氧化苏木素诱导人乳癌MCF-7细胞凋亡及其作用机制

【目的】探讨氧化苏木素对人乳癌MCF-7细胞的凋亡作用及其相关作用机制。【方法】MTT实验检测氧化苏木素对MCF-7细胞和正常乳腺上皮细胞MCF10A的细胞毒作用;AnnexinV/PI双染,流式细胞仪检测细胞凋亡的发生;荧光染料DiOC6染色,流式细胞仪检测细胞内线粒体膜电位的变化;Westernblot实验检测细胞浆细胞色素C及细胞内caspase-9和survivin蛋白的变化。【结果】氧化苏木素对人乳癌MCF-7细胞具有高效的细胞毒作用,而对正常乳腺上皮MCF10A细胞毒性较弱,IC50值分别为(7.15±0.43)μmol/L和(33.56±2.87)μmol/L;0、7.5、15、30μmol/L的氧化苏木素处理MCF-7细胞48h后,细胞的凋亡率从(3.37±0.66)%依次升高到(16.8±1.27)%、(31.31±4.22)%、(51.23±5.55)%;DiOC6染色流式细胞仪检测结果显示氧化苏木素可以剂量依赖性地降低线粒体膜电位;Westernblot结果显示氧化苏木素诱发了线粒体内细胞色素C的释放和细胞内caspase-9蛋白的剪切激活,同时氧化苏木素也可剂量依赖性地降低survivin蛋白的表达。【结论】氧化苏木素可通过线粒体通路诱导MCF-7细胞凋亡,下调survivin蛋白可能是其诱导细胞凋亡的主要机制。

氧化苏木素抑制人乳癌MCF-7细胞生长及其相关机制

目的:探讨氧化苏木素对人乳癌MCF-7细胞生长的抑制作用及其相关作用机制。方法:MTT实验检测氧化苏木素对乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制;PI染色流式细胞仪检测细胞周期的变化;Westernblot实验检测细胞CD1和β-Catenin蛋白的变化。结果:氧化苏木素显著性的抑制了人乳癌MCF-7细胞的生长,将细胞周期阻滞在G1期;0、7.5、15、30μmol/L的氧化苏木素处理MCF-7细胞48h后,G1期在整个细胞周期中的比率从(48.10±3.48)%依次增加到(59.56±4.31)%、(70.37±3.71)%、(77.75±6.12)%;Westernblot结果显示氧化苏木素下调了MCF-7细胞CD1和β-Catenin蛋白的表达。结论:氧化苏木素具有高效的抑制人乳癌MCF-7细胞增殖的活性,抑制Wnt/β-Catenin信号通路,下调CD1蛋白是其抑制细胞生长的主要机制。

氧化苏木素诱导肺癌A549细胞凋亡及对内质网应激通路的影响

目的探讨氧化苏木素对人肺癌A549细胞的凋亡作用及其对内质网应激通路的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)细胞毒实验检测氧化苏木素对肺癌A549细胞的毒性作用;流式细胞仪检测细胞凋亡的发生;Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和细胞质细胞色素C(cyto-c)表达的变化。结果氧化苏木素对人肺癌A549细胞的IC50值为(5.36±0.62)μmol/L。0、5、10、20μmol/L的氧化苏木素作用肺癌A549细胞48h后,细胞凋亡率分别为(1.15±0.32)%、(19.61±4.52)%、(30.18±6.35)%和(39.48±7.44)%,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,5、10和20μmol/L氧化苏木素作用肺癌A549细胞48h后,GRP78出现显著的升高,细胞质中的cyto-c也显著增加。结论氧化苏木素通过内质网应激途径诱导了人肺癌A549细胞凋亡。

EGFR／HER-2双受体酪氨酸激酶抑制剂拉帕替尼的研究进展

EGFR/HER-2是理想的抗肿瘤分子靶点。拉帕替尼(lapatinib)是口服的小分子EGFR/HER-2双受体酪氨酸激酶抑制剂,体内外的临床前试验证实了lapatinib的抗肿瘤活性,Ⅰ期临床研究显示了它的安全性,治疗侵袭、复发、炎性、脑转移乳癌的Ⅱ、Ⅲ期临床研究取得了可喜的成绩。随着对乳癌生物特性的理解,选择特异的肿瘤亚型(HER-2过表达),进行分子靶向治疗(例如lapatinib)正成为一种新的辅助治疗方案。

