中国男性复杂染色体重排特征及携带者生育情况分析

目的:探讨中国人群中男性复杂染色体重排(CCR)携带者CCR类型及特征,并分析其对男性生育的影响。方法:用G带技术对因生育问题就诊的患者外周血淋巴细胞进行核型分析。检索1984年1月至2013年11月CNKI以及万方数据库有关CCR的文献,对有生育信息的男性CCR携带者的CCR类型及生育情况进行统计、分析。结果:1 625对夫妇中共检出男性CCR 2例;数据库中检索到有生育信息的男性CCR携带者47例。49例CCR中有3方重排17例(34.7%),双重双向易位17例(34.7%),特殊CCR 15例(30.6%),3种类型的发生率无明显差别(P>0.05)。对临床资料的分析发现19例(38.8%)男性CCR携带者表现无精或少精子症导致的不育,其余30例(61.2%)男性CCR携带者的妻子共妊娠87次,自然流产或胚胎停育66次,占75.9%,畸胎死胎、早夭畸形儿8次(9.2%),生育表型正常后代13个(14.9%)。对CCR累及的染色体及断裂点分析发现,累及6、7、8、11和16号染色体的CCR多出现不良妊娠,而累及10和14号染色体的CCR主要表现为生精障碍;断裂点1p22,1q25,2q31,2q33,5p13,5q35,6q23,8q13和20p13出现3次以上,其中断裂点1p22主要见于生精障碍者,断裂点2q31,5q35,和8q13多见反复流产。结论:CCR非常少见,表型正常的男性CCR携带者多因存在生育问题而被发现。男性CCR携带者不育的机率高、妻子出现异常妊娠的风险高,生育正常孩子的机会很小。此外,CCR累及的染色体及断裂点位置影响携带者的生育能力,某些染色体断裂点位置可能在配子形成过程中起关键作用。

肺炎支原体肺炎患儿外周血CD4^+T淋巴细胞表面IL-18Rα的表达

目的探讨肺炎支原体肺炎(MPP)患儿外周血CD4+T淋巴细胞表面IL-18Rα表达的意义。方法采用流式细胞术测定35例MPP患儿外周血T淋巴细胞亚群(CD3/CD4/CD8)和CD4+T淋巴细胞表面IL-18Rα的表达水平,并与健康对照组比较。结果MPP患儿T细胞亚群与健康对照组相比,CD3+细胞百分率降低(P<0.05),51.4%的MPP患儿CD4+/CD8+在1.0~1.9的范围之外。急性期MPP组CD4+T淋巴细胞表面IL-18Rα的表达较正常对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);恢复期与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。恢复期表达水平下降,与急性期比较差异有统计学意义(P<0.05)。T细胞亚群异常组与正常组相比,CD4+T淋巴细胞IL-18Rα表达明显增高(P<0.01),T细胞亚群正常组与健康对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论MPP患儿存在细胞免疫功能紊乱,外周血T淋巴细胞存在Th1/Th2失衡,急性期表现为Th1优势应答。

应用SYBR GreenI荧光定量RT-PCR测定糖尿病大鼠肾皮质TGF-β1表达水平

SYBR GreenI荧光定量RTPCR法检测正常、糖尿病和牛磺酸治疗组大鼠TGFβ1mRNA/βactinmRNA比值为(7.0±0.8)×10-3,(64.4±8.0)×10-3和(16.7±2.0)×10-3;终点法RTPCR检测比值分别为0.28±0.12,0.58±0.16和0.43±0.10。与终点法RTPCR相比,TGFβ1mRNASYBRGreenI荧光定量RTPCR实时检测法,方便快捷,敏感特异。

抗CyP A自身抗体与SLE关系的探讨

以ｒｈＣｙＰＡ为包被抗原，用间接ＥＬＩＳＡ检测了４５例ＳＬＥ病人血浆抗ＣｙＰＡ自身抗体的ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ三种类型，并探讨了此抗体与多项临床指标的相关性。结果显示，ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ三类抗ＣｙＰＡ自身抗体的阳性率分别为３６％，２０％，１８％，总阳性率为４８％。存在皮肤粘膜损害、白细胞减少、发热。

