幽门螺杆菌Lpp20重组蛋白的表达、纯化及其免疫活性初步研究

目的表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)脂蛋白Lpp20基因的重组蛋白,并检测其免疫活性。方法应用PCR技术从H.pylori标准株26695染色体DNA中扩增出Lpp20的编码基因片段,将其克隆至表达载体pGEX-6P-2上,在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)BL21中表达并进行GST亲和层析纯化,用Western blot方法检测纯化产物重组Lpp20(recombinantLpp20,rLpp20)的免疫反应性。免疫C57BL/6小鼠后,以rLpp20为包被抗原建立间接ELISA法对免疫小鼠血清进行特异性抗体检测;ELISA双抗体夹心法检测小鼠脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ、IL-2、IL-4水平;MTT比色法检测小鼠脾淋巴细胞增殖反应等指标以分析rLpp20的免疫活性。结果扩增的lpp20全长528 bp,与GenBank上公布的H.pylori 26695株lpp20序列作BLAST比较,结果完全一致;成功构建了pGEX-6P-2/Lpp20重组质粒,表达的rLpp20 M_r 43 000,纯化产物可被鼠抗H.pylori抗体识别;以rLpp20为包被抗原建立的间接ELISA法检测免疫小鼠血清,与对照组相比rLpp20免疫组可见阳性反应;rLpp20免疫组小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后,培养上清中IFN-γ、IL-2和IL-4含量均明显升高;脾淋巴细胞增殖反应测定,rLpp20免疫组小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后,刺激指数也明显升高,与对照组有明显差异。结论rLpp20具有良好的免疫活性,在小鼠体内可诱导较强的特异性体液免疫和细胞免疫应答,为筛选高效的H.pylori疫苗抗原奠定了基础。

情景教学法在医学免疫学教学中的应用

医学免疫学作为现代生命科学的三大前沿学科之一，伴随着细胞生物学、分子生物学的发展而获得了迅猛发展。其理论与技术已经广泛渗透至生物学、基础医学、临床医学及预防医学等各专业，成为生物医学重要的基础学科之一[1]。但是，医学免疫学在内容上相对来说比较抽象、枯燥，而内在的联系性和逻辑性却很强，这对于初次接触免疫学的医学生来说不容易理解和掌握，常常感到听不太懂，继而产生畏惧心理，也是历届学生反映较难学的课程之一，教学效果常常是事倍功半[2]。因此，针对医学院校医学免疫学课程的教学，不仅要重视基本概念、基本理论的讲解，而且更应当注重相关知识之间的内在联系与逻辑性，注重教育教学方法的改革。现总结情景教学法在医学免疫学教学中的应用。

幽门螺杆菌尿素通道蛋白ureI基因真核表达载体的构建及表达

目的构建幽门螺杆菌(H.pylori)尿素通道蛋白编码基因(ureI)的真核表达重组载体,并在HeLa细胞中表达,为核酸疫苗的研制奠定基础。方法以H.pyloriSS1株基因组为模板,PCR扩增ureI目的基因片段,定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)多克隆酶切位点中,构建重组载体pcDNA3.1(+)/ureI;通过酶切、PCR及测序鉴定,筛选阳性重组载体;脂质体法转染重组质粒入HeLa细胞,Western blot检测其在HeLa细胞中的表达。结果以H.pyloriSS1株基因组DNA为模板扩增出特异的ureI基因片段,大小约585 bp;双酶切及测序鉴定证明成功构建了H.pylori真核表达重组载体pcDNA3.1(+)/ureI;该重组质粒能够在HeLa细胞中表达目的蛋白。结论成功构建了真核重组载体pcDNA3.1(+)/ureI,并能在HeLa细胞中表达。

1例原发性血小板增多症三次妊娠结局分析

原发性血小板增多症(essential thrombocythemia,ET)是骨髓增殖性肿瘤的亚型之一,属于源自造血干细胞的克隆性疾病。已有研究显示,ET孕妇妊娠期间出现流产、血栓等并发症的风险高于正常孕妇,对ET孕妇给予必要的治疗可以改善母儿预后。但国内相关报道较少,为提高临床医师对此病的认识及处理水平,现对1例ET患者的三次孕期诊治经过及妊娠结局情况进行总结。

高职院校校企合作育人机制的实践与探索

职业性决定职业教育离不开校企合作,校企合作的形式随着企业升级、经济转型而不断转变。通过对校企合作历程的总结,展现了随着社会发展,校企之间的关系从疏远到亲近再到亲密的发展趋势。旨在通过对校企合作模式的实践探索总结,为职业院校开展深入有效的校企合作提供参考。