氧化苏木素抑制ABCB1介导肿瘤多药耐药活性的研究

目的探讨氧化苏木素对ABCB1介导的肿瘤多药耐药活性的影响抑制。方法 MTT试验检测氧化苏木素对人白血病K562及其耐药K562/ADR(ABCB1高表达)细胞的细胞毒作用;Annexin V/PI双染,流式细胞仪检测细胞凋亡的发生。结果氧化苏木素对耐药的K562/ADR细胞具有高效的细胞毒作用,氧化苏木素对K562和K562/ADR细胞的IC50值分别为(5.45±0.36)和(5.62±0.43)μmol/L,二者无显著性差异。流式细胞仪检测凋亡的结果显示:0、5、10、20μmol/L的氧化苏木素分别处理K562和K562/ADR细胞后,K562细胞的凋亡率从(3.41±0.55)%依次升高到(24.67±2.08)%、(40.33±3.51)%和(66.67±3.64)%,K562/ADR细胞的凋亡率从(2.82±0.57)%依次升高到(23.01±3.60)%、(38.23±4.06)%和(65.77±5.51)%。结论氧化苏木素克服了ABCB1介导的肿瘤多药耐药活性,诱导耐药细胞凋亡是其作用的机制。

肺癌A549耐药裸鼠移植瘤模型的建立

目的探讨肺癌A549耐药裸鼠移植瘤模型的建立方法,为克服肿瘤多药耐药新药的筛选提供体内研究的模型。为进行肿瘤的体内相关研究和抗癌药物的筛选提供实验基础。方法使用顺铂诱导肺癌A549细胞,以建立其多药耐药细胞株A549/DDP;MTT细胞毒实验检测细胞对顺铂的敏感性;皮下接种法建立裸鼠移植瘤模型;绘制移植瘤生长曲线,观察其增值特性。结果经过8个月的诱导建立了肺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP;MTT细胞毒实验结果显示与A549细胞比较,A549/DDP细胞对顺铂约耐药8倍,并且A549/DDP耐药细胞建立的裸鼠移植瘤仍然保持对顺铂的耐药性;生长曲线结果显示A549/DDP细胞裸鼠移植瘤的增殖速度与A549细胞之间没有显著性差异。结论成功建立了肺癌A549/DDP耐药细胞裸鼠移植瘤模型,可为肺癌耐药的研究提供较理想的动物模型。

β-Catenin信号转导通路在肺癌A549细胞顺铂耐药中的作用

目的建立肺癌A549顺铂多药耐药细胞株,研究肺癌耐药的机制。方法使用顺铂逐步增加剂量和间歇大剂量冲击相结合的方法诱导肺癌A549细胞,以建立其多药耐药细胞株A549/DDP;MTT细胞毒实验比较A549与A549/DDP细胞对顺铂的敏感性;绘制A549和A549/DDP细胞生长曲线,观察二者的增殖速度变化;Western blotting实验显示A549和A549/DDP细胞之间Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β和β-Catenin蛋白的表达改变。结果经过30周的诱导我们建立了肺癌A549细胞的顺铂耐药细胞株A549/DDP;MTT细胞毒实验结果显示顺铂对A549和A549/DDP细胞的IC50值分别为(1.37±0.09)和(11.63±0.74)μmol/L,与A549细胞比较,A549/DDP细胞对顺铂耐药8.47倍,生长曲线结果显示A549/DDP细胞的增殖速度与A549细胞没有显著性差异;Western blotting的结果显示A549/DDP细胞的Akt磷酸化水平升高,抑制了下游GSK-3β的活性,导致了细胞内β-Catenin蛋白的上调。结论建立了肺癌A549顺铂多药耐药细胞系A549/DDP,A549/DDP细胞中β-Catenin通路的激活与其耐药性的形成有一定的相关性。

PBL教学模式在法学专业《法医学》教学中的应用

基于问题的学习(Problem-based Learning,PBL)模式是以问题作为基础、学生作为教学主体的自学式、教师仅起引导作用的小组讨论式的教学模式。法医学是一门联系医学与法学等多种自然科学的综合性学科。初步尝试将PBL教学模式应用于法学专业的法医学教学中,这种教师和学生共同参与的双向式教学模式发挥出了其独特的优势。本文阐述了将PBL教学模式应用于法学专业法医学教学中的必要性;比较了传统教学法与PBL教学模式的区别;总结了法学专业的法医学教学中PBL教学模式实施的过程;并分析了其具体实施的利弊,为推广PBL教学模式在法学专业法医学教学中的应用奠定了基础。

