pEGFP-ING4真核表达载体的构建及在人脐静脉内皮细胞中的表达

目的构建携带生长抑制因子4(ING4)基因的真核表达载体pEGFP-ING4并转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC),为进一步研究ING4对胶质瘤血管生成影响提供基础。方法提取人胎盘细胞中总RNA,RT-PCR扩增ING4并克隆至pEGFP-C2载体,酶切电泳鉴定出阳性克隆送测序,利用靶向转染试剂jetPEI-HUVEC转染HUVEC,通过免疫组化检测转染细胞中ING4的表达。结果 成功扩增ING4基因,基因全长747 bp。重组质粒pEGFP-ING4的酶切鉴定及测序结果均证明ING4基因成功克隆到真核表达载体中。酶切片段电泳结果表明:目的条带与ING4的开放读码框大小相符;测序结果和ING4的开放读码框比对相似性为100%。转染重组质粒后的HUVEC中ING4蛋白表达水平增强。结论本实验成功构建携带ING4基因的真核表达载体pEGFP-ING4,并可在HUVEC中获得ING4蛋白的增强表达。

改良酶消化法在人脑胶质瘤细胞快速原代培养中的应用

目的建立一种人脑胶质瘤细胞原代培养的改良酶消化法。方法基于文献并结合实际工作中经验,改良既往文献报道的酶消化法,对32例不同级别的胶质瘤进行消化后行原代细胞培养,通过倒置相差显微镜观察肿瘤细胞的形态学特点,传代时采用差速贴壁法对原代细胞进行纯化。采用细胞免疫荧光法对原代细胞进行鉴定,通过细胞增殖实验(CCK-8法)绘制生长曲线,研究体外培养细胞的增殖情况。结果采用改良的酶消化法成功培养28例,失败4例,成功率为87.5%。培养成功的细胞贴壁生长,细胞状态稳定,形态各异,生长状态良好,并可传代。细胞免疫荧光检测显示胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达阳性,证明培养的细胞为胶质瘤细胞;细胞增殖实验显示细胞在体外增殖活跃,肿瘤病理级别越高,细胞增殖能力越强。结论改良的酶消化法用于人脑胶质瘤细胞原代培养具有简单、高效、成功率高等优点。

Circ-0080229结合蛋白的筛选及其在胶质瘤调控中的意义

目的鉴定EGFR基因来源的环状RNA circ-0080229在胶质瘤中所结合的蛋白,并分析其在胶质瘤调控中所发挥的作用。方法通过PCR技术验证circ-0080229在胶质瘤中高表达,再应用RNA结合蛋白纯化实验及蛋白质谱技术,分析circ-0080229所结合的蛋白质。利用TCGA数据库进行circ-0080229结合蛋白的差异表达分析及生存分析,筛选出最有价值的circ-0080229结合蛋白ANXA2,并进行细胞功能实验的验证。结果共有33个蛋白可与circ-0080229结合,其中以ANXA2和SIL1为代表的蛋白与胶质瘤病理分级和预后相关。在胶质瘤U251细胞系中,下调ANXA2的表达可显著抑制细胞的增殖、迁移及侵袭能力。结论环状RNA circ-0080229可特异性结合ANXA2等RNA结合蛋白,同时circ-0080229结合蛋白ANXA2可促进胶质瘤的增殖能力、迁移能力与侵袭能力。