牛磺酸对糖尿病大鼠肾脏氧化和抗氧化系统的影响

目的 :探讨牛磺酸对糖尿病大鼠肾脏氧化和抗氧化系统的影响。方法 :链脲佐菌素 (STZ)诱导糖尿病 (DM)大鼠模型 ,牛磺酸给予DM大鼠 4周后 ,检查肾皮质抗氧化指标超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH -Px)和脂质过氧化物指标丙二醛 (MDA)水平 ,并检测血糖、尿酸及尿白蛋白排泄量。结果 :给予牛磺酸的DM大鼠与DM大鼠血糖水平无差别 ,DM大鼠血尿酸水平及尿白蛋白排泄量明显高于对照组 (P <0 .0 1 ) ,而给予牛磺酸的DM大鼠血尿酸水平下降 (P <0 .0 1 ) ,与正常对照无差别 ,尿白蛋白排泄量也减少 (P <0 .0 5 ) ,但仍高于正常对照 (P <0 .0 1 )。DM大鼠肾皮质SOD和GSH -Px活性均与对照组无明显差别 ,肾皮质MDA水平则明显高于对照组 (P <0 .0 1 ) ;给予牛磺酸的DM大鼠SOD和GSH -Px活性明显高于未处理的DM大鼠及对照组 (P <0 .0 5 ) ,肾皮质MDA水平则明显低于DM大鼠 (P <0 .0 5 ) ,但仍高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论 :牛磺酸能增强DM大鼠肾皮质的抗氧化能力 ,减轻DM大鼠肾皮质氧化应激 (OS) ;降低DM大鼠血尿酸水平 。

大鼠TGF-β1 mRNA表达水平的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法的建立

目的 建立检测大鼠TGF- β1mRNA表达水平的SYBRGreenⅠ荧光定量RT- PCR方法。方法 摸索SYBRGreenⅠ工作液的配制方法,筛选PCR反应液,优化反应中引物和MgCl2 的浓度,以actin为对照,建立大鼠TGF -β1mR NA表达水平的SYBRGreenⅠ荧光定量RT PCR方法并检测大鼠肾皮质TGF -β1mRNA表达水平。结果 SYBRGreenⅠ工作液,4 0倍水溶液稳定性好,最佳反应稀释度为1∶1 0 0 0 0。大鼠TGF β1表达水平的SYBRGreen荧光定量PCR方法,TGF- β1和actin的最佳MgCl2 反应浓度分别为2 5mM和3 5mM ,引物浓度分别为0 . 8μM和0. 5μM ,特异扩增产物的熔解温度分别为88 1和88 .6℃,因此选择在85℃时收集荧光信号。正常大鼠TGF- β1的Ct值在2 9 0 3,actin的Ct值在2 4 .86 ,扩增效率分别为0 . 995和1 . 0 8。结论 通过优化反应条件和特异性分析,成功地建立了特异、敏感的大鼠TGF- β1mRNASYBRGreenⅠ荧光定量RT PCR。SYBRGreenⅠ荧光定量PCR快速、敏感、特异、经济,可以满足临床和科研的需要。

