丙二醇联合肝细胞生长因子修饰牙髓干细胞外泌体保护人表皮细胞的放射损伤

背景:肿瘤放疗以及核事故等原因引起的放射性皮肤损伤救治仍旧是一个严重的医学问题,单一的防治手段均难以达到有效的治疗结果,寻找新的综合治疗手段是重要的研究方向。目的:观察丙二醇联合肝细胞生长因子修饰牙髓干细胞来源外泌体对于人表皮放射性损伤细胞模型的保护作用及相关作用机制。方法:①使用携带人肝细胞生长因子基因的重组腺病毒感染人牙髓干细胞,超速离心法分离制备外泌体,即Ad.HGF DPSC-Exo。②通过X射线照射诱导人表皮细胞HaCaT放射损伤,细胞分别于照射前用丙二醇预处理,照射后用Ad.HGF DPSC-Exo处理。通过CCK-8法测定细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,细胞划痕实验检测细胞迁移情况,PCR检测P21和P53的表达水平。结果与结论:丙二醇、Ad.HGF.DPSC-Exo、Ad.HGF.DPSC-Exo+丙二醇均可显著改善HaCaT细胞的生长抑制、减少细胞凋亡、提高细胞增殖和迁移能力,显示出较好的辐射防护效果,且Ad.HGF.DPSC-Exo+丙二醇联合作用效果更好。此外,Ad.HGF.DPSC-Exo+丙二醇能够减轻细胞G2/M期阻滞,降低细胞周期调控基因P53和P21的表达。综上所述,丙二醇预处理联合Ad.HGF.DPSC-Exo能够有效保护放射诱导的HaCaT细胞损伤,为辐射性皮肤损伤的防治提供了新的思路和有效方法。

离子通道在糖尿病心肌病中研究新进展

糖尿病性心肌病(diabetes cardiomyopathy,DCM)是继发于糖尿病的一种特异性心肌病,其独立于高血压性、冠状动脉粥样硬化性或其他原因所致心脏病。DCM以心肌代谢紊乱和心脏微血管病变为基础,导致广泛的局灶性心肌坏死,随后发展为收缩功能障碍,最终表现为心力衰竭。离子通道在维持心肌细胞膜电位、信号传导、心肌细胞代谢方面发挥着重要作用,近年来的研究发现,钙、钾、钠等阳离子通道以及阴离子通道的改变是糖尿病心肌病发病的重要基础。本文从离子通道这一视角出发,系统性综述了糖尿病心肌病研究新进展。

体积调节性阴离子通道及其在心血管疾病中的作用研究进展

心血管疾病是威胁人类健康的主要疾病,占据多个国家病死率的榜首。体积调节性阴离子通道(VRAC)是一种对渗透压敏感、体积随着渗透压变化而改变的离子通道。近年来的研究发现,VRAC在哺乳动物的肾脏、胃肠道及心血管系统中广泛表达,包括心肌细胞、血管平滑肌细胞、血管内皮细胞等多种细胞。VRAC不仅对生理状态下的细胞容积调节起重要作用,而且与高血压、动脉粥样硬化、心力衰竭等多种疾病发生发展密切相关。

用于汉滩病毒固有免疫应答研究的永生化人脐静脉内皮细胞系的建立

目的通过导入人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因构建永生化人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC-hTERT),探索永生化HUVEC对汉滩病毒(HTNV)感染效率及细胞固有免疫调控的影响,评价HUVEC-hTERT作为研究HTNV细胞模型的潜能。方法将hTERT基因克隆入慢病毒载体,构建pCDH-CMV-hTERT-EF1-puro质粒后包装慢病毒并感染HUVEC;嘌呤霉素筛选稳定表达hTERT基因的HUVEC命名为HUVEC-hTERT;利用显微镜观察和免疫荧光细胞化学染色法对HUVEC-hTERT的形态及内皮细胞标志分子人血管性假血友病因子(vWF)、CD31和血管内皮细胞钙黏蛋白(VE-cadherin)进行鉴定;利用免疫荧光法检测HTNV感染后核衣壳蛋白(NP)阳性细胞百分比,观察HTNV对HUVEC和HUVEC-hTERT的感染效率差异;利用实时定量PCR和Western blot法分别检测感染HTNV后,病毒基因组小片段(S)及其编码的NP在不同时间点的复制水平,验证HTNV在细胞中的增殖效率;利用实时定量PCR检测细胞β干扰素(IFN-β)、黏病毒抗性蛋白A(MxA)、MxB、干扰素诱导蛋白2(IFIT2)、干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)及炎症因子环加氧酶2(COX2)、细胞间黏附因子(ICAM)和CC趋化因子配体5(CCL5)的mRNA水平并利用Western blot法检测IFIT2、IFITM3和MxA的蛋白水平,观察细胞固有免疫对HTNV的反应是否一致。利用Western blot、实时定量PCR检测感染HTNV后细胞上述分子的表达情况,观察永生化后细胞固有免疫对HTNV的反应是否一致。结果成功筛选出永生化细胞系HUVEC-hTERT,鉴定出其与HUVEC具有相同的表型并表达内皮细胞标志分子vWF、CD31、VE-cadherin;HUVEC-hTERT和HUVEC均可被HTNV感染且感染效率基本相同;在HTNV感染过程中,HUVEC-hTERT的固有免疫分子,如IFN-β、MxA、MxB、IFIT2、IFITM3、COX2、ICAM及CCL5的表达情况与HUVEC相同,表明HUVEC-hTERT固有免疫调控未发生改变。结论HUVEC-hTERT可在一定程度上代替原代HUVEC用于HTNV感染致固有免疫应答调控的研究。

基因修饰的干细胞外泌体水凝胶治疗放射性皮肤损伤的实验研究

目的研究肝细胞生长因子修饰的牙髓干细胞外泌体水凝胶对放射性皮肤损伤的促愈合作用。方法利用超速离心法分离提取外泌体,分别通过纳米颗粒跟踪分析法、扫描电镜和Western印迹法对外泌体的粒径、形态和标志蛋白进行分析。采用CCK-8、划痕实验和流式细胞术评估外泌体对辐射损伤皮肤细胞的作用。制备温敏型泊洛沙姆水凝胶,采用CCK-8法测试其生物相容性。建立小鼠放创复合伤模型,应用外泌体水凝胶进行治疗,通过创面愈合情况、创面组织HE染色和Masson染色评价创面愈合效果和治疗效果,通过Tunnel染色检测创面细胞凋亡情况,通过丙二醛含量和过氧化物酶活性检测评估创面氧化应激情况,对其作用机制进行初步分析。结果外泌体直径范围为30~150 nm,扫描电镜下呈圆盘状囊泡,CD9、CD63和TSG101表达阳性。细胞实验结果显示,外泌体能显著促进辐射损伤皮肤角质细胞和成纤维细胞的增殖和迁移,减少细胞凋亡。肝细胞生长因子修饰增强外泌体的作用。泊洛沙姆水凝胶显示出良好的温敏性和生物相容性。动物实验结果显示,外泌体治疗显著加快了小鼠放创复合伤的愈合,并抑制炎性浸润、减轻胶原沉积,肝细胞生长因子修饰外泌体促创面愈合作用最强,其促创面愈合的作用机制可能与促细胞增殖、减少细胞凋亡和氧化应激有关。结论成功制备了一种新型的基因修饰的干细胞外泌体水凝胶,并证明了其在放射性皮肤损伤治疗中的有效性,为临床放射性皮肤损伤治疗提供了一种新的策略。