野生稻CBF/DREB1转录因子的鉴定与生物信息学分析

低温冷害是限制栽培稻地域分布和产量的重要因素之一,严重影响我国的粮食安全。以CBF/DREB1为核心的C-重复结合因子-冷调节基因(CBF-COR)途径是水稻适应低温的重要信号传导途径。基于稻属9种植物的全基因测序结果和隐马尔可夫模型(HMM)搜索,共鉴定出71个CBF/DREB1基因序列。所有基因均无内含子,由单个外显子组成。大部分DREB1s呈弱酸性,所有DREB1s亲水性平均值<0。进化树分析进一步将其分为3个组:DREB1A/1B/1H、DREB1C/1E/1F/1G和DREB1D/1I/1J,各组成员除AP2保守结构域和侧翼序列外,其他保守基序组成差别较大。适应性进化分析粳亚种和其他水稻的直系同源基因对,发现OsDREB1A/ObDREB1A、OsDREB1D/OnDREB1D、OsDREB1I/OsIDREB1I和OsDREB1J/OsIDREB1J四对基因非同义替换/同义替换(Ka/Ks)值均>1,受到正选择压力。旁系同源基因之间启动子顺式元件种类和数量差异较大,直系同源基因的启动子顺式元件种类和数量很相似。对日本晴、93-11和东乡野生稻7 d幼苗4℃冷处理2 h的实时荧光定量PCR分析发现早期冷响应基因可分为激活型(DREB1A/1B/1C/1E/1F/1G/1H)和抑制型(DREB1D/1I/1J)。在日本晴、93-11和东乡野生稻冷激活型基因中,DREB1B/1G/1H均是冷处理后响应最快的一级冷响应因子,且启动子均含有至少一个拷贝的CAMTA转录因子结合元件CM2(CCGCGT)。OrDREB1B/1C/1E/1F/1G/1H在东乡野生稻4℃冷处理4 h后的表达量均高于栽培稻同源基因的表达量。9种稻属植物的CBF/DREB1基因亚家族的分子进化分析结果为低温抗性基因的挖掘和利用提供了前期基础。

小麦耐盐突变体盐胁迫下的蛋白质组分析

首次采用双向电泳的方法分析 1%NaCl胁迫 72h的一对小麦耐盐 (RH870 6 4 9)及敏盐突变体 (H870 6 34)的蛋白质组。经过MALDI TOF分析和数据库检索发现两者在H+ ATP酶 β亚基、谷氨酰胺合成酶前体、OEC33和RuBP羧化酶小亚基等 5个候选蛋白存在质或量的差异。这 5种蛋白均为叶绿体蛋白 。

单克隆抗体制剂的最新进展

杂交瘤技术建立以来,单抗研究走过了漫长而又曲折的历程,分子生物学的发展使单抗从诊断工具变为有效的治疗药物.近时期,单抗作为治疗制品有了迅速的发展,其在生物技术治疗药物的研究开发中占有重要地位.主要阐述了单克隆抗体人源化、核素耦联特异性抗肿瘤抗体、单克隆抗体导向药物、单克隆抗体生产技术、治疗用单抗制剂等5个方面的最新进展.

植物冷信号传导机制研究进展

低温胁迫能限制植物地理分布并影响作物产量,但是在适宜的低温条件下处理一段时间后植物就可以获得更强的抗冷和抗冻能力,这个过程称为冷驯化。在冷驯化的过程中,植物感知环境低温,通过一系列信号传导事件调节耐冷相关基因的表达,提高植物的耐冷性。介绍了目前冷信号传导机制研究的一些新进展:包括新发现的冷信号传导途径的上游组分CHILLINGTOLERANCE DIVERGENCE 1(COLD1)和OPEN STOMATA1(OST1);对冷信号途径中关键转录因子C-REPEAT BINDING FACTORS(CBFs)进行CRISPR/Cas9敲除后的转录组测序结果以及短时间冷胁迫处理的蛋白质组学研究结果等。并且根据这些研究进展,总结了一个冷信号传导途径的模式图。