人乳腺癌细胞株KLK5 mRNA的表达及雌激素的调节作用

目的探讨雌激素对雌激素受体阳性人乳腺癌细胞株MCF-7和B37组织激肽释放酶5(KLK 5)mRNA的表达水平,以及雌激素对KLK5 mRNA表达水平的影响。方法分别取生长良好的MCF-7和B37细胞,在不同浓度的雌激素(17-βE2)存在下培养72小时后,收集细胞,提取总RNA,采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应,检测KLK5 mRNA表达水平及变化。结果在未经刺激的乙醇对照组,MCF-7细胞KLK5 mRNA的相对表达水平(KLK5 mRNA/GAPDH mR-NA)为(3.23±0.51)×10-5,B37细胞KLK5 mRNA表达水平为(3.13±0.62)×10-4。B37细胞KLK5 mRNA表达水平高于MCF-7细胞。当17-βE2浓度10-11mol/L以下时,MCF-7和B37细胞中KLK5 mRNA表达水平与乙醇对照组无明显差异(P<0.05)。随17-βE2浓度的增高,MCF-7和B37细胞中KLK5 mRNA的表达呈递增趋势,各组与乙醇对照组相比差异有显著意义(P<0.01)。结论雌激素对人乳腺癌细胞株MCF-7和B37细胞的KLK5 mRNA表达有剂量依赖的上调作用。

雌激素对人乳腺癌细胞株MCF-7 KLK6 mRNA和蛋白表达水平的影响

目的:探讨雌激素与其拮抗剂三苯氧胺对雌激素受体阳性人乳腺癌细胞株MCF-7组织激肽释放酶6(KLK 6)mRNA和蛋白(hK6)表达水平的影响。方法:取生长良好的MCF-7细胞,在不同浓度的雌激素(17-βE2)和三苯氧胺存在下培养72 h后,收集细胞,分别采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应和流式细胞术,检测KLK6 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:实时荧光定量RT-PCR表明,当17-βE2浓度在10-12mol/L时,与乙醇对照组无明显差异(P>0.05),17-βE2浓度在10-10mol/L和10-8mol/L时,KLK6 mRNA的相对含量显著少于乙醇对照组;流式细胞术分析表明,代表hK6含量的相对荧光强度(AFI)显著低于乙醇对照组(P<0.01)。三苯氧胺(10-6mol/L)作用组KLK6 mRNA的相对含量显著高于对照组(P<0.01);hK6含量与对照组相比差异显著(P<0.01)。结论:雌激素对MCF-7 KLK6 mRNA和蛋白表达水平有一定的下调作用,而三苯氧胺作用相反。

复杂染色体重排

复杂染色体重排（CCR）是指涉及两条以上染色体、至少有三个断裂点的染色体结构重排。CCR是非常罕见的事件,到2011年为止,国外仅有255例报告[1],国内也不多[2]。尽管极其罕见,由于CCR的携带者可有多种表现型,包括表型正常,男性不育和精神发育迟滞和/或先天性畸形,CCR的临床诊断也非常重要。随着FISH等分子遗传学技术的应用,

结直肠癌组织KLK5 mRNA表达及其与临床病理参数的关系

目的对正常结直肠组织和癌组织KLK5 mRNA进行定量,并分析其表达与部分临床病理特征的关系。方法应用荧光实时PCR(RT-PCR)技术检测51例结直肠癌切除的癌组织及相应正常组织中KLK5基因mRNA的表达。结果67%(33/51)的患者结直肠癌组织可检测到KLK5 mRNA表达。KLK5基因表达与淋巴结转移和临床分期显著相关(P<0.05)。结论KLK5基因在结直肠癌组织中为异常高表达,并与淋巴结转移和临床分期显著相关。

PCR技术在基因突变分析和定型中的应用

聚合酶链反应 (PCR)技术的应用在基因突变分析和定型领域引起了翻天覆地的变化 。

Line-Gene实时荧光定量PCR不同结果分析模式对检测结果的影响

目的探讨实时荧光定量PCR不同结果分析模式对检测结果的影响.方法用Line-Gene FQD-33A型荧光定量PCR检测系统检测本院门诊和病房乙肝病人血清HBV DNA 77份,分别用最大二阶导数法和样点拟合法进行结果分析.结果发现两种分析方法的总体相关性较好(r= 0.978). 但HBV DNA拷贝数含量＜105时, 两种模式的相关性差(r= 0.706),此时,最大二阶导数法得出的数值要比样点拟合法低(t=2.61,P＜0.05),且易出现假阴性结果.结论虽然样点拟合法步骤较多,但其结果更可靠,因此进行结果分析时,建议使用样点拟合法.而且当样本中HBV DNA拷贝数＜105时只能使用样点拟合法进行结果分析.