pEGFP-ING4抑制裸鼠皮下人U87移植瘤生长及肿瘤血管生成

目的探讨pEGFP-ING4对裸鼠体内人U87细胞移植瘤生长及对肿瘤血管生成的影响。方法将成功构建的18只人U87细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为pEGFP-ING4和pEGFP-C2转染组及PBS空白对照组3组,测量各组肿瘤的体积变化,荧光显微镜观察转染瘤体内绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达情况,免疫组织化学SABC法检测微血管密度(microvessel density,MVD)。结果荧光显微镜下pEGFP-ING4组和pEGFP-C2组均观察到GFP表达,接种后第21d、28d、35d各组皮下肿瘤体积(mm3)为:PBS组(201.8±19.3,418.9±26.4,622.1±51.3),pEGFP-C2组(197.6±18.9,398.4±20.4,593.7±48.7),pEGFP-ING4组(138.9±8.4,198.7±21.5,293.2±31.6),肿瘤接种后在同一时间点内,pEGFP-ING4组肿瘤体积明显小于另外两组(P<0.05);MVD检测(个/mm2):PBS组(15.83±0.98),pEGFP-C2组(15.83±1.62),pEGFP-ING4组(4.17±1.17),与另外两组比较,pEGFP-ING4组MVD明显降低(P<0.01)。结论 ING4基因能够明显抑制人U87细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,抑制胶质瘤血管的生成可能是其抗肿瘤的重要机理之一。

ING4蛋白对人胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨ING4(inhibitor of growth family 4)蛋白对人胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响。方法用PEI转染ING4蛋白过表达(pEGFP-C2/ING4转染组)及阴性对照载体(pEGFP-C2转染组)至人胶质瘤U251细胞,G418筛选后建立ING4蛋白稳定表达细胞株;RT-PCR、免疫组化、Western blot检测ING4蛋白的表达,MTT法和Hochest法检测U251细胞的增殖和凋亡。结果 pEGFP-C2/ING4转染组和pEGFP-C2转染组转染U251细胞效率分别为84%和82%;RT-PCR、免疫组化、Western blot均检测到pEGFP-ING4转染组ING4的强表达;与pEGFP-C2转染组和空白对照组相比,pEGFP-C2/ING4转染组的U251细胞72 h后生长抑制率和凋亡率有统计学差异(P<0.05)。结论 ING4蛋白对胶质瘤U251细胞有显著的增殖抑制和诱导凋亡作用。

1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖靶向NFKB2的分子对接研究

目的:1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖是否可与NFKB2形成良好的分子对接,形成稳定的相互作用。方法:使用Auto Dock软件计算NFKB2与PGG的结合模式和亲和力。结果:PGG与受体NFKB2具有较好的对接,可形成稳定的相互作用,极性相互作用及氢键是主要的相互作用类型。结论:PGG很有可能通过NFKB2发挥作用,NFKB2很有可能是PGG的作用靶点。

siRNA干扰微管微丝交连因子1表达增强替莫唑胺诱导的胶质瘤细胞毒性

目的研究微管微丝交连因子1(MACF1)在胶质母细胞瘤应对TMZ刺激中的作用。方法替莫唑胺刺激人类胶质母细胞瘤细胞系U87细胞后,通过Western blot、RT-PCR和免疫荧光检测其蛋白表达和细胞内定位。通过RNA干扰技术干扰MACF1的表达。通过裸鼠皮下成瘤和免疫组化检测在活体中TMZ刺激后胶质母细胞瘤中MACF1的表达。结果在体外培养和体内成瘤中均发现替莫唑胺刺激后胶质母细胞瘤MACF1的表达上调(差异约2倍),胞内分布改变(P<0.01)。敲除MACF1表达的胶质母细胞瘤细胞在TMZ刺激后其增殖能力下调约45%(P<0.01)。替莫唑胺诱导胶质母细胞瘤MACF1表达上调的同时,其细胞骨架发生重组。结论 MACF1可能成为胶质母细胞瘤治疗的一个潜在靶点。

轻型缺血性卒中静脉溶栓患者疗效及安全性分析

目的分析轻型缺血性卒中(MIS)患者在不同溶栓时间窗应用重组组织型纤溶酶原激活物(rtPA)静脉溶栓急性期并发症和90 d预后的差异。方法回顾性收集神经内科住院并接受静脉溶栓治疗NIHSS基线评分≤5分的轻型缺血性卒中患者,共166例。按溶栓时间窗不同分为0~3 h和~4.5 h两组,观察并比较急性期出血转化、溶栓后24 h NIHSS评分变化及90 d的mRS评分。结果0~3 h组患者24 h NIHSS减分≥1分及24 h NIHSS恢复至0分的比例明显高于~4.5 h组患者(67.1%vs 49.0%,P=0.020;27.1%vs 13.5%,P=0.028)。90 d良好预后(mRS评分0~1分)的比率为85.5%,症状性颅内出血比率为1.2%,logistic回归分析显示导致90 d不良预后的危险因素为:大血管病变(95%CI 0.133~0.860)、溶栓后出血转化(95%CI 0.020~0.556)。结论轻型缺血性卒中患者溶栓治疗短期预后好,症状性颅内出血发生率低,大血管闭塞可能与不良预后有关。