案例教学模式在《法医病理学》教学中的应用

《法医病理学》是一门多学科综合、实践性和应用性都非常强的学科。作为启发式、参与式和民主式教学模式的案例教学,在《法医病理学》的教学中更能发挥出其独特的优势。案例是案例教学区别于其他教学模式的关键所在,积极讨论交流是案例教学成功的决定因素,最后的总结是整个案例教学过程的点睛之处,引导学生对案例有全面深入的认识。

无偿献血对骨髓造血干细胞的影响

目的:Southern印迹杂交测定外周血白细胞端粒DNA长度,观察无偿献血对骨髓造血干细胞的影响。方法:收集35～40岁有15次左右献血史者的血样,同年龄组无献血史者的血样与之对照,酚/氯仿提取基因组DNA,Southern印迹杂交,积分光密度扫描计算TRF值。结果:无偿献血组TRF值平均为11.76Kb,对照组平均为11.81Kb。经统计学分析P>0.05两组样本差异无显著性。结论:通过对两组样本端粒长度的检测未发现长期的无偿献血会对献血者的骨髓造血干细胞产生负面影响。

肺癌A549裸鼠移植瘤模型高效建立方法的应用

目的:探讨裸鼠高效移植瘤模型的建立方法,为进行肿瘤的体内相关研究和抗癌药物的筛选提供实验基础。方法:肺癌A549细胞接种于裸鼠皮下,出瘤后制备单细胞悬液和组织块分别接种和塞入皮下,观察初次培养细胞成瘤组、二次单细胞悬液成瘤组和二次组织块成瘤组的出瘤率和移植瘤的生长情况,PI单染流式细胞仪检测细胞周期的变化,细胞毒实验采用MTT法。结果:3组中二次组织块成瘤组的出瘤率显著高于另外两组,细胞增殖块,移植瘤的变异小;细胞周期分析显示二次组织块成瘤组的细胞S和G2/M期比例增高,细胞增殖指数显著高于另外两组;但细胞毒MTT的实验结果显示3组肿瘤细胞对化疗药物顺铂的敏感性差异无显著性(P>0.05)。结论:二次组织块成瘤可显著提高A549的成瘤率,且不影响肿瘤细胞对化疗药物的反应性,是一种高效的裸鼠移植瘤模型建立方法。

用分子探针杂交法观测多次献血对造血系统的影响

目的建立非同位素标记的探针杂交测定外周血白细胞端粒DNA长度的方法,借此探讨无偿献血对献血者造血系统的影响。方法酚/氯仿提取基因组DNA,限制性内切酶消化,琼脂糖凝胶电泳,非同位素标记的探针Southern印迹杂交,化学发光X线片曝光显示杂交谱带,积分光密度扫描计算TRF值。结果所测样本获得了较好的低背景杂交谱带,测得35～40岁无偿献血组TRF值平均为11.73kb,相应无献血史对照组平均为11.78kb。结论建立了非同位素标记的探针检测端粒DNA的方法,用上述方法初步显示了固定的长期无偿献血并未对献血者的造血系统产生负面影响。

不同保存温度对血浆部分凝血因子活性的影响

目的:探讨在不同保存温度,不同保存时间血浆部分凝血因子活性的变化,为临床选择不同血浆输注提供实验室依据。方法:采集10袋(200mL/袋)的ACD-B血液保存液保存的血液,在采血后1h内留样10mL作为对照组样本;每份全血在无菌条件下平均分为2袋,作为2个实验组,热合封口。第1组保存于(4±2)℃,保存48h;第二组先保存于(22±2)℃,保存6h之后,转移到(4±2)℃保存42h。两个实验组分别在采血后6h,24h和48h留取样本。将对照组及实验组样本在取样后立即离心,分离血浆,于-18℃保存30d后,进行凝血因子Ⅴ(FⅤ)、凝血因子Ⅷ(FⅧ)、纤维蛋白原和凝血因子Ⅶ的检测。结果:两组血浆在不同温度、不同保存期的凝血因子Ⅴ、纤维蛋白原和凝血因子Ⅶ水平无显著改变;而在保存8h后,实验组血浆凝血因子Ⅷ水平均低于对照组凝血因子Ⅷ水平(P<0.05)。在保存24h后,实验组血浆凝血因子Ⅷ水平进一步下降(P<0.05)。结论:在采血后24h保存期内,血浆中凝血因子,除凝血因子Ⅷ外,凝血因子Ⅴ,纤维蛋白原和凝血因子Ⅶ活性均没有明显改变;凝血因子Ⅷ水平在4℃保存8h后下降14%;在保存24h后,凝血因子Ⅷ水平下降约30%;在保存48h后,凝血因子Ⅷ水平下降约40%。实验结果表明,在新鲜冰冻血浆供应紧张的情况下,除非需要大剂量补充凝血因子Ⅷ(病人凝血因子Ⅷ水?