母体基础状态和伴随疾病与B群链球菌感染的相关性研究

目的研究妊娠母体的基础状态及伴随疾病与B群链球菌感染的相关性。方法选择某院213例经传统培养法鉴定为GBS感染患者,作为GBS(+)组;从GBS培养鉴定结果为阴性的所有患者中,随机抽取213例GBS阴性者为GBS(-)组。对两组对象的年龄、产次、孕次、体质量指数(BMI)及妊娠期糖尿病、妊娠期高血压病、子宫平滑肌瘤、贫血的发生率进行统计分析。结果GBS(+)组孕妇的BMI明显高于GBS(-)组,差异具有统计学意义(P<0.05)。GBS(+)组、GBS(-)组的孕妇年龄、产次、孕次及伴随疾病之间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论B群链球菌感染与妊娠母体的BMI有明显的相关性。体质量监测对控制孕妇B群链球菌感染有积极意义。

惠州地区2015-2018年育龄期妇女无乳链球菌检出情况分析

目的了解惠州地区育龄期妇女无乳链球菌(Streptococcus agalactiae,S.agalactiae),又称B群链球菌(Group B Streptococcus,GBS)的检出情况,为惠州地区是否在孕晚期妇女中开展GBS筛查提供依据。方法收集2015年1月-2018年12月惠州市妇幼保健计划生育服务中心就诊患者送检各类标本的细菌培养鉴定结果,分析GBS的检出情况及分布状况。结果2015年1月-2018年12月期间送检的48228份细菌培养鉴定标本中,共分离无乳链球菌525株,其中育龄期妇女标本中检出487株,主要分离自宫颈分泌物(88.91%)、阴道分泌物(6.98%)及羊水标本(2.05%);三类标本经细菌培养鉴定检出的病原菌中,GBS占比分别达20.16%、10.73%、29.41%,均位于前三位;2015-2018年间惠州地区育龄期妇女生殖系统标本中GBS的总检出率为3.9%,各年度间GBS的检出率差异无统计学意义(P>0.05);GBS阳性者主要集中于21~30岁、31~40岁两个年龄段,分别占65.41%、28.51%,但GBS引起育龄期妇女生殖系统感染的机率不存在年龄差异;生殖系统标本GBS的检出率分别为:宫颈分泌物3.81%、阴道分泌物4.81%、羊水7.19%,经分析差异无统计学意义(P>0.05)。结论GBS是引起惠州地区育龄期妇女生殖系统感染的主要病原体之一,惠州地区GBS的检出率不因年度而改变,且GBS引起育龄期妇女生殖系统感染的机率不存在年龄差异,鉴于其对妊娠结局的特殊影响,做好本地区孕晚期妇女GBS的筛查十分必要。

惠州地区B群链球菌感染与不良妊娠结局的相关性分析

目的:分析惠州地区妊娠晚期妇女B群链球菌(GBS)感染与不良妊娠结局的相关性。方法:将426例孕35~42周妇女按是否感染B群链球菌分为观察组(GBS阳性组)和对照组(GBS阴性组)。回顾性分析其胎膜早破、早产、宫内感染、胎儿宫内窘迫、胎儿生长受限等不良妊娠结局的发生频次,并进行统计分析。结果:妊娠中晚期妇女GBS阳性组胎膜早破的发生率为62.44%,GBS阴性组胎膜早破的发生率为52.11%,GBS阳性组胎膜早破发生率比阴性组高10.33%,差异具有统计学意义(P<0.05)。其他不良妊娠结局均与GBS是否感染不相关。结论:B群链球菌感染是胎膜早破发生的独立危险因素。对GBS感染的孕妇,应尽早进行临床干预。

手工法细菌分离接种技术实践教学心得

在全国职业院校检验技能竞赛的启发下,对手工法细菌分离接种技术的实践教学心得进行总结,以更好地促进学生对该技术的理解与掌握。

幽门螺杆菌脂蛋白Lpp20的表达纯化及其临床应用的初步研究

目的获得重组幽门螺杆菌(H.pylori)脂蛋白(rLpp20),并研究其在血清学诊断中的应用价值。方法应用重组质粒pGEX-6P-2/Lpp20在大肠杆菌(E.coli)BL21中表达,并进行GST亲和层析纯化,用Western-blot检测纯化产物(rLpp20)的免疫反应性;以rLpp20为包被抗原建立ELISA法对200份患者血清标本进行特异性IgG抗体检测,并与幽门螺杆菌-IgG抗体检测试剂盒法进行比较。结果成功表达的rLpp20(43000Mr),纯化产物可被幽门螺杆菌多克隆抗体及阳性血清识别;成功建立了以rLpp20为包被抗原的间接ELISA法,其灵敏度为91.0%,特异度为100%。与试剂盒法比较,两者的符合率为95.5%。结论 Lpp20具有良好的免疫反应性,能与幽门螺杆菌阳性血清特异性结合,有望应用于幽门螺杆菌血清学诊断。

