【目的】为提高重组人ADAM(A Disintegrin And Metalloproteinase)15去整合素结构域蛋白(rhADAM15)的表达水平。【方法】在详尽分析rhADAM15的cDNA和GST(谷胱甘肽-S-转移酶)-ADAM15结构的基础上,选择表达宿主菌并对表达质粒进行改造。...【目的】为提高重组人ADAM(A Disintegrin And Metalloproteinase)15去整合素结构域蛋白(rhADAM15)的表达水平。【方法】在详尽分析rhADAM15的cDNA和GST(谷胱甘肽-S-转移酶)-ADAM15结构的基础上,选择表达宿主菌并对表达质粒进行改造。【结果】(1)选择能为大肠杆菌稀有密码子提供额外tRNA的Escherichia coli.Rosetta(DE3)作为宿主菌,将质粒pGEX-ADAM15转化于其中在最佳诱导表达条件下获得298mg/L融合蛋白GST-ADAM15;(2)采用PCR体外定点突变技术将目标蛋白编码区稀有密码子GGA(Gly425)替换为GGC,使融合蛋白表达水平提高9.4%;(3)通过消除凝血酶识别序列附近的Pro-Glu-Phe残基,提高凝血酶酶切效率,使rhADAM15产量提高了35.7%;(4)在GGA替换为GGC基础上切除"Pro-Glu-Phe"残基,使rhADAM15产量提高到68mg/L,比分别切除"Pro-Glu-Phe"残基、GGA替换为GGC和野生型提高了19.2%、51.1%和61.9%。【结论】这一结果表明,在充分认识目标蛋白特性的基础上定向选择表达宿主并改造表达质粒能实现外源蛋白高水平表达。展开更多
目的:对合成二肽的ACE抑制活性进行系统地筛选,寻找具有高ACE抑制活性的二肽并研究其在动物体内的降血压作用。方法:利用可见光分光光度法对35种合成二肽的ACE抑制活性进行测定,并对具有高ACE抑制活性的二肽进一步测定其IC50值。选取AC...目的:对合成二肽的ACE抑制活性进行系统地筛选,寻找具有高ACE抑制活性的二肽并研究其在动物体内的降血压作用。方法:利用可见光分光光度法对35种合成二肽的ACE抑制活性进行测定,并对具有高ACE抑制活性的二肽进一步测定其IC50值。选取ACE抑制效果最佳的二肽进行原发性高血压大鼠(SHR)降血压实验。实验采用灌胃方法分别以1、10、25、50、100 mg/kg的剂量溶于1 m L生理盐水进行给药,分别于给药后2 h和4 h测量大鼠血压变化。结果:研究发现大部分二肽都具有一定程度的ACE抑制活性,其中以氨基酸序列为半胱氨酸-丙氨酸(Cys-Ala,CA)和半胱氨酸-组氨酸(CysHis,CH)的二肽ACE抑制活性最高,其ACE抑制率分别达到84.38%和70.79%。经测定CA和CH的IC50值分别为23.22μmol/L和61.17μmol/L。SHR大鼠降血压实验表明CA在体内的降压效果显著。给药后4 h CA降压效果优于给药后2 h,给药后2 h CA降压效果与给药剂量呈较好的正相关性(R2>0.8)。结论:体外ACE抑制率测定及SHR大鼠降血压实验发现合成二肽CA具有较高的ACE抑制活性和较好的体内降血压效果,提示CA可以作为降血压保健食品的添加成分,值得进一步研究。展开更多
研究利用可见光分光光度法系统地对34种合成二肽的ACE抑制活性进行筛选,结果发现34种二肽中氨基酸序列为半胱氨酸-异亮氨酸(Cys-Ile,CI)和半胱氨酸-赖氨酸(Cys-Lys,CK)的二肽ACE抑制活性最高,其ACE抑制率分别达到67.52%和38.39%。其余...研究利用可见光分光光度法系统地对34种合成二肽的ACE抑制活性进行筛选,结果发现34种二肽中氨基酸序列为半胱氨酸-异亮氨酸(Cys-Ile,CI)和半胱氨酸-赖氨酸(Cys-Lys,CK)的二肽ACE抑制活性最高,其ACE抑制率分别达到67.52%和38.39%。其余二肽中有25种无明显ACE抑制活性,有7种呈一定程度ACE抑制活性。经测定CI和CK的IC50值分别为39.77μmol/L和211.53μmol/L。SHR大鼠降血压实验表明CI在体内的降压效果显著。以10 mg/kg剂量灌胃后2h大鼠舒张压下降34.36±5.19 mm Hg;当CI剂量达到100mg/kg时,给药后2h大鼠舒张压下降83.95±10.28 mm Hg,降压效果高于同浓度卡托普利。比较给药后2h和4h的降压效果,发现给药后2h的降压效果已经整体达到最大药效,而给药后4h降压效果与给药剂量呈较好的正相关性(R>0.8)。体外ACE抑制率测定及SHR大鼠降血压实验表明合成二肽CI具有较高的ACE抑制活性和较好的体内降血压效果,提示CI可以作为降血压保健食品的添加成分,值得进一步研究。展开更多
