1524)。全省报告外籍病例287例,主要来自非洲(90.24%,259/287),其中尼日利亚籍占16.38%(47/287)、安哥拉籍占6.97%(20/287)、喀麦隆籍占6.62%(19/287);报告虫种前三位为恶性疟(85.71%,246/287)、间日疟(10.10%,29/287)和三日疟(1.74%,5/287)。共报告15例死亡病例,无输入继发疟疾病例发生。结论广东省的疟疾防控措施是敏感有效的,输入性疟疾是目前乃至今后疟疾防控的主要威胁,需适当调整防控策略,继续加强监测和治疗。

2005年广东省临床分离猪链球菌的MLST分子分型研究

在2005年四川发生猪链球菌人间感染疫情期间,广东省也加强了监测,并发现了5个散发感染病例。从这5个住院临床病例中,分别分离了5个致病性SS2。通过测定猪链球菌基因组上的7个看家基因dpr、thrA、cpn60、recA、gki、aroA和mutS的部分片段,对这5个猪链球菌进行了多位点测序分型。通过对上述测序片段进行比对分析发现,5个菌株的dpr、cpn60、recA、gki、aroA和mutS等6个基因片段完全相同;而thrA基因片段存在两个等位基因型即thrA-c和thrA-h,在该等位基因片段的360位的亮氨酸密码子第三位发生了一个中性突变(TTA→TTG)。MLST分析结果显示,广东省的临床猪链球菌分离株L-SS002、L-SS003和L-SS005菌株,与四川疫情株相同,属于ST7型;而L-SS004和L-SS006,与香港地区发现的猪链球菌相同,属于ST1克隆;但这5个菌株亲缘关系极近,都属于ST1克隆复合物;这一点与四川省暴发的人间猪链疫情明显不同,后者仅由单一的ST7猪链球菌克隆引起。属于ST7的克隆菌株很可能来源于四川;而其余两个ST1克隆系菌株的来源尚待鉴定。

MALDI-TOF-MS鉴定布鲁氏菌方法建立和评价

目的为了快速、准确、便捷的检测和鉴定布鲁氏菌,本研究拟建立鉴定布鲁氏菌属的MALDI-TOF-MS方法,利用现场分离菌株对该方法进行特异性和敏感性评价。方法收集布鲁氏菌标准菌株和地方流行株,应用MALDI-TOF-MS采集图谱,获取独特的蛋白质指纹图谱,汇总成标准图谱,建立布鲁氏菌鉴定数据库。并用39株布鲁氏菌菌株,对建立的数据库进行验证。结果经数据库鉴定,39株布鲁氏菌菌株与数据库中布鲁氏菌的匹配分数全部大于2.300,均报告为布鲁氏菌,表明鉴定结果的可信度很高。聚类分型结果表明,在蛋白质水平,MALDI-TOF-MS将测试的布鲁氏菌分成3大类。结论MALDI-TOF-MS对布鲁氏菌进行鉴定,具有快速、准确、灵敏等优点,可以实现对布鲁氏菌属的准确鉴定,对布鲁氏菌病的临床诊断具有较高的使用价值。

广东省布鲁氏菌分离株的分子特征分析

目的了解广东省布鲁氏菌分离株的分子特征。方法应用传统分型鉴定方法和PCR扩增布鲁氏菌属特异性基因BCSP31,对广东省历年布鲁氏菌分离株作鉴定分型,进一步采用脉冲场电泳技术(PFGE)进行分子分型,分析比较菌株分子指纹图谱的相似性,以探讨不同年份和地域菌株之间的相关性。结果1965年广东省布鲁氏菌分离株以羊种和猪种为主,1985年的分离株均为猪种3型,2006和2007年的分离株均为羊种3型;PFGE电泳图谱经聚类分析结果显示,历年布鲁氏菌分离株分成三大簇(Clusters):1965年羊种、1965年猪种与1985年猪种3型、2006年和2007年羊种3型。近两年珠三角地区布鲁氏菌病的流行优势菌型为羊种3型,且同源性达100%,但与1965年羊种分离株的同源性只有77.7%。结论近两年我省布鲁氏菌的优势菌型为羊种3型,各地区分离株之间的遗传关系高度相关,与20年前的分离株同源性差。PFGE可作为传统生物分型的补充手段,可在种的水平对布鲁氏菌分离株分型。

