2014年南京市流感病毒监测结果分析

目的 掌握南京市流感流行病学特征,分析流行株变化规律。方法 利用国家流感监测系统获取病例个案信息,以实时定量RT-PCR法对流感样病例（ILI）样品进行流感核酸检测分析以确定病毒型别;采用描述性流行病学方法对疫情和病原学监测结果进行分析。结果 2014年南京市哨点监测医院报告ILI 45 372例。共检测ILI样品3 459份,检出流感病毒核酸阳性544份,阳性率为15.73%。季节性H3型为优势毒株（占51.29%）。流行高峰为1-2月及7-9月;不同性别及各年龄组流感核酸阳性率差异均有统计学意义（P值均〈0.05）;5-14岁儿童核酸阳性率最高（33.33%）。结论 南京市流感流行具有明显的季节性,不同亚型毒株交替流行。应继续加强流感病毒监测工作。

南京市2011年手足口病流行病学及病原学特征分析

目的:分析南京市2011年手足口病的流行病学及病原学特征。方法:利用国家疾病监测信息系统结合实验室确诊阳性样本信息对2011年南京市手足口病相关资料进行描述性流行病学分析。结果:2011年全市共报告手足口病15694例,其中重症877例,死亡3例。年均报告发病率为193.54/10万,发病高峰集中在4～7月;主城区发病高于城郊区县;发患者群以5岁以下的幼托及散居儿童为主,男性发病高于女性。全市共报告实验室检测病例1757例,普通病例以EV71和CoxA16共同主导流行,重症病例和死亡病例以EV71为流行优势株。结论:南京市2011年手足口病流行存在明显的季节、人群和地区差异,5岁以下幼托和散居儿童是手足口病防控的重点人群。主要致病病原为EV71和CoxA16,深入开展手足口病流行病学和病原学研究,将有助于更好的防控和治疗手足口病。

南京市2007-2013年H3N2流感HA分子进化特征分析

目的分析2007—2013年南京市H3N2亚型流感HA基因分子学特征。方法选择2007—2013年59株H3N2亚型流感分离株,自行设计HA片段引物扩增分离毒株HA片段并测序,利用DNAStar、MEGA等软件对HA分子学特征进行分析;结果发病时间存在明显的季节性;进化树分析2007—2013年分离株按年代分成3个分支;分离株较疫苗株及不同年份之间,发生多个抗原位点及受体结合位点氨基酸的替换;2007—2013年,我市H3N2亚型流感流行情况出现两次波动,可能同基因的突变、重组有关。结论抗原位点及受体结合位点氨基酸的突变,对流感的防控及疫苗的保护效果产生极大的挑战。

Epidot-酶联免疫斑点检测方法应用于结核诊断的初步评价

目的:初步评价自行研发的结核分枝杆菌抗原特异性γ-干扰素酶联免疫斑点(Epidot-ELISPOT)检测方法应用于结核病诊断的价值。方法:应用自行研发的Epidot-ELISPOT检测方法及进口T-SPOT.TB试剂盒,检测60份结核病例和75份健康人群的外周血结核特异性γ-干扰素释放水平[斑点形成细胞(spot forming cells,SFCs)]。结果:ELISPOT方法与T-SPOT.TB检测方法对结核感染人群中的敏感性分别为81.67%、90.00%,特异度分别为94.67%、94.67%,Epidot-ELISPOT的敏感度与T-SPOT.TB比较(χ2=1.313,P=0.252),特异性比较(χ2=0.000,P=1.000),差异均无统计学意义。分别用上述两种方法检测肺结核痰阳组和痰阴组形成的SFCs,组间差异均无统计学意义。结论:自行研发的结核分枝杆菌抗原特异性γ-干扰素酶联免疫斑点技术的灵敏度和特异性与T-SPOT.TB检测方法类似,可用于结核感染的辅助诊断。