不同年龄组白细胞端粒DNA长度变化研究

目的探讨人外周血白细胞端粒DNA随年龄变化的规律。方法选取123例不同年龄健康人外周血样本,采用非同位素探针标记的SouthernBlot方法检测了端粒DNA限制性酶切片段(Telomericre鄄strictedfragment,TRF)长度的变化。结果对这123例样本就性别组成进行χ2检验,得出P>0.05,说明这123例样品性别对TRF的差异不显著。123例外周血白细胞端粒TRF平均长度随年龄增长而逐渐缩短,且TRF随年龄缩短的速度是不均一的,人外周血白细胞染色体端粒DNA长度可能在5岁左右存在缩短加剧现象。对0～14岁、15～64岁及≥65岁三组进行方差分析(SNK检验),显示有显著性差异(P<0.01)。结论不同年龄组人外周血白细胞端粒DNA长度具有显著差异且变化速率不同,该研究结果为通过端粒DNA长度推断个体年龄提供了可能。

新型3-芳基香豆素类化合物的合成及其抗肿瘤活性

以芳基乙酸和取代邻羟基苯甲醛为起始原料,经Perkin缩合和关环反应合成了16个新型的3-芳基香豆素类化合物(3a^4h),其结构经1H NMR,IR和EI-MS表征。采用MTT法测定了3和4对人鼻咽癌细胞株(KB)、人气道平滑肌细胞株(KV)、人乳腺癌细胞株(MCF-7)、人乳腺癌多药耐药细胞株(MCF-7/ADR)的细胞毒性。结果表明:部分化合物表现出较强的细胞增殖抑制活性,其中7,8-二乙酰氧基-3-(4'-甲氧基苯基)香豆素(3e)对KB细胞的活性最强(IC505.88μmol·L-1)。

人外周血白细胞端粒DNA长度变化与性别的关系

目的 探讨人外周血白细胞端粒DNA长度变化与性别的关系。方法 选取123例不同年龄健康人外周血样本，其中男性63例，女性60例，酚氯仿法抽提人基因组DNA，采用地高辛标记探针，通过Southern Blot方法检测端粒DNA限制性酶切片段(TRF)长度的变化。结果 123例外周血白细胞端粒TRF平均长度随年龄增长而逐渐缩短，TRF随年龄缩短的速度是不均一的，且呈现出性别差异。结论 人外周血白细胞端粒DNA长度随年龄缩短的变化速率具有性别差异，通过端粒DNA长度推断个体年龄需考虑到性别因素。

核黄素联合紫外线A照射对血浆中伪狂犬病毒的灭活效果

目的考察核黄素联合紫外线A对血浆中伪狂犬病毒的灭活效果。方法以伪狂犬病毒为模拟病毒,以Vero细胞为培养细胞,用病毒感染细胞,制备病毒增殖液;分别采用5、10、15及20J/cm2联合核黄素处理血浆,观察处理前后血浆病毒灭活的效果,筛选灭活病毒合适的紫外线剂量;将含有伪狂犬病毒血浆的样本分为实验组:采用上述筛选的紫外线强度照射联合核黄素处理;对照组1:单独采用紫外线A照射;对照组2:单独采用核黄素处理;阴性对照组:未采用紫外线照射和核黄素处理;分别在实验前后采用96孔细胞病变法,对照细胞病变效应,根据Reed-Muench公式计算病毒滴度。结果采用不同强度的紫外线联合核黄素处理血浆,紫外线强度为15及20J/cm2的灭活血浆病毒的效果明显,处理后病毒滴度分别下降4.55和4.39logs;实验组和对照组1病毒滴度分别下降4.55和4.28logs,有统计学意义(P<0.05);对照组2病毒滴度降低1.93logs,没有病毒灭活效果。结论核黄素联合紫外线可灭活血浆中伪狂犬病毒,单独紫外线照射也具有灭活血浆伪狂犬病毒的效果;而仅单独采用核黄素处理而未联合紫外线照射,对血浆中伪狂犬病毒灭活效果不明显。