2005年广东省健康人群流脑免疫水平和带菌状况调查

目的：了解我省健康人群流脑带菌状况和免疫水平，预测流脑发病的趋势，为流脑的防控提供依据。方法：按照中国疾病预防控制中心的要求并结合广东省的实际情况开展流脑监测工作。选择广州市番禺区、茂名化州市、韶关乐昌市、东莞市及汕头市潮阳区作为流脑监测点。各监测点按广东省流脑监测方案要求采集市内0-、5-、10-、15-、25～、35-及45岁以上共7个年龄组人群的咽拭子及静脉血，分别进行健康人群带菌调查及人群抗体水平检测。结果：广东省健康人群A群流脑IgG抗体的总阳性率为78．9％（675／856），C群流脑IgG抗体的总阳性率为23．7％（203／856）；健康人群脑膜炎奈瑟氏菌（简称Nm）的带菌率为0．65％（7／1077）。健康人带菌以B群Nm为主。结论：广东省不同年龄组健康人群A群流脑IgG抗体的阳性率维持在较高水平，而Nm的带菌率也很低，提示大部分人对A群流脑有免疫作用。但我省健康人群C群IgG抗体水平较低，一旦有传染源传人，易引起局部暴发流行。

广东省伤寒沙门菌株的脉冲场凝胶电泳分型研究

目的运用脉冲场凝胶(PFGE)电泳研究广东省伤寒沙门菌的分子流行病学。方法用PFGE对菌株进行分子分型,所得结果用Bionumerisc V4．0软件进行聚类分析。结果来自广东省6个地区的51株伤寒沙门菌,根据电泳图谱分析,可分为45个PFGE型别,菌株间的相似值在38．27％～100．00％,6个地区间没有同源的菌株,同一个地区不同年份也没有同源的菌株,而同一地区同一年份可出现同源的菌株。结论PFGE是一种敏感的研究伤寒沙门菌分子流行病学的基因分型方法。

华南地区常见的8种食源性致病菌检测基因芯片研制

目的研制能同时检测华南地区常见8种食源性致病菌的oligo基因芯片。针对8种食源性致病菌基因组上的特征性靶区域,设计70mer的寡核苷酸探针。方法分别以检测8种食源性致病菌中每一种菌的检测探针组构建一个亚阵列;然后再将上述的8个亚阵列构建为一个大阵列,并命名为Biosafood-8芯片。用Biosafood-8芯片检测18个种属样品后进行PPR的排序与比较。结果 LM亚阵列检测李斯特菌属的3个李斯特菌LM、Lin和Liv的PPR分别为68.8%、51.8%和59.6%,而其它非李斯特菌属样品的PPR都在43%以下;VC亚阵列检测VC样品的PPR为54.1%,而其它非VC样品的PPR都在17.2%以下;VP亚阵列检测VP样品为66.7%,而其它非VP样品都在24.2%以下;Sal亚阵列检测Sal样品为55.9%,而其它非Sal样品都在50.5%以下;Shi亚阵列检测Shi样品为53.8%,而其它非Shi样品都在36.6%以下;SA亚阵列检测SA样品为65.2%,而其它非SA样品都在22.7%以下;CJ亚阵列检测CJ和CC分别为88.2%和58.8%,而其它非弯曲菌样品都在35.3%以下;EC亚阵列检测EC样品为47.9%,而其它非EC样品都在41.6%以下。结论用Biosafood-8芯片检测18个不同种属来源的已知参考生物样品,从全阵列和芯片上每一个亚阵列两个不同的水平,都证实该芯片能够通过集成的8个目标菌检测探针亚阵列,在整体芯片阵列水平,清晰而又明确地区分目标致病菌样品和非目标致病菌样品,特异而又准确地显示被检测样品的目标菌种属。