南京地区诺如病毒GⅡ.Pe-GⅡ.4基因特征

目的研究南京地区诺如病毒GⅡ.Pe-GⅡ.4基因特征和变化规律,了解其进化过程及高变区氨基酸变化情况,预测进化方向及流行趋势,为疫情预警和处置提供科学依据。方法应用荧光定量PCR和一步法RT-PCR,对南京地区2014—2017年分离的10株GⅡ.Pe-GⅡ.4的部分聚合酶—衣壳蛋白区及P2区进行测序,并利用分子生物学软件对序列进行比对分析。结果进化树分析发现,2014—2015年和2016—2017年南京流行株分别位于两个簇。氨基酸分析显示,10株南京流行株同源性达97.3%～100.0%,与21株国内外2011—2017年参考株同源性达97.1%～100.0%。与2008年前驱期澳洲株(KX789174)P2区相比较,10株南京株共19个氨基酸位点发生改变,其中10个位点位于5个抗原表位。南京株2016年后抗原表位A区有氨基酸位点改变。结论 2014—2017年南京地区分离的诺如病毒GⅡ.Pe-GⅡ.4基因型流行株氨基酸同源性较高,但仍呈现出随时间迁移某些抗原位点的氨基酸改变,应持续观察其进化趋势。

两起新型布尼亚病毒感染病例的病毒序列分析

目的:分析发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒感染(SFTSV)感染患者的临床特点、流行病学以及SFTSV基因序列。方法:收集本市2014年4-6月某医院送检的2例重症发热伴血小板减少(SFTS)患者的血清标本,经核酸荧光PCR检测阳性确诊。对病毒核酸测序并与GenBank数据比对。结果:两名患者均有典型的SFTSV感染的临床症状,以发热、腹泻为首发症状,血常规见粒系及血小板呈进行性降低。从2例患者血清提取的核酸经测序,其基因序列与GenBank中的SFTSV进行比对,0428株(安庆)的RNA多聚酶、糖蛋白、NS蛋白的同源性与安徽代表株AHL/China/2011的同源性最高,均达到99%。0507株(滁州)上述目的基因与江苏株JS2011-013-1的同源性高达99%。结论:SFTSV在本地区散发存在,基因序列分析结果提示其来源或有差异。

浅谈高考作文教学策略

作为语文高考中极为重要的一部分内容,作为在高考分数比例上也占据着极大的优势和无可取代的地位。那么,如何才能让学生在高考作文中获得优异的成绩呢?在笔者看来,想要做到这一点,我们就必须在了解高考写作现状的基础上,拟定一系列有效的教学策略。

一株人感染高致病性禽流感(H5N1)病毒基因组分子特征分析

【背景】H5N1禽流感病毒可以感染人类导致重症呼吸道感染,致死率高。【目的】研究我中心确认的一例人感染高致病性禽流感H5N1病毒A/Nanjing/1/2015的可能起源及基因组分子特征。【方法】对病人痰液样本中的H5N1病毒进行全基因组测序,使用CLC Genomics Workbench 9.0对序列进行拼接,使用BLAST和MEGA 5.22软件进行同源性比对和各片段分子特征分析。【结果】该株禽流感病毒属于H5亚型的2.3.2.1c家系,其8个片段均与江浙地区禽类中分离的病毒高度同源,未发现有明显的重配。分子特征显示,该病毒血凝素(Hemagglutinin,HA)蛋白裂解位点为PQRERRRR/G,受体结合位点呈现禽类受体特点,但出现D94N、S133A和T188I氨基酸置换增强了病毒对人类受体的亲和性。神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)蛋白颈部在49-68位缺失20个氨基酸,非结构蛋白1 (Non-structure protein,NS1)存在P42S置换和80-84位氨基酸的缺失。其他蛋白中也存在多个增强病毒致病力和对人类细胞亲和力的氨基酸突变。对耐药位点分析发现存在对奥司他韦的耐药突变H274Y,病毒对金刚烷胺仍旧敏感。【结论】人感染高致病性禽流感H5N1病毒A/Nanjing/1/2015属于2.3.2.1c家系,禽类来源,关键位点较保守,但仍出现了多个氨基酸的进化与变异使其更利于感染人类。H5N1禽流感病毒进化活跃,持续动态监测不能放松。