MBP-PTP19融合蛋白载体构建及蛋白纯化

蛋白磷酸酶在植物生长发育过程中发挥着重要的调控作用.酪氨酸蛋白磷酸酶属于蛋白磷酸酶中一个亚家族,在植物领域的研究中涉及较少.笔者所在实验室研究数据表明,酪氨酸蛋白磷酸酶19(PTP19)在植物盐响应中起负调控作用.使用MBP标签载体,构建MBP-PTP19融合蛋白表达载体,转化BL21大肠杆菌.以IPTG浓度、诱导时间、诱导温度3个因素设计L18正交实验探索MBP-PTP19蛋白的最佳诱导表达条件.找到该蛋白表达的最适诱导条件为IPTG终浓度0.1mmol/L、诱导时间4h、诱导温度37℃.该融合蛋白在上清液以及包涵体中均有分布.用直链淀粉树脂纯化得到了MBP-PTP19蛋白,并以其为抗原制备了PTP19的抗体,且抗体可识别PTP19蛋白,这为研究PTP19蛋白生化性质及其功能奠定了基础.

大花蕙兰快速繁殖技术初报

通过对大花蕙兰的组织培养试验 ,筛选出 B5+ BA1 .0 + 2 ,4 D2 .0 的组合对大花蕙兰花梗诱导类原球茎有明显作用 .B5培养基较 MS培养基更容易诱导花梗产生类原球茎 .激素 BA浓度在 1 .0～ 5 .0 mg/L之间 ,2 ,4 D浓度在 0 .5～ 2 .0 mg/L之间有利于诱导花梗产生类原球茎 .筛选出 MS+ BA1 .0 + NAA0 .5的组合对大花蕙兰类原球茎增殖有明显作用 .采用井字形切割有利于类原球茎的增殖 .

HMC毒素对同核异质玉米叶肉细胞原生质体的影响

制备并纯化了玉米小斑病菌C小种致病毒素(HMC),利用根冠细胞进行毒素活性检测,结果表明其对玉米C型不育细胞质具有专化活性.同时提取了同核异质玉米C103叶肉细胞原生质体,并用纯化后不同质量浓度的HMC毒素对同核异质C103叶肉细胞原生质体进行处理,光学显微镜下观察并统计HMC毒素对同核异质玉米叶肉细胞原生质体的影响,从而对玉米小斑病菌C小种的致病性进行研究.研究结果表明,HMC毒素可以导致C103玉米C型不育细胞质叶肉细胞原生质体质膜破裂,细胞内容物泄漏.

水稻OsDREB1A的原核表达及重组蛋白活性分析

OsDREB1A是水稻冷信号传导途径中重要的转录因子。本研究将水稻日本晴OsDREB1A基因通过双酶切方法连接至MSC-TOPOII载体,并重组构建到表达载体PGEX-4T-1,获得融合蛋白表达质粒PGEX-4T-1-OsDREB1A,转化表达菌E.coli BL21(DE3)Condon Plus,诱导表达后通过亲和层析柱Glutathione agarose 4B纯化获得了分子量大小正确的OsDREB1A-GST融合蛋白,EMSA检测发现低温18℃诱导纯化的融合蛋白可以在体外成功结合CRT/DRE顺式元件。为进一步研究OsDREB1A在冷信号传导中的生物学功能奠定了基础。

基于“翻转课堂”理念的“食品毒理学”教学模式改革与实践

"食品毒理学"是我校食品质量与安全专业的一门必修课。翻转课堂是一种新型的教学理念。将翻转课堂教学理念引入食品毒理学课程的教学中,结合本专业教学实际,构建了一种新的教学模式,并进行了两年的实践应用,以期对翻转课堂教学模式在高等教育中的应用提供参考。对教学实践情况的分析表明,该教学模式可提高学生对"食品毒理学"课程的兴趣,可以提升学生的自学、语言表达、分析解决问题等多方面的能力,还对该教学模式实施过程产生的一些问题进行了探讨。

快速小量提取质粒DNA的两种方法

碱裂解法是进行分子克隆实验中质粒DNA制备最为常用的方法。在实际实验操作过程中,对该实验方法进行了改进,改进的碱裂解法解除了所提质粒DNA中RNA污染及RNase的可能影响,快速提取法使阳性克隆的筛选更加迅速,快捷。两种方法的改进使实验更加高效、简单、实用。