广东省2004年流脑监测结果分析

目的了解广东省流脑流行特征的变化,预测流脑发病的趋势,为合理地制定有效的预防措施提供依据. 方法2004年对全省各县、市进行流脑流行病学监测.选择广州、湛江、韶关及东莞4个市作为流脑重点监测点,在流脑流行前期(10～11月)各监测点按流脑监测方案采集市内0～、5～、10～、15～、25～、35～及45岁以上共7个年龄组人群的咽拭子进行健康人群带菌调查.同时对2004年广东省发生的一起流脑局部暴发疫情进行深入调查. 结果2004年4个监测点健康人群脑膜炎奈瑟菌(简称Nm)的带菌率为0.75%(14/1 876),健康人带菌以B群Nm为主.全省共报告流脑27例,死亡1例.2004年3月广东省发生一起由C群Nm引起的暴发疫情,共发病3例,调查发现患者密切接触者、发病分厂的外来工及相邻厂外来工总的Nm带菌率高达13.1%(14/107),检出B群、C群及1892群Nm,未检出A群Nm.用Epsilometer test法对所分离到的15株各群Nm菌株进行药物敏感试验,发现所有菌株均对青霉素及氯霉素敏感,对甲氧苄氨耐药. 结论广东省流脑发病以散发为主,健康人群Nm的带菌率很低,但流行菌群发生变化.今后要加强流脑的病原学检测,并适当对流脑预防控制措施作相应调整,一旦发生C群流脑疫情,应对重点人群应急接种A+C流脑多糖疫苗,对密切接触者选择敏感的药物进行预防性服药.

广东省2002～2003年流脑监测结果分析

目的 了解广东省流行性脑脊髓膜炎 (流脑 )流行特征 ,预测流脑发病趋势 ,为合理制定有效的预防措施提供依据。方法 收集广东省 2 0 0 2～ 2 0 0 3年流脑发病疫情报告资料。选择广州、湛江、韶关及东莞 4个市作为流脑重点监测点。每年在流脑流行前期 (10～ 11月 )按流脑监测方案采集各市内各年龄组人群的咽拭子及静脉血 ,分别进行健康人群带菌调查及人群抗体水平检测。结果 2 0 0 2～ 2 0 0 3年全省共报告流脑病例 4 7例 ,其中本省籍 14例 ,外省籍 33例 ;本省籍 14例中以学生为多 (6例 ) ,年龄以 10～ 14岁组为多 (共 5例 )。 2 0 0 2年 4个监测点流脑IgG抗体的总阳性率为 76 5 %(1118/14 6 1) ,健康人群脑膜炎奈瑟菌 (Nm)的带菌率为 1 0 4 % (16 /15 32 )。 2 0 0 3年各监测点健康人群Nm的带菌率为 1 5 6 % (2 3/14 74 )。健康人群带菌以B群Nm为主。结论 广东省流脑发病以散发为主 ,健康人群Nm的带菌率很低 ,流脑IgG抗体的总阳性率维持在较高的水平 ,提示大部分人对流脑有免疫力。

广东省传染性非典型肺炎病例的SARS冠状病毒分离株的分子生物学鉴定

目的 对广东省部分传染性非典型肺炎 (SARS)病例的SARS冠状病毒分离株进行鉴定 ,并初步建立SARS冠状病毒PCR检测方法。方法 采集临床诊断为SARS病例的咽漱液标本 ,进行多种细胞分离培养 ,对出现病变的细胞分离物采用冠状病毒特异引物通过逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)及巢式聚合酶链反应 (Nested PCR)进行扩增 ,并对部分扩增片段进行序列测定 ,应用DNASTAR软件分析比较。同时采用间接免疫荧光 (IFA)和ELISA法检测上述患者血清中SARS冠状病毒IgG抗体。结果 对 2 1例SARS患者的细胞分离物进行PCR扩增 ,结果均阳性 ,其中 1 2份患者咽漱液标本PCR扩增结果也阳性 ,序列测定及基因分析表明 ,广东省SARS病例的病毒分离株为冠状病毒 ,其基因序列与WHO公布的SARS基因序列一致 ,氨基酸序列与目前已知的冠状病毒同源性为 5 8%～ 76 %。同时对 2 1例患者进行血清学检测 ,其中IFA检测有 9例阳性 ,ELISA检测有 1 2例阳性。结论 从广东省部分SARS病例标本中分离的病毒株是一种新的冠状病毒 ,PCR检测具有早期。