南京市外环境禽流感病毒监测分析

目的 了解南京市外环境中禽流感病毒的分布情况.方法 检测2013年6月-2014年12月全市外环境监测点的样本620份,分析本市外环境监测结果的特征.结果 城乡活禽交易市场的甲型流感病毒核酸阳性率最高,2013年未检出H7阳性样本,阳性样本多为H9亚型,部分为H5亚型.2014年在检出H5、H7和H9阳性的基础上,还出现了两种以上不同亚型禽流感病毒混合感染的情况.不同类型的标本中,禽鸟类粪便、案板表面擦拭标本和清洗污水这三类标本禽流感病毒检出率高.外环境样本中H7亚型阳性检出时间与病例发生时间在一定程度上较为符合.结论 南京市活禽市场为人感染禽流感的高风险场所,存在多种禽流感病毒亚型感染同一禽类宿主的情况,应加强对外环境的监测,及时发现病毒分布的改变和变异的发生,为早期发现和预防禽流感疫情提供依据.

南京地区2012～2013年G9型轮状病毒VP7基因特征的分析

A组轮状病毒是引起成人和婴幼儿急性腹泻的主要病原。了解轮状病毒流行株的型别,对主要中和抗原VP7的编码基因进行遗传变异分析,可为当地轮状病毒疫苗的应用和开发提供指导。我们对2012年10月至2013年12月南京地区908例腹泻门诊患者的粪便标本进行轮状病毒检测,采用RT-PCR方法对随机抽取的50份阳性标本进行G分型,并对其中19份G9型轮状病毒的VP7基因序列测序分析。结果发现轮状病毒阳性率11.34%(103/908),其中以G9型为主,占78.0%(39/50),其次是G2、G1和G3型。对G9型轮状病毒VP7基因核苷酸序列进行分析,显示主要分为G9-VI亚型和G9-III亚型,以G9-VI亚型为主,且属于中国和日本G9型轮状病毒亚簇,部分毒株在A、B、C、F四个中和抗原表位中有变异,这可能有助于G9型轮状病毒的流行,值得引起注意。

2007-2011年江苏省南京市细菌性痢疾病原学监测结果分析

目的对江苏省南京市2007-2011年细菌性痢疾的血清群(型)分布、耐药谱、毒力基因携带情况及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析,为江苏省南京市细菌性痢疾的防控提供依据。方法对从江苏省南京市2007-2011年各医院腹泻病患者中分离的75株志贺菌进行血清群(型)、耐药性和毒力基因检测,并进行PFGE分子分型。结果75株志贺菌包括宋内志贺菌54株(72.0%),福氏志贺菌21株(28.0%),除2010年福氏X型为优势血清型外,其余年份宋内志贺菌为优势血清群;75株菌普遍对氨苄西林、四环素和磺胺甲恶唑耐药,耐药率在61.1%～95.2%之间;三重及以上耐药菌株占所有测试菌株的88.0%;毒力基因ipaH、sen、set1、ial阳性率分别为100%、46.7%、24.0%、48.0%;福氏志贺菌优势毒力基因模式为Ⅰ型(66.7%),宋内志贺菌优势基因模式为Ⅶ型(61.1%)和Ⅳ型(25.9%);宋内志贺菌分为20个PFGE基因型,其中以S7、S8、S10三个带型为主,占宋内志贺菌的53.7%;相似度>95%,可能来自于同一克隆系;福氏志贺菌分为17种带型,各带型较散在分布。结论江苏省南京市志贺菌流行菌群不断变迁,宋内志贺菌有取代福氏志贺菌成为流行菌群的趋势;多重耐药现象严重;福氏志贺菌优势毒力基因模式为Ⅰ型、宋内志贺菌为Ⅶ型和Ⅳ型;PFGE型别呈现多元化流行特点。

