破伤风毒素及其片段的免疫效果

本文首次报道了破伤风毒素及其片段和片段组合对小鼠的免疫效果。通过凝胶过滤和离子交换等方法提纯了破伤风毒素及其片段。各片段中残余素素的污染率为0～0.8%。将各片段给小鼠免疫均能诱导产生保护性抗体,用破伤风毒素攻击后能使部分小鼠免于死亡。当免疫小鼠的血清抗体滴度>1∶4(0.01HAU/ml)时,小鼠在毒素攻击后一般可免于死亡,当血清抗体滴度>1∶128(0.5HAU/ml)时,则小鼠经攻毒后一般不表现出任何中毒症状,当血清抗体滴度处于二者之间时,小鼠一般表现有破伤风中毒症状,但大部分可以存活。毒素的三个片段均能诱导产生保护性抗体,但存在着明显的差别。

我国生物技术产品的发展战略

随着生物技术的快速发展和人类基因组计划等的相继展开，生物技术的发展呈现出前所未有的巨大活力。目前，我国正在实施的国家科技攻关计划。“863”计划、自然科学基金、火炬计划等均把生命科学和生物技术放在重要的地位，极大地促进了我国生物技术产业的发展和成熟。随着WTO的加入，必将对我国制药行业带来极大的挑战，进口制品将会大量增加，对我们的市场势必形成极大的冲击。因此，我们必须面对世界性的挑战，将其转化为发展的机遇和动力，加速我国制药行业的发展。现将我国医药生物技术产品的现状和发展战略简介如下。

MTT比色法测定促肝细胞生长物质对肝细胞生长的刺激活性

本实验建立了用简便的ＭＴＴ比色法对促肝细胞生长物质的促肝细胞增殖作用的测定方法，确定了实验的最适条件。与传统的３ＨＴｄＲ掺入法进行比较的结果显示，ＭＴＴ比色法与３ＨＴｄＲ掺入法测定结果基本相符，灵敏度相近，但消除了同位素的污染，是一个测定促肝细胞生长物质刺激肝细胞增殖活性的简便方法。

人抗破伤风毒素免疫球蛋白国际标准品的协作标定

应用中和试验、血凝试验和ELlSA对人抗破伤风毒素免疫球蛋白国际标准品的推荐品进行了测定。中和试验测定样品A(推荐品)的效价为134.2(3.04％)IU/瓶;B(阳性对照)为58.6(7.95％)IU/瓶;C(阴性对照)为〈201U/瓶。ELISA测定的效价,A为108.2(7.13％)Iu/瓶;B为55.6(11.56％)IU/瓶。用血凝试验测定的效价,A为160.7HAU/瓶;B为84.3HAU/瓶。除血凝试验测定的结果偏高外,其它两法测定的结果均与协作组相近。此国际标准品已经WHO第43次生物检定专家委员会确定,效价为120IU/瓶。

破伤风毒素及其AB片段对金鱼的毒力

作者研究了破伤风毒素及其 AB 片段对金鱼和小鼠的毒力,发现16ng 的毒素即可使金鱼麻痹和死亡;26μg 的 AB 片段即可使小鼠麻痹和死亡,而对金鱼却无作用。当抗 C 或 AB 片段的抗体与毒素结合后,可阻断毒素对金鱼的致麻痹作用。上述结果表明,破伤风毒素可作用于金鱼的外周神经系统,而 AB 片段则不能。毒素与其受体结合是毒素对金鱼作用所必需的。

破伤风毒素及其片段的纯化

本文报道了破伤风毒素及其片段AB、BC、A和C的纯化方法。应用硫酸铵沉淀和Ultrogel AcA_(34)凝胶过滤制备的纯化毒素,于SDS-PAGE和PAGE中均形成单一的蛋白带,分子量为15万,pI为5.95,毒力为1～3×10~4MLD/μg。毒素经DTT还原、尿素处理、再用Ultrogel AcA_(44)凝胶过滤制备A和BC片段。A片段的分子量为54000,pI为4.8。BC片段的分子量为98 000,pI为7.2。木瓜酶处理毒素后用高压液相层析制备AB和C片段。纯化的AB片段分子量为98 000,于等电聚焦中为2条主要区带,pI为5.3和5.5,另有数条小区带;纯化的C片段分子量为51000,于PAGE中形成5条蛋白带,于等电聚焦中主要区带的等电点为7.3,另有几条小区带。

生物制品的国家批签发

生物制品是应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制备,用于人类疾病预防、治疗和诊断的药品。包括疫苗、血清、血液制品、细胞因子、单克隆抗体体外免疫诊断制品等。 一般来讲生物制品来源于活的生物体,包括正常或修饰过的微生物及人源或动物组织,并且常常具有复杂的分子结构。由于制造生物制品的原材料具有生物活性,组成成分也十分复杂,其制造过程涉及到生物技术学等加工处理。

抗毒素类制品的质控及其发展展望

抗毒素类制品的质控及其发展展望雷殿良综述董联珠审校（中国药品生物制品检定所，北京１０００５０）１８９０年Ｂｅｈｒｉｎｇ和北里柴三郎首先发现接受过破伤风毒素注射的豚鼠或家兔血清具有中和该毒素的效能，并且注射给其它动物后能抵御破伤风的感染与发病，此后便揭...

破伤风毒素 B 片段在人工膜上形成单离子通道的特性

用高效蛋白层析柱纯化破伤风毒素的 B 片段,用膜片箝(patch clamp)技术证明纯化的 B 片段于人工磷脂膜上能够形成离子通道.在中性和酸性 pH 时形成离子通道的几率很小,在有 pH 梯度存在的情况下却较容易测到通道活性.形成的离子通道的电导系数为2.3pS.B 片段形成的离子通道允许 K^+双向通过.离子通道打开的持续时间一般在20—120ms之间,多为20—40ms 和 100—120ms;闭合持续时间一般在20—40ms 间,多为20ms.表明通道的开和闭非常频繁.

