顺铂处理后肺癌细胞剪接因子SRSF1 mRNA异构体的变化

目的:观察不同浓度顺铂处理后肺癌细胞中剪接因子(SRSF1)mRNA异构体的变化,并寻找其中发挥主要抗凋亡作用的异构体。方法:使用不同浓度的顺铂处理肺癌细胞系A549和H1299后提取总RNA,设计SRSF1基因不同的引物(F1∶R1、F1∶F2及F2∶R1)进行RT-PCR以检测其mRNA剪接异构体的变化。结果:在A549和H1299细胞中检测到了5种异构体(Isoform-a、Isoform-b、Isoform-d、Isoform-e、Isoform-f),且主要表现为随着顺铂浓度的升高,非编码蛋白的mRNA异构体的比例明显上升,主要是Isoform-d的上升;而编码蛋白的mRNA异构体所占比例明显下降,主要是Isoform-a下降;同时SRSF1的总mRNA水平也是逐渐降低的。结论:在顺铂处理下,肺癌A549和H1299细胞中的SRSF1的转录水平被下调,其mRNA选择性剪接向下调编码蛋白的mRNA异构体的方向转变,造成编码蛋白的mRNA异构体降低的主要原因为Isoform-a,该异构体可能是SRSF1基因发挥抗细胞凋亡作用的主要异构体。

顺铂处理癌细胞后CDC25 mRNA剪接异构体的变化

目的:探讨顺铂(CDDP)对肺癌、宫颈癌细胞和人胚肾细胞CDC25磷酸酶mRNA的选择性剪接的影响。方法:将培养的肺癌A549和H1299细胞,宫颈癌C33A、SiHa、CaSki细胞及人胚肾293FT细胞分为实验组和对照组,实验组细胞用CDDP处理,对照组细胞用DMSO处理,设计CDC25A、CDC25B、CDC25C引物,利用RTPCR检测CDC25 mRNA剪接异构体的表达变化。结果:与对照组细胞比较,随着CDDP浓度的增加,肺癌A549和H1299细胞,宫颈癌C33A、SiHa和CaSki细胞以及人胚肾293FT细胞中CDC25B、CDC25C mRNA剪接异构体比例有明显变化,而CDC25A mRNA剪接异构体变化不明显。结论:CDDP引起细胞DNA损伤时,可发生CDC25mRNA选择性剪接异构体的比例发生变化,这可能与肿瘤药物治疗时的抗性有关。

构建稳定表达pLVshRNA-EGFP-EBVsponge的SNU719细胞系

目的:构建稳定表达pLVshRNA-EGFP-EBVsponge的SNU719细胞系。方法:合成能与EB病毒(EBV)编码的EBV-miR-BART16、EBV-miR-BART4-5p、EBV-miR-BART5-5p及EBV-miR-BART22 miRNAs特异结合的miRNA海绵(miRNA sponge)序列,用PITA软件预测构建的sponge是否结合非特异性miRNAs;构建pLVshRNA-EGFP-EBVsponge载体,与慢病毒包装质粒pH1、pH2共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,感染SNU719细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定表达细胞株;Real-time PCR检测细胞中EBV-miR-BART16、EBV-miRBART4-5p、EBV-miR-BART5-5p及EBV-miR-BART22表达水平。结果:成功构建pLVshRNA-EGFP-EBVspong(命名为pEGFP-EBV-sp);与对照组相比,pEGFP-EBV-sp组中4种microRNA表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建稳定表达pEGFP-EBV-sp的SNU719细胞系。

雌鼠摄入咖啡因对妊娠和仔鼠神经反射能力的影响

目的:了解雌鼠因摄取咖啡因对胎鼠体质量及对仔鼠神经反射功能的影响。方法:成年昆明小鼠100只,雌雄按4∶1随机合笼,分为高、中及低实验组和对照组;实验组雌鼠分别给予100、25及6.25 mg/(kg·d)剂量咖啡因灌胃,对照组雌鼠给予等量双蒸水灌胃至孕鼠生产前;观察每组雌鼠生活状态,记录非受孕雌鼠合拢25 d的体质量、5个发情周期内受孕雌鼠数量及产仔数量,并于仔鼠出生1周时观察的仔鼠外形畸形情况及翻正实验达标时间。结果:与对照组比较,高、中实验组雌鼠的体质量增长率降低(P<0.05或P<0.01);与对照组比较,随着咖啡因的摄入剂量增加,雌鼠受孕率、产仔数降低,死胎数和死胎率增加;高、中、低剂量组雌鼠受孕率低于对照组,死胎数及死胎率高于对照组(P<0.05或P<0.01);高剂量组产仔数低于对照组(P<0.05),仔鼠出生1周时未见外形畸形;高、中剂量组仔鼠平面翻正反射达标时间显著高于低剂量组和对照组(P<0.01)。结论:雌鼠孕前和孕期摄入咖啡因可明显抑制体质量增长并导致怀孕率下降、死胎率升高,且能一定程度的降低仔鼠神经反射能力。