南京市2012年-2013年肠道病毒71型分离株VP1基因特性分析

目的了解南京地区肠道病毒71型流行株的遗传学背景。方法采集2012年-2013年手足口病患者咽拭子样本,经特异性逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）鉴定EV71病毒核酸阳性者进行细胞接种分离病毒。选取阳性分离株扩增其VP1完整编码区全长基因并进行序列测定,利用生物信息学软件对序列加以分析,构建序列遗传亲缘关系树。结果共分离得到14株EV71毒株,经VP1全长基因测序分析发现,所分离病毒VP1区核苷酸与EV71病毒A型代表株同源性为79.6%～81.3%,与B型代表株的同源性为81.7%～84.7%,而与C型代表株的同源性明显较高,为86.0%～95.2%,其中与C4代表株（AY895144）的同源性最高,为93.8%～95.2%。进化树分析发现本地流行株与上海、安徽等地区流行株的亲缘较近,而与台湾地区流行株亲缘较远。相应的氨基酸位点分析也表明符合C基因型的氨基酸模式。结论南京地区2012年-2013年肠道病毒71型的流行株主要为C4亚型,与上海和安徽地区流行株亲缘较近,可能具有同一来源。

一起不明原因肺炎的实验室诊断

目的对2012年10月南京市发生的一起不明原因肺炎进行实验室检测,以确定导致该病例的主要病原体。方法 采集该病例的呼吸道标本,利用荧光PCR、普通PCR及琼脂糖凝胶电泳检测可疑病毒核酸。结果该呼吸道标本中,各型流感病毒及其相应亚型特异性核酸均为阴性,冠状病毒特异性核酸为阴性,呼吸道病毒特异性核酸中单纯疱疹病毒为阳性,其余为阴性。结论根据实验室检测结果,结合流行病学资料分析,该不明原因肺炎病例系单纯疱疹病毒引起或合并混合型肺部感染,排除各型流感以及新型冠状病毒等病原体。

南京地区诺如病毒GII.4 Sydney2012[P16]分子生物学特征研究

2016年1月-2021年12月,南京市急性胃肠炎暴发主要由GII.2[P16]引起,但2021年11月底,由GII.4Sydney2012[P16]引起的暴发显著上升。为了解GII.4 Sydney2012[P16]分子生物学特性,对监测期间204起急性胃肠炎暴发中收集到的3129份样本进行荧光定量PCR检测,检出1006份诺如病毒阳性样本,对部分阳性样进行一步法RT-PCR扩增、测序,共检出10种GII型诺如病毒,随机选取19株GII.4 Sydney2012[P16],结合7株GII.4Sydney2012[P31]、31株GII.2[P16]南京株及2015-2021年国内外参考株进行序列比对和进化分析。19株GII.4Sydney2012[P16]同源性达99.7%~100.0%,与参考株同源性达96.6%~99.3%。进化树分析显示,GII.P16虽与不同GII型诺如病毒组合,但进化距离上并未发生较大变化。与不同聚合酶区结合的GII.4 Sydney 2012在同一分支上,GII.4 Sydney 2012[P16]在进化距离上与GII.4 Sydney 2012[P4 NewOrleans2009]更为接近。P2区的A、B、D和NERK位点均发生改变,所有GII.4的373氨基酸残基处均检测到显著的阳性选择。GII.P16虽未发生较大改变,但通过与GII.4 Sydney2012重组,呈现加速在人群中流行的分子特征。而GII.4 Sydney2012通过改变抗原表位位点影响了抗原性和配体结合特性,显著促进了病毒的传播。因此GII.4 Sydney2012[P16]是否会取代GII.2[P16]成为南京地区流行株,抑或被其他GII.4所替代,今后需要对更为广泛的潜在感染人群进行监测,及早发现早期新型诺如病毒。