Willis环及脑白质变化对急性缺血性脑卒中静脉溶栓患者预后的影响

目的探讨急性缺血性脑卒中患者Willis环的形态特征与脑白质病变(WML)关系,分析两指标对静脉溶栓预后1年的影响.方法收集分析急性缺血性脑卒中静脉溶栓患者发病时Willis环形态特征与WML关联性,并观察其溶栓1年后的预后情况,同时纳入溶栓预后危险因素进行多因素logistic回归分析.结果本研究患者232例,男172例,女60例,不同部位Willis环变异的WML评分高于Willis环完整组(F=5.594,P=0.003).影响患者1年预后不良(复发/死亡)的危险因素包括:WML评分(rs=0.155,P=0.018)、Willis变异(rs=0.162,P=0.014)、溶栓前血糖(rs=0.147,P=0.030).logistic逐步回归分析显示WML评分(95%CI 1.003~1.432)、Willis变异(95%CI 1.032~3.497)是急性缺血性脑卒中溶栓患者1年预后不良的相关危险因素.结论Willis环变异和WML是急性缺血性卒中静脉溶栓后1年预后的不良(复发/死亡)危险因素.

颅骨骨膜减张修补硬脑膜在急性小脑幕切迹疝去骨瓣减压手术中的应用

目的分析比较急性小脑幕切迹疝去骨瓣减压手术中,颅骨骨膜瓣减张修补硬脑膜与常规缝合硬脑膜的临床疗效。方法回顾性统计分析2016年1月份~2017年6月份我院急性小脑幕切迹疝去骨瓣减压手术患者的预后,采用曼-惠特尼U检验(Mann-Whitney U test)分析颅骨骨膜瓣减张修补硬脑膜(观察组,n=26)与常规缝合硬脑膜(对照组,n=241)两组患者GOS的差异。结果两组组患者GOS比较,U检验发现硬脑膜减张缝合组(观察组)的GOS与对照组之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论硬脑膜减张缝合组的患者预后明显优于常规缝合组,并发症明显小于对照组。

神经内镜下经鼻蝶切除垂体瘤手术的临床效果和安全性观察

目的分析神经内镜下经鼻蝶切除垂体瘤手术的效果及安全性。方法随机择取接受治疗的80例垂体瘤患者,根据手术方式分为对照组和观察组各40例,对照组行传统经单鼻孔入路垂体瘤切除术、观察组行神经内镜下经鼻蝶切除术治疗。对比两组肿瘤切除范围、并发症、手术时间及日常生活质量。结果治疗前,两组日常生活质量无明显差异(P>0.05);治疗后,观察组显著优于对照组(P<0.05)。观察组肿瘤切除范围及并发症发生率、手术时间均显著优于对照组(P<0.05)。结论选择神经内镜下经鼻蝶切除术治疗垂体瘤的效果理想,操作更加简便,所带来的创伤较小,具有较高的安全性,应当借鉴、采纳。