破伤风毒素的提纯及形成离子通道的特性

应用硫酸铵分段沉淀和 Ultrogei AcA34凝胶过滤对破伤风毒进行了提纯,并对形成的离子通道在中毒作用中的功能进行了讨论。提纯的毒素与抗粗制毒素血清形成一条沉淀线,于聚丙烯酰胺凝胶电泳中形成单一的蛋白带,分子量为15万,等电点为5.95,毒力为1～3×104MLD/μg 蛋白。给小鼠注射低剂量毒素引起迟发性强直性痉挛;注射高剂量毒素引起快速的类肉毒毒素的松弛性麻痹,直至死亡。应用 Patch clamp 技术,破伤风毒素于人工磷脂膜上形成离子通道。只有当膜两侧存有 pH 梯度时毒素才形成离子通道,因此是 pH 依赖的。通道的电导系数为9 PS。

生物制品的国家管理

由于生物制品生产的原材料、生产工艺和检定方法本身固有的生物易变性和复杂性 ,以及绝大部分生物制品用于健康的儿童 ,WHO提出了国家药品管理当局对生物制品管理的 6项基本职能 ,并详细规定了执行该 6项基本职能的技术指标。国家药品管理当局通过执行上述职能 ,即可最大限度地确保生物制品的质量。

类毒素制品的研究现状及展望

类毒素制品的研究现状及展望雷殿良综述俞永平审（中国药品生物制品检定所，北京１０００５０）自１８８８年Ｒｏｕｘ和Ｙｅｒｓｉｎ发现白喉是由白喉杆菌产生的毒性很强的外毒素引起的，和次年北里柴三郎发现了破伤风外毒素是致病因子后，才开始了毒素与类毒素的研究。类...

一种测定血型物质含量的新方法

基于补体介导的溶血原理，建立了测定血型物质含量的溶血抑制试验。分型血清抗体与血球结合后，在补体的作用下可以溶解血球而释放血红蛋白，通过测定上清中血红蛋白含量求出所测样品中的血型物质含量。该方法的灵敏度（0．078μg／ml）比常规的血凝抑制试验（0．3125～0．165μg／ml）高4～8倍，重复性好，简便易行，可用于测定生物制品中血型物质的含量。

WHO召开修订天花疫苗规程研讨会

世界卫生组织于2002年5月2～3日在日内瓦总部召开了“天花疫苗生产和检定规程修订研讨会”。参加会议的有来自欧洲EMEA、美国FDA和CDC、英国NIBSC、俄国生物制品标准化研究所。

WHO生物制品标准化委员会第51次年会介绍

WHO生物制品标准化委员会(ECBS)于2001年11月26～30日在日内瓦召开,参加会议的有来自美国FDA的CBER、英国NIBSC、荷兰RIVM、墨西哥NIH、比利时、俄国、加拿大和中国等国家的标委会委员和专家,以及WHO生物制品安全和质量保障处的Griffiths博士、Wood博士、血液制品安全和质量保障处的Padilla博士等有关专家共33人,其他国际组织代表6人和WHO官员10人.中国药品生物制品检定所周海钧名誉所长和雷殿良副所长作为专家参加了本次会议.

破伤风毒素B片段在国际上的首次提取及功能

破伤风毒素是由A、B、C三部分组成的,A和C片段已于70年代得到了纯化,但位于A和C之间的B由于其分子量与A和C相当,且在A和B之间除有二硫键的连接外,还有非共价键的连接,为纯化带来了困难.因此,自70年代至本工作完成时尚未见到有成功提取的报道,对其活性也无研究.本文作者在大阪大学留学期间,在松田守弘教授的指导下开展了B片段的提取工作.以纯化的AB片段为起始物,用DTT和不同浓度的尿素还原二疏键及打开非共价键.并在含不同浓度尿素胶中进行电泳分离.

抗百日咳丝状血凝素单克隆抗体的制备、鉴定及应用

目的制备抗百日咳丝状血凝素(FHA)的单克隆抗体,并建立特异、准确的FHA定量检测方法.方法采用杂交瘤技术制备McAb,以ELISA间接法筛选稳定分泌抗FHA-McAb的杂交瘤细胞株,并进行系统的鉴定和纯化,建立定量检测FHA的ELISA 方法.结果获得6株分泌抗FHA-McAb的杂交瘤细胞株,抗体类别均为IgG1(κ),效价达1:105～1:1:106,并能特异性识别FHA,与流感病毒血凝素及百日咳毒素无交叉反应,应用ELISA检测FHA的灵敏度为1.04μg/L,批内变异系数为5.49%,批间变异系数为9.31%,平均回收率为94.18%.结论已成功制备了抗FHA-McA,建立了一种特异、准确地定量检测FHA的ELISA方法,可用于无细胞百日咳疫苗原液中FHA含量的检测,为该疫苗的质量控制提供了有力的手段.

MBL EXON Ⅰ 54位基因突变检测方法的建立及初步应用

目的 建立MBL基因点突变的检测方法,探讨健康汉族人MBL 54位密码子基因突变的情况。方法 根据MBL基因序列设计引物,建立MBL的PCR-RFLP测定点突变的方法。结果 扩增产物测序结果与预期扩增的目的基因序列一致,检测灵敏度为80ng/ml,用其检测58例健康献血员54位密码子的点突变情况,野生型为29例,占50％;突变杂合型为27,占46.55％;突变纯合子型为2例,占3.45％。基因频率A为0.732 8;B为0.267 2。结论 该方法是特异、灵敏的检测方法。