珠江河口水体霍乱弧菌污染状况调查研究

目的：了解珠江河口水体O1/O139群霍乱弧菌的污染情况,提出改善水体霍乱弧菌监测的建议,为采取针对性措施预防控制霍乱的发生和流行提供依据。方法：根据历年霍乱监测资料和疫点分布状况,在珠江水系广州段选择设立24个采样点,每月采集水体标本进行O1/O139群霍乱弧菌分离培养,对分离得到的阳性菌株进行血清分型、噬菌体-生物分型、PCR检测毒力基因、K-B法药敏试验。结果：2006年3月-2007年2月共采取862份水体样本,其中有67份检出O1或O139群霍乱弧菌,检出率为7.77%,血清型以O1群为主,尤以稻叶型占优;O1群菌株均为非流行株,2株O139群菌株检出ctx毒力基因;菌株耐药分析发现不同血清型菌株耐药谱有所差异。结论：O1/O139群霍乱弧菌在珠江河口水体环境中广泛存在,常年均可从水体中分离获得。必须加强环境水体及海水产品霍乱弧菌监测,及时了解其污染状况,以便采取针对性措施预防控制霍乱的发生和流行。

广东省流行性脑脊髓膜炎流行菌群变化趋势分析

目的研究流行性脑脊髓膜炎（流脑）流行菌群的变迁趋势。方法对广东省1966—2009年分离的656株流脑菌株的血清群构成进行分析。结果656株流脑菌株中，A群占24％、B群占47％、C群占9％，其它群占20％。1966—2001年的447株流脑菌株中，A群占22％、B群占46％、C群占6％，其它群占26％；2002—2009年的209株流脑菌株中，A群占28％、B群占53％、c群占13％，其它群占6％。A群流脑病人来源菌株比例由85％下降至47％，B群流脑病人来源菌株比例由15％上升至28％，c群流脑病人来源菌株比例由0％上升至22％。健康人群鼻咽部携带C群流脑菌株的比例由7％上升至11％，A群由9％上升至24％，B群由53％上升至58％。结论广东省流脑病人及健康人群携带菌株中，C群、B群流脑菌株的比例呈上升趋势，流脑流行菌群正在发生从A群到C群、B群的变化。

一起流脑爆发菌株脉冲场凝胶电泳的分子分型研究

目的运用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对一起C群流脑爆发疫情所分离的菌株进行同源性分析。方法对分离的脑膜炎奈瑟菌进行血清学鉴定后,并进行PFGE分析和确定分子分型。结果在疫情中分离的6株C群脑膜炎奈瑟菌菌株的PFGE谱型相同,聚类图谱分析相似性为100%,而与韶关翁源1株从健康人分离到的菌株谱型完全不同。结论PFGE可以作为爆发流行中对细菌进行鉴定和确定菌株的感染来源。

广东省传染性非典型肺炎病原体的分离鉴定及检测结果分析

目的 对引起广东省传染性非典型肺炎 (SARS)的病原体进行分离鉴定 ,并分析各市首发病例、死亡病例、各个阶段病例的检测情况 ,为该病的诊断和防治提供依据。方法 对 2 0 0 3年 1～ 5月份采自广州、肇庆、江门、汕头、中山、河源、珠海等地的SARS病例的咽拭子、咽漱液等标本 ,用Vero E6、Vero、MDCK、Hep 2、传代人胚肺 5种细胞进行分离培养 ,并使用电镜、间接免疫荧光 (IFA)、PCR及基因序列测定等方法对分离物进行鉴定 ,应用ELISA、荧光定量PCR等技术分别对各个阶段SARS病例的血清及咽拭子等标本进行检测。结果 5种细胞接种上述病人咽拭子标本后 ,均有部分出现细胞病变 ,电镜观察可找到冠状病毒样颗粒。分离物扩增出冠状病毒特异基因片断。分离物与病人恢复期血清抗体发生特异性反应。 1～ 5月的病例标本SARS冠状病毒PCR阳性率分别为 1 0 0 0 0 % (2 / 2 )、76 1 9%(1 6 / 2 1 )、71 74 % (33/ 4 6 )、2 0 0 0 % (1 8/ 90 )、6 36 % (1 1 / 1 73) ;SARS冠状病毒抗体IgG阳性率分别为 1 0 0 0 0 % (2 / 2 )、78 5 7% (1 1 / 1 4 )、5 8 33% (1 4 / 2 4 )、30 3% (1 0 / 33)、1 2 5 0 % (9/ 72 )。河源、佛山、肇庆、中山、东莞、珠海六市首发病例均检测出SARS冠状病毒IgG抗体。 1