幽门螺杆菌Lpp20-IL2核酸疫苗免疫活性

【目的】观察pcDNA3.1(+)/Lpp20-IL2免疫C57BL/6小鼠后所产生的体液免疫和细胞免疫应答水平,为研制高效、新型的幽门螺杆菌核酸疫苗提供实验依据。【方法】构建pcDNA3.1(+)/Lpp20-IL2重组载体,并转染HeLa细胞,用Western-blot观察鉴定其在真核细胞得到表达后免疫C57BL/6小鼠,ELISA间接法测定小鼠血清中抗Lpp20IgG抗体水平,ELISA双抗体夹心法检测脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ、IL4水平,MTT比色法检测脾淋巴细胞增殖反应,免疫荧光组化法检测Lpp20蛋白在小鼠肌肉组织中的表达情况。【结果】成功构建了pcDNA3.1(+)/Lpp20-IL2真核表达载体,且重组质粒能在HeLa细胞内有效表达目的蛋白;小鼠接种pcDNA3.1(+)/Lpp20-IL2核酸疫苗后能产生特异性IgG抗体,8w后ELISA测定血清抗体A450值明显升高。核酸疫苗pcDNA3.1(+)/Lpp20-IL2免疫组小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后,培养上清中IFN-γ、IL4含量明显升高。pcDNA3.1(+)/Lpp20-IL2和pcDNA3.1(+)/Lpp20核酸疫苗组小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后,刺激指数明显高于空质粒组和PBS组。Lpp20蛋白在小鼠肌肉组织中能够有效表达。【结论】幽门螺杆菌Lpp20-IL2融合基因核酸疫苗和Lpp20单基因核酸疫苗均能刺激机体产生较强细胞免疫应答和体液免疫应答,且前者能诱导更强的细胞免疫应答。

乐昌市新发现一处卫氏并殖吸虫疫源地报告

目的了解粤北乐昌市并殖吸虫流行分布现状。方法采集大洞村调查点山溪中螺蛳1 700余只、溪蟹88只,检查并殖吸虫尾蚴、囊蚴。应用检出的并殖吸虫囊蚴人工感染家猫1只,收集猫粪便,检查并殖吸虫虫卵,解剖粪检虫卵阳性猫,查找并殖吸虫成虫。结果大洞村螺蛳中短尾尾蚴感染率为0.58‰(1/1 700),螺蛳鉴定为放逸短沟蜷。蟹体卫氏并殖吸虫囊蚴感染率为38.09%(32/84),溪蟹鉴定为平和华溪蟹。解剖人工感染虫卵的阳性猫,检获P.w成虫4条。结论乐昌市乐城镇大洞村为一新发现的卫氏并殖吸虫高度(II级)自然疫源地,疾病预防控制中心与医疗卫部门及政府应高度重视。

幽门螺杆菌ureI和lpp20乳酸乳球菌表达载体的构建及鉴定

目的以幽门螺杆菌尿素通道蛋白ureI和外膜脂蛋白lpp20为目的基因,分别构建乳酸乳球菌表达重组载体pNZ8112/ureI和pNZ8112/lpp20,为H.pylori乳酸乳球菌活菌口服疫苗的研制奠定实验基础。方法根据幽门螺杆菌尿素通道蛋白UreI和脂蛋白Lpp20的全基因序列,利用PRIMER5.0各设计一对引物,进行PCR扩增,获得ureI和lpp20目的基因片段,将其与分泌表达载体pNZ8112进行连接,通过电击转化进入宿主菌乳酸乳球菌NZ9000细胞内,通过酶切分析,PCR鉴定及测序鉴定,筛选阳性重组体,并进行重组疫苗菌稳定性检测。结果以H.pylori标准株基因组DNA为模板分别扩增出特异的ureI和lpp20基因片段,大小分别为588 bp和528 bp;双酶切及测序鉴定证明成功构建了H.pylori乳酸乳球菌表达重组载体pNZ8112/ureI和pNZ8112/lpp20。结论PCR扩增得到了大小约为588 bp和528 bp的H.pylori ureI和lpp20目的基因片段;并成功构建了幽门螺杆菌ureI及lpp20基因乳酸乳球菌表达重组载体。