常温保存期血小板数量及功能的变化

目的探讨保存期机采血小板数量及功能的变化。方法血细胞分离机采集血小板8人份,22℃振荡保存,分别在保存0、1、3和5d,在100级超净台内取样10ml,进行血小板计数、pH值、乳酸脱氢酶(LDH)、血小板凋亡数及CD62P表达的检测。结果在0、1、3和5d的Plt没有显著性差异;pH值比较,有显著性差异;0d与3d和5d相比,LDH有显著性差异;0d与第1、3、5d相比,血小板凋亡数有显著性差异;0d与1d、5d相比,CD62P表达有显著性差异。结论在血小板保存期,随着保存期的延长,机采血小板的pH值下降;LDH水平逐步增高;血小板凋亡数逐渐增高;CD62P的表达也逐渐增高,激活的血小板数增多。

血小板保养液与血浆混合保存血小板的初步研究

目的探讨血小板保养液与不同比例血浆混合保存单采血小板的效果。方法选用枸橼酸钠、醋酸钠、磷酸钠和氯化钠等组成血小板保养液,(22±2)℃振荡条件下保存单采血小板7d;按保养液与血浆混合比例,实验组分为实验Ⅰ组(50%保养液+50%血浆)和实验Ⅱ组(80%保养液+20%血浆),分别于1、3、5、7d取样检测血小板数(Plt)、pH值、葡萄糖消耗量、乳酸产生量和血小板膜CD62p的表达情况,并与100%血浆保存的血小板(对照组)比较。结果血小板保存到5d时,实验组与对照组比较Plt差异无统计学意义(P>0.05),其pH值较对照组均有明显下降(P<0.05),但pH仍>6.0;实验组血小板膜CD62p阳性表达率分别为32%和36%,比对照组的28%略高(P<0.05)。血小板保存到第7天时,Plt、pH和血小板膜CD62p阳性表达率,实验各组较对照组为差(P<0.05);1—7d葡萄糖平均消耗量实验Ⅱ组比对照组和实验Ⅰ组为高(P<0.05),而乳酸平均产生量则实验各组较对照组明显为高(P<0.05)。结论采用血小板保养液与20%或50%比例的血浆混合,短期(5d)保存单采血小板的pH值和血小板数量与用100%血浆保存单采血小板的效果基本相同,但保存在保养液与血浆混合液中的血小板更易激活。

腹膜透析患者的症状负担相关因素调查与分析

目的 该研究的目的是通过透析症状评估量表（Dialysis Symptom Index,DSI）对腹膜透析（peritoneal dialysis,PD）患者的躯体症状和情感症状负担作出评估以及探讨症状负担与PD患者的抑郁与生存质量的关系,探讨DSI对PD患者的有效性. 方法 收集2013年10月～2014年10月的中山大学附属第一医院腹膜透析中心随访患者的症状负担、抑郁、生存质量、人口统计学及实验室资料.使用DSI评估患者的症状负担,Beck抑郁量表（BDI）评估患者的抑郁情况,健康相关的生命质量量表（SF-36量表）评估患者的生存质量. 结果 本研究纳入持续不卧床腹膜透析（CAPD）患者403例,其中54.3％为男性患者,年龄中位数是60.5岁,平均透析月是23.3±15.2月.通过DSI评估,该研究中CAPD患者报告症状的平均数是10（7～13）,在CAPD患者中发生率较高的症状分别是：皮肤干燥（71.5％）,易醒（70.5％）,疲倦（69.5％）,皮肤瘙痒（65.3％）,入睡困难（63.2％）,下肢水肿（61.6％）,口干（61.6％）;困扰患者程度高的症状是入睡困难,易醒,皮肤瘙痒,疲倦,皮肤干燥,骨关节痛,口干,下肢水肿.相关性分析结果显示DSI总分与躯体功能（PCS）及精神功能（MCS）成负相关关系（r=-0.416及-0.479,P＜0.01）,与BDI成正相关关系（r=0.558,P＜0.01）.使用多元线性回归分析CAPD患者生存质量的独立危险因素结果显示透析症状量表得分（DSI得分）是影响患者生存质量的独立危险因素（B=0.251,P=0.002）,即患者的症状负担是其生存质量的影响因素. 结论 CAPD患者的症状负担与患者的抑郁状态密切相关,将影响患者的生存质量.DSI能可靠有效地对PD患者的症状作出评估,作为PD患者随访评估工具,便于医护人员掌握并对腹膜透析患者的症状有效管理.