顺铂处理后几种hTERT mRNA剪接异构体的变化

目的:利用顺铂处理肺癌、宫颈癌细胞和人胚肾细胞,检测人类端粒酶逆转录酶催化亚单位(hTERT)mRNA的选择性剪接是否发生变化。方法:将培养的肺癌A549和H1299细胞,宫颈癌C33A、SiHa和Ca Ski细胞及人胚肾293FT细胞分为实验组和对照组,用顺铂处理实验组细胞,DMSO处理对照组细胞;设计hTERTα+β+、α+β-、α-β+、INS3及DEL[e2]引物,提取两组细胞的总RNA,利用RT-PCR检测hTERT mRNA剪接异构体表达。结果:与对照组细胞相比,随着顺铂浓度的增加,肺癌A549和H1299细胞,宫颈癌C33A、SiHa和Ca Ski细胞以及人胚肾293FT细胞中hTERTα+β-和INS3异构体比例升高,而DEL[e2]异构体变化不明显。结论:在顺铂引起的DNA损伤情况下,细胞可利用hTERT mRNA选择性剪接调控机制进行调节,通过改变不同异构体的量和所占比例,从而调节端粒酶功能活性。

ERCC1新的mRNA剪接异构体及其在顺铂处理细胞中的变化

为了考察用顺铂处理肺癌和宫颈癌细胞后,ERCC1的mRNA选择性剪接是否发生变化,通过提取处理的肿瘤细胞和对照细胞的总RNA,进行RT-PCR检测,对出现的剪接异构体目的条带进行TA克隆、测序鉴定。结果发现了2个新的ERCC1的mRNA剪接异构体,其中缺失外显子7-9的异构体在所检测的多种癌细胞中普遍存在,并且在顺铂处理下,其所占比例会随顺铂浓度的升高而增加。该异构体的变化揭示细胞可能会通过pre-mRNA选择性剪接调控ERCC1的功能。

复制状态下EB病毒对宿主细胞中ZEB1基因表达的影响

目的:探究EB病毒(EBV)在潜伏感染和裂解复制状态下对ZEB1、ZEB2、ZEB1-AS1基因表达的影响。方法:将EBV相关癌细胞系Raji、SNU-719、AGS分为实验组(TPA及Na B诱导EBV)和对照组(加入等体积DMSO),将稳定表达p LVshRNA-EGFP-EBVsponge的SNU-719细胞系设为sponge组,未经转染RNA sponge的SNU-719细胞系设为control组(2组细胞均使用TPA及Na B进行诱导),TPA及Na B处理48 h后提取细胞总RNA进行RT-PCR,从mRNA水平检测ZEB1、ZEB2及ZEB1-AS1基因的表达。结果:与对照组相比,EBV复制期间,在Raji、SNU-719、AGS细胞中ZEB1 mRNA表达量显著升高(P<0.05),ZEB1-AS1 mRNA的表达量仅在AGS细胞中显著降低(P<0.05),在SNU-719和AGS细胞中未检测到ZEB2的表达;稳定表达p LVshRNA-EGFPEBVsponge的SNU-719细胞比未转染RNA sponge的SNU-719细胞,ZEB1表达量明显降低(P<0.05)。结论:EBV依靠自身编码的miRNA在复制期间促进ZEB1的表达,同时也对ZEB1-AS1有抑制作用。

WEE1激酶及其抑制剂在抗肿瘤治疗中的应用进展

WEE1激酶是一种细胞周期调节蛋白,能调控细胞周期蛋白依赖性激酶1(cyclin-dependent kinase 1,CDK1)的磷酸化状态,从而调节CDK1与细胞周期蛋白B(cyclin B)复合物的活性从而实现对细胞周期的调控,且对DNA损伤检查点具有重要的调节作用。WEE1是G2/M期阻滞的关键基因,起着重要的监测作用,在一些癌症中过表达,抑制或下调WEE1激酶均能引发有丝分裂灾难,因此WEE1激酶抑制剂可能在抗癌治疗中有关键作用。在癌症的治疗过程中,WEE1抑制剂与DNA损伤剂、化学药物等联合使用会得到比单独使用更为有效,且在p53缺失的癌细胞中能发挥更好的效果。目前WEE1已成为许多癌症治疗的关键靶点之一,其抑制剂MK-1775已处于临床研究阶段,且能增强一些DNA损伤剂对p53缺失的癌细胞的杀伤能力。本文就WEE1激酶及其抑制剂在抗癌治疗中的应用作一综述。

免疫抑制剂的药物基因组学研究进展

患者对药物反应的个体差异,一般是由药物在体内的代谢酶、转运体和靶点编码基因的多态性引起的。因为免疫抑制剂的治疗窗口较窄,患者个体差异导致的不良反应和疗效不佳,都可能引起比较严重的后果,近年人们对于利用药物基因组学进行个体化治疗给予了很高的期待。大量研究已经揭示了多种基因多态性与免疫抑制剂的药代动力学和药效动力学(PK/PD)之间的关联。本文将围绕免疫抑制剂的PK/PD,选择部分具备临床参考意义的研究,简要综述与免疫抑制剂代谢、转运和活化过程相关的药物基因组学进展。