文摘【目的】为提高重组人ADAM(A Disintegrin And Metalloproteinase)15去整合素结构域蛋白(rhADAM15)的表达水平。【方法】在详尽分析rhADAM15的cDNA和GST(谷胱甘肽-S-转移酶)-ADAM15结构的基础上,选择表达宿主菌并对表达质粒进行改造。【结果】(1)选择能为大肠杆菌稀有密码子提供额外tRNA的Escherichia coli.Rosetta(DE3)作为宿主菌,将质粒pGEX-ADAM15转化于其中在最佳诱导表达条件下获得298mg/L融合蛋白GST-ADAM15;(2)采用PCR体外定点突变技术将目标蛋白编码区稀有密码子GGA(Gly425)替换为GGC,使融合蛋白表达水平提高9.4%;(3)通过消除凝血酶识别序列附近的Pro-Glu-Phe残基,提高凝血酶酶切效率,使rhADAM15产量提高了35.7%;(4)在GGA替换为GGC基础上切除"Pro-Glu-Phe"残基,使rhADAM15产量提高到68mg/L,比分别切除"Pro-Glu-Phe"残基、GGA替换为GGC和野生型提高了19.2%、51.1%和61.9%。【结论】这一结果表明,在充分认识目标蛋白特性的基础上定向选择表达宿主并改造表达质粒能实现外源蛋白高水平表达。
文摘目的:对合成二肽的ACE抑制活性进行系统地筛选,寻找具有高ACE抑制活性的二肽并研究其在动物体内的降血压作用。方法:利用可见光分光光度法对35种合成二肽的ACE抑制活性进行测定,并对具有高ACE抑制活性的二肽进一步测定其IC50值。选取ACE抑制效果最佳的二肽进行原发性高血压大鼠(SHR)降血压实验。实验采用灌胃方法分别以1、10、25、50、100 mg/kg的剂量溶于1 m L生理盐水进行给药,分别于给药后2 h和4 h测量大鼠血压变化。结果:研究发现大部分二肽都具有一定程度的ACE抑制活性,其中以氨基酸序列为半胱氨酸-丙氨酸(Cys-Ala,CA)和半胱氨酸-组氨酸(CysHis,CH)的二肽ACE抑制活性最高,其ACE抑制率分别达到84.38%和70.79%。经测定CA和CH的IC50值分别为23.22μmol/L和61.17μmol/L。SHR大鼠降血压实验表明CA在体内的降压效果显著。给药后4 h CA降压效果优于给药后2 h,给药后2 h CA降压效果与给药剂量呈较好的正相关性(R2>0.8)。结论:体外ACE抑制率测定及SHR大鼠降血压实验发现合成二肽CA具有较高的ACE抑制活性和较好的体内降血压效果,提示CA可以作为降血压保健食品的添加成分,值得进一步研究。
文摘研究利用可见光分光光度法系统地对34种合成二肽的ACE抑制活性进行筛选,结果发现34种二肽中氨基酸序列为半胱氨酸-异亮氨酸(Cys-Ile,CI)和半胱氨酸-赖氨酸(Cys-Lys,CK)的二肽ACE抑制活性最高,其ACE抑制率分别达到67.52%和38.39%。其余二肽中有25种无明显ACE抑制活性,有7种呈一定程度ACE抑制活性。经测定CI和CK的IC50值分别为39.77μmol/L和211.53μmol/L。SHR大鼠降血压实验表明CI在体内的降压效果显著。以10 mg/kg剂量灌胃后2h大鼠舒张压下降34.36±5.19 mm Hg;当CI剂量达到100mg/kg时,给药后2h大鼠舒张压下降83.95±10.28 mm Hg,降压效果高于同浓度卡托普利。比较给药后2h和4h的降压效果,发现给药后2h的降压效果已经整体达到最大药效,而给药后4h降压效果与给药剂量呈较好的正相关性(R>0.8)。体外ACE抑制率测定及SHR大鼠降血压实验表明合成二肽CI具有较高的ACE抑制活性和较好的体内降血压效果,提示CI可以作为降血压保健食品的添加成分,值得进一步研究。