标本扩增效率的计算及其对HBV DNA定量结果的影响

目的建立分析标本扩增效率的方法，分析其对HBV DNA定量结果的影响。方法应用分析软件提供的样点拟合法及对数荧光一循环数坐标图，计算得到Ct，HBV DNA拷贝数以及每一标本的扩增效率。分析40个HBV DNA拷贝数在10^4-10^8／ml的标本的扩增效率，井用得到的标本实际扩增效率加以校正。结果4个标准的扩增效率分别为0．80，0．80，0．84和0．85。标本的扩增效率在0．59—0．85之问，其中30份（75％）在0．7—0．85之间，8份（20％）在0．65，0．70之问，其余2份在0．65以下。部分校正后的HBV DNA定量结果比校正前高一个数量级。结论标本与标准的扩增效率不一定相同，标本扩增效率的降低导致标准曲线定量结果偏低，有必要用标本的实际扩增效率对结果进行校正。

SYBR Green实时荧光定量PCR技术平台的建立

目的建立SYBRGreen实时荧光定量PCR技术平台。方法通过摸索SYBRGreen工作液的配制方法,经典PCR检测HBVDNA方法转为SYBRGreen实时荧光定量PCR方法及建立大鼠TGF-bate1mRNA表达水平的SYBRGreen实时荧光定量PCR方法。结果SYBRGreenⅠ工作液,40×H2O溶液稳定性好,最佳反应浓度为1∶10000。HBVDNA的SYBRGreen实时荧光定量PCR方法,最佳的MgCl2反应浓度4.0mmol,引物浓度0.5μmol,81℃时收集荧光信号。定量分析用标准曲线斜率为-3.32,相关系数为-0.994,误差为0.016。大鼠TGF-bate1表达水平的SYBRGreen实时荧光定量PCR方法,TGF-bate1和Bate-actin的最佳MgCl2反应浓度均为3.5mmol,引物浓度前者为0.8μmol,后者为0.5μmol,在87℃时收集荧光信号。靶基因TGF-bate1mRNA的相对量用下述公式计算:(1+Etgf)Ct1/(1+Eact)Ct2。结论初步建成了可检测DNA和mRNA的SYBRGreen实时荧光定量PCR技术平台。

肾移植患者手术前后外周血CD4^+T淋巴细胞IL-18Rα的表达及意义

目的:探讨外周血CD4+T淋巴细胞IL-18Rα表达在肾移植急性排斥反应中的作用及临床意义。方法:采用分别检测肾移植患者手术前、手术后1w及2w外周血CD4+T淋巴细胞IL-18Rα表达量,并进行比较分析。结果:肾移植患者手术前外周血CD4+T淋巴细胞IL-18Rα表达量明显高于正常对照组(P<0.01)。急性排斥组手术后1w、2w与手术前比较外周血CD4+T淋巴细胞IL-18Rα表达量明显增加(P<0.01)。稳定组手术后1w与手术前比较外周血CD4+T淋巴细胞IL-18Rα表达量明显增加(P<0.01),手术后2w则下降至手术前水平(P>0.05)。结论:肾移植患者手术前、手术后存在Th1/Th2失衡,表现为Th1优势应答。肾移植手术前后监测外周血CD4+T淋巴细胞IL-18Rα表达量变化对于判断急性排斥反应有一定临床意义。

荧光实时逆转录PCR定量研究进展

荧光实时逆转录PCR广泛应用于稳态mRNA水平的定量 ,并且它已经成为基础研究、分子医学和生物技术的一种必不可少的实验工具。用此技术定量具有范围宽、敏感性高、精确度高 ,无PCR后处理步骤 ,避免了交叉污染 ,且产出率高 ,可以进行多重检测等特点。然而要成功地应用该技术并不是一件容易的事。现对方法学建立、扩增效率以及标准化等方面作一综述。