南京某小学一起流感样暴发疫情实验室检测及流感病毒HA1基因特性分析

目的了解2015年1月南京市某小学一起流感暴发疫情致病流感病毒HA1基因的序列特征和变异特点,分析现有的流感疫苗株对人体的保护情况。方法对此次疫情采集的咽拭子标本采用荧光定量PCR对所提核酸进行甲型/乙型流感病毒的检测,阳性核酸进一步分型检测。阳性咽拭子使用MDCK细胞进行病毒分离,阳性病毒培养液提取核酸,RT-PCR扩增HA1基因片段并测序。序列分析使用MEGA 5.2软件邻接法构建系统进化树。结果经荧光定量PCR鉴定,采集的10例病例咽拭子中,5例为B型Yamagata系流感病毒阳性。所分离的毒株间HA1的核苷酸同源性为100%;与2015年度国内外疫苗推荐株高度同源,序列相似性达99.5%以上。与国内外疫苗株相比多个位点发生了氨基酸突变,其中,D196N和R141G位于抗原决定簇;196位增加了一个糖基化位点。结论此次疫情流行的B型Yamagata系流感流行株与同年度国内外疫苗株HA1基因同源性高,疫苗有很好的保护作用,建议在校学生主动接种预防;HA1区域的氨基酸变异涉及抗原决定簇,需加强监测。

酶联免疫斑点实验与蛋白芯片检测结核分枝杆菌免疫应答的研究

目的:同时检测结核病人的细胞和体液免疫应答,初步探讨结核病人的免疫应答特点。方法:应用自行研制的酶联免疫斑点方法,联合结核分支杆菌蛋白芯片(阿拉伯甘露糖LAM、16 KD蛋白、38 KD蛋白、14 KD蛋白、9.7 KD蛋白和19 KD蛋白六种抗原)检测我市78例结核病患者的标本,进行相关统计学分析。结果:61例芯片阳性反应中,四种抗体阳性者比例最高,占34.43%(21/61),其中又以抗LAM+16KD+38KD+14KD+反应模式的比例较高。Epidot-ELISPOT在结核芯片各阳性组和结核芯片阴性组形成的SF-Cs中位数无显著性差异。78例结核病患者的Epidot-ELISPOT方法阳性率为62.82%(49/78),蛋白芯片法阳性率为78.21%(61/78),一致阳性率为44.87%(35/78)。结论:分泌γ-干扰素的T细胞反应程度与针对6种抗原的不同结核抗体反应模式间并无明显相关性。联合体液和细胞免疫检测可以进一步提高检测灵敏度。

2013年南京市柯萨奇病毒A6型基因特征分析

目的研究2013年南京市手足口病（HFMD）病例中柯萨奇病毒A6型（CA6）的基因特征。方法从2013年采集的HFMD病例标本中挑选CA6阳性标本,选取VP1区进行扩增,并测定基因序列,对比其他参考序列进行进化分析。结果中国南京市CA6流行株与中国泰州、中国福建、中国上海、中国山西、中国台湾等地区和日本的流行株亲缘关系较近,而与中国山东流行株（JQ364886.1-SD1992）和美国原型株（AF081297）亲缘关系较远。序列比对发现南京市CA6病毒核苷酸序列同源性为92.8%~100.0%,氨基酸同源性为94.7%~100.0%;与CA6原型株和1992年山东流行株JQ364886的核苷酸同源性分别为82.9%和84.3%。结论 CA6型柯萨奇病毒是2013年南京地区手足口病的重要病原。