高血压脑出血钻孔引流术中血肿组织清除情况与炎症因子水平的关系研究

目的研究钻孔引流术清除高血压脑出血患者血肿组织清除情况与炎症因子水平。方法选取我院2016年3月～2018年3月行血钻孔引流术治疗的高血压脑出血患者112例,根据术后24h内头颅CT复查结果将其分为完全清除组(残留血肿体积≤5ml)62例和部分清除组(残留血肿体积≥10ml)50例。观察两组患者治疗1、2周的炎症因子水平、血流参数水平、出血量及周围水肿情况。结果治疗1、2周,完全清除组TNF-α、TXB2、SF水平均明显低于部分清除组(P<0.05);治疗1、2周,完全清除组平均血流量、平均血流速水平均明显高于部分清除组(P<0.05);治疗1、2周,完全清除组外周阻力水平均低于部分清除组(P<0.05);治疗1、2周,完全清除组出血量、周围水肿量均低于部分清除组(P<0.05)。结论采用钻孔引流术完全清除高血压脑出血患者的血肿组织,患者的炎症水平将明显降低,且能有效减少术后出血及水肿。

趋化因子配体18在人脑胶质瘤中表达的临床意义

目的:探讨趋化因子配体18在人脑胶质瘤中表达情况及与患者预后相关性,分析其作为胶质瘤预后判断指标的可能性。方法:本文采用实时荧光定量PCR和Western Blotting方法检测CCL18在正常人脑组织及不同级别胶质瘤中的表达情况,并利用生存曲线对患者的生存预后进行分析。结果:CCL18在人胶质瘤组织中均高表达,且在高级别较低级别胶质瘤组织中表达更高,差异具有统计学意义(P<0.05),在低级别胶质瘤中相对于正常脑组织表达增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。CCL18表达量越高,胶质瘤患者中位生存期越短(P<0.05)。结论:CCL18是神经胶质瘤恶性程度的重要标志,且可作为判断胶质瘤患者预后的指标。

TTF-1在脑转移瘤中的表达及临床意义

目的:探讨脑转移瘤标本中TTF-1的表达情况及其与患者生存时间的关系。方法:回顾性分析脑转移瘤患者50例的生存时间,检测病理标本中TTF-1的表达情况。采用Kaplan-Meier法绘制不同TTF-1表达组的生存曲线,用Log-rank检验不同TTF-1表达组的生存曲线是否存在差异。结果:TTF-1不同表达的两组患者的生存时间存在明显差异(P<0.05)。结论:TTF-1可以在多种脑转移瘤中表达,TTF-1阳性患者的预后优于TTF-1阴性患者。

巨大颅骨血管瘤合并动脉瘤样骨囊肿一例

本文报道一例巨大颅骨血管瘤合并动脉瘤样骨囊肿。

颅脑朗格汉斯细胞组织细胞增生症的临床分型与治疗分析

目的探讨颅脑朗格汉斯细胞组织细胞增生症(LCH)的临床分型与治疗方法。方法选择中山大学孙逸仙纪念医院神经外科自2008年1月至2019年1月行颅脑手术并且术后病理免疫组化结果符合LCH诊断标准的患者,参考国际组织细胞协会临床分型将其分为7型:Ⅰ型:颅骨单部位,Ⅱ型:颅骨单部位可危及中枢神经系统(CNS),Ⅲ型:颅骨多部位,Ⅳ型:CNS单部位,Ⅴ型:CNS多部位,Ⅵ型:多系统低危,Ⅶ型:多系统高危。根据分型采取2种治疗方法:Ⅰ型采取单纯局部病灶手术切除,Ⅱ~Ⅶ型进行颅脑病灶切除或活检后按日本朗格汉斯细胞组织细胞增生症研究组(JLSG)制定的方案化学治疗,并按JLSG疗效标准进行评价。结果研究共纳入Ⅰ型17例,Ⅱ型2例,Ⅲ型1例,Ⅳ型1例,Ⅴ型0例,Ⅵ型10例,Ⅶ型15例。随访1~10年,Ⅰ型17例患者均未见复发;Ⅱ~Ⅶ型29例患者术后化学治疗中诱导治疗有效27例,诱导有效率为93.1%;2例化学治疗无效改用其他化学治疗方案,其中1例随访1年病情稳定。结论颅脑LCH Ⅰ型患者局部手术切除可达临床治愈,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ型患者行病灶活检或切除术后联合JLSG方案化学治疗能够获得较好疗效,对初始诱导6周无反应和疾病进展的LCH患者及时更换挽救方案能改善疗效。