LncRNA PVT1对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞活性的影响及其机制

目的 探究长链非编码RNA(LncRNA)浆细胞瘤变体异位基因1(PVT1)对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞生物学行为的影响,并分析其潜在机制。方法 收集41例DLBCL病人和15例淋巴结反应性增生(RLH)病人的组织标本,体外培养人正常B淋巴细胞GM12878和人DLBCL细胞(OCI-Ly3、U2932、TMD8),对TMD8细胞进行转染,将其分为control组(只转染Lipofectamine-2000)、si-NC组(转染si-NC)、inhibitor-NC组(转染inhibitor-NC)、si-PVT1组(转染si-PVT1)、miR-145-5p inhibitor组(转染miR-145-5p inhibitor)、si-PVT1+miR-145-5p inhibitor组(转染si-PVT1和miR-145-5p inhibitor)。应用qRT-PCR方法检测各组细胞PVT1 mRNA和miR-145-5p表达,Western Blot方法检测CDK6蛋白表达,CCK-8法检测TMD8细胞增殖,流式细胞术检测TMD8细胞周期变化,Transwell实验检测TMD8细胞迁移和侵袭能力,RNA pull down和双荧光素酶报告基因法验证PVT1、miR-145-5p与细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)的靶向关系。结果 DLBCL组织PVT1 mRNA、CDK6蛋白的表达水平高于RLH组织,miR-145-5p表达低于RLH组织(t=14.264~24.445,P<0.05)。与GM12878细胞比较,OCI-Ly3、U2932、TMD8细胞中PVT1 mRNA、CDK6蛋白表达均增加,miR-145-5p表达均减少(F=69.557~234.718,P<0.05)。6组细胞PVT1 mRNA、miR-145-5p、CDK6蛋白表达及增殖率、G0/G1期细胞比例、S期细胞比例、迁移和侵袭细胞数差异有统计学意义(F=25.589~319.150,P<0.05);与control组比较,si-PVT1组细胞PVT1 mRNA、CDK6蛋白、增殖率、S期细胞比例、迁移和侵袭数量降低,miR-145-5p表达、G0/G1期细胞比例升高(P<0.05),miR-145-5p inhibitor组呈相反变化(P<0.05);下调miR-145-5p表达可减弱敲低PVT1对TMD8细胞恶性生物学行为的抑制作用(P<0.05)。过表达PVT1 mRNA增高CDK6蛋白表达、细胞增殖率、S期细胞比例、迁移和侵袭数量,降低miR-145-5p表达、G0/G1期的细胞比例(F=38.025~327.887,P<0.05)。miR-145-5p是PVT1的靶基因,且miR-145-5p可靶向下调CDK6表达。结论 敲低PVT1可抑制DLBCL细胞恶性生物学行为,其作用机制可能与调控miR-145-5p/CDK6轴有关。

miR-16-1抑制淋巴瘤细胞侵袭及对AKT1基因水平的作用机制

目的探讨miR-16-1对淋巴瘤细胞凋亡、侵袭及苏氨酸蛋白激酶B(ProteinkinaseB,Akt)1基因作用机制的研究。方法收集我院淋巴瘤患者肿瘤标准及正常胸腺标本,购自上海通派公司的人T淋巴瘤细胞Raji亚系,分为淋巴瘤组(未经转染)、NC组(Raji细胞转染miR-16-1-NC)、miR-16-1组(Raji细胞转染miR-16-1minmics)及药物对照组(Raji细胞联合1mmol/L+10μmol/L的地西他滨),分别采用qRT-PCR方法检测肿瘤及正常组织、Raji细胞的miR-16-1相对表达,分别采用MTT方法、流式细胞仪、Transwell小室方法检测Raji细胞存活率、凋亡率、侵袭数目及迁移率;分别采用双荧光素酶报告基因、qRTPCR及免疫印迹检测AKT1、张力蛋白同源基因(Phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)及其磷酸化表达。结果与正常组织表相比,miR-16-1在淋巴瘤病理组织中表达下调,组间比较存在差异(P<0.001);NC组和淋巴瘤组Raji细胞中miR-16-1表达无统计学意义(P>0.05),与NC组相比,miR-16-1组miR-16-1升高,存在差异(P<0.05);NC组和淋巴瘤组细胞存活率无意义(P>0.05),与NC组miR-16-1组细胞存活率降低存在差异(P<0.05);NC组和淋巴瘤组Raji细胞凋亡率无差异(P>0.05),miR-16-1组凋亡率高于NC组,组间无差异(P>0.05);NC组和淋巴瘤组Raji细胞侵袭数目无差异(P>0.05),miR-16-1组侵袭数目低于NC组,存在差异(P<0.05);NC组和淋巴瘤组Raji细胞迁移率比较无差异(P>0.05),miR-16-1组细胞迁移率低于NC组(P<0.05);miR-16-1组细胞中AKT1、PTEN基因及其磷酸化蛋白与NC组、淋巴瘤组比较均存在差异(P<0.05);双荧光素酶报告:与miR-NC相比,miR-16-1mimics可降低野生型AKT1活性,增加野生型PTEN的活性,说明AKT1、PTEN可能是miR-16-1的靶基因。结论人T淋巴瘤细胞Raji转染miR-16-1 mimics后,能够抑制其细胞活性,减少侵袭及迁移,加快凋亡,研究机制可能与调控AKT1、PTEN信号通路活性相关。

嵌合抗原受体-T细胞对弥漫大B细胞淋巴瘤患者Toll样受体4、核因子κB的影响研究

目的探讨嵌合抗原受体(CAR)-T细胞对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)的影响。方法选择焦作市人民医院收治的14例DLBCL患者作为观察组,给予CAR-T治疗;选择同期行常规化疗的14例DLBCL患者作为对照组,比较两组临床效果。结果三代细胞各培养时间点细胞体外增殖能力均明显高于二代细胞(P<0.05)。观察组患者治疗后完全缓解(CR)+部分缓解(PR)有效率明显高于对照组(P<0.05)。对照组治疗后3 d及7 d CD19+细胞比例均较治疗前提升(P<0.05);观察组治疗后3 d及7 d CD19+细胞比例均较治疗前显著降低(P<0.05),且显著小于对照组(P<0.05)。观察组治疗后3 d及7 d TLR4与NF-κB水平均较治疗前显著下降(P<0.05),且显著小于对照组治疗后(P<0.05)。结论CAR-T治疗DLBCL短期疗效显著,可有效降低TLR4与NF-κB水平。