南京市腹泻患者副溶血弧菌毒力基因及其耐药性分析

目的分析南京市哨点医院急性腹泻患者副溶血弧菌携带的毒力基因及抗生素耐药性。方法收集2018—2021年哨点医院腹泻患者的肛拭子标本1805份,分离鉴定出74株副溶血弧菌,用PCR方法检测其毒力基因tlh、tdh、trh,并用微量肉汤法检测分离菌株的抗生素耐药性。用IBM SPSS 20软件进行统计分析,差异比较采用χ^(2)检验。结果74株副溶血弧菌tlh基因均为阳性,其中5.41%的菌株tdh(+)trh(+),86.49%的菌株tdh(+)trh(-),8.11%的菌株tdh(-)trh(-),三者差异有统计学意义(χ^(2)=141.243,P<0.001)。抗生素药敏试验结果显示100.00%的副溶血弧菌菌株对头孢唑啉耐药,21.62%的菌株对氨苄西林耐药,菌株普遍对三代头孢类抗生素(头孢噻肟、头孢他啶)及磺胺类、氨基糖苷类、四环素类等常用抗生素敏感,敏感率达90.00%以上。对硫霉素类抗生素(亚胺培南)的敏感率为100.00%。结论南京市腹泻患者粪便来源的副溶血弧菌毒力基因的携带率高,对常用抗生素较敏感,对一代头孢类抗生素(头孢唑啉)耐药严重。

2014—2016年南京市甲型H3N2流感病毒HA基因的进化分析

目的对南京地区2014—2016年流行的甲型H3N2型流感病毒血凝素(hemagglutintin,HA)基因进行测序和分析,掌握HA基因的位点突变和遗传进化特征。方法于2014—2016年流感监测样本H3N2型流感病毒阳性标本中,根据时间段随机选取27株,MDCK细胞进行病毒分离和纯化,吸取病毒培养液提取病毒RNA,反转录-聚合酶链反应(reverse transcritase polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增病毒HA基因全长并测序,掌握HA序列特征,对其遗传进化特点、重要功能位点进行详细分析。结果27株H3N2型流感毒株HA基因核苷酸长度为1701 bp,编码566个氨基酸;与同年WHO推荐疫苗株序列同源性高达97.9-99.5%。进化分析表明,2014-2016年南京流行株在进化树上分属两个分支,实现了从3C.3a到3C.2a基因型的转变,目前以3C.2a基因型流行为主;不同年份的南京分离株多个抗原表位上的氨基酸发生了变异。结论2014—2016年南京地区H3N2亚型流感病毒流行株与疫苗株同源性高,疫苗可以产生良好的保护作用;HA基因抗原位点变异快,分子遗传进化活跃,有必要对病毒HA基因的分子特征进行持续监测,为下一个流感病毒流行季H3N2型的防控做好准备。

2014～2017年南京地区胃肠炎暴发中诺如病毒分子流行病学特征

了解2014～2017年南京地区诺如病毒胃肠炎暴发流行特征、变化规律和流行株特征,为疫情控制、疫苗研发提供科学依据。收集2014年9月至2017年8月南京地区12个区疾控上送85起疑似诺如病毒急性胃肠炎暴发样本,应用荧光定量PCR和一步法RT-PCR检测诺如病毒基因序列,测序后利用分子生物学软件对序列进行分析。其中66起诺如病毒检测阳性,暴发集中于幼儿园和小学,冬春季节高发。诺如病毒优势株在连续的几个流行季持续变化,由GII.4/Sydney 2012转变为新型GII.P17-GII.17,再到GII.P16-GII.2。其中GII.P16-GII.2与全球2016～2017年参考株同源性达98.4%～99.5%。2014～2017年南京地区诺如病毒急性胃肠炎暴发的流行强度呈上升趋势。引起暴发的诺如病毒以GII为主,含多种基因型,并存在重组株,优势基因型在连续的几个流行季持续改变。诺如病毒近几年不断变异,从而逃脱人群免疫,可能是其流行趋势上升的原因之一。