胃癌患者血清lncRNA NEAT1的表达及其意义

目的检测胃癌患者外周血清中长链非编码RNA核富集转录本(NEAT)1的相对表达水平,探讨其应用于胃癌辅助诊断的可能性。方法选取2017年11月至2019年12月南通市肿瘤医院收治的胃癌初诊患者101例为胃癌组,胃良性病变患者60例为胃良性病变组,以及同期体检健康者76例为对照组。分别检测各组血清标本中lncRNA NEAT1相对表达水平和癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)水平,分析lncRNA NEAT1与临床病理参数的相关性,并用受试者工作特征(ROC)曲线评价lncRNA NEAT1、CEA、CA19-9单独及联合应用时的诊断效能。结果胃癌组、胃良性病变组及对照组血清中lncRNA NEAT1的相对表达水平分别为2.163(1.357,2.843)、1.176(0.677,1.381)、1.063(0.570,1.308),组间比较差异有统计学意义(H=52.467,P<0.001)。胃癌患者血清lncRNA NEAT1相对表达水平与患者性别(P=0.353)、年龄(P=0.382)无关,而与肿瘤最大径(P=0.031)、TNM分期(P=0.037)及淋巴结转移(P=0.046)有关。胃癌患者血清中lncRNA NEAT1相对表达水平与CEA、CA19-9均无相关性(P>0.05)。ROC曲线结果显示,lncRNA NEAT1诊断胃癌的曲线下面积和灵敏度均高于CEA、CA19-9单独诊断,三者联合诊断时效能最高。结论胃癌患者外周血lncRNA NEAT1相对表达水平升高,且与部分临床病理参数相关,lncRNA NEAT1有望成为胃癌辅助诊断新的标志物。

肿瘤坏死因子β基因多态性在中国汉族SLE病人中的分布特点及与不同人种的比较研究

目的 :探讨中国江苏地区汉族人群TNFβ基因多态性在SLE病人中分布特点 ,并与不同人种进行比较研究。 方法 :收集江苏地区 16 8名无血缘关系健康个体及 6 6例SLE病人的静脉血提取DNA ,应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR RFLP) ,分析TNFβ基因的多态性。 结果 :中国汉族SLE病人与白种SLE病人TNFβ基因频率差异无统计学意义 ;中国汉族健康个体TNFβ 1等位基因频率明显高于白种健康个体 ;SLE病人TNFβ 2基因频率较正常人明显升高 (SLE病人 6 7 4% ,正常人 5 5 1% ,P <0 0 5 ,R =1 6 8) ;中国汉族SLE病人与白种SLE病人TNFβ基因频率差异无统计学意义。 结论 :TNFβ等位基因频率在正常人分布具有种族差异 ,但在SLE病人分布无种族差异。

B淋巴细胞激活因子及其受体mRNA与系统性红斑狼疮关联性研究

目的:研究建立实时荧光定量(RFQ)-PCR法测定B淋巴细胞激活因子(BLyS)及其受体mRNA含量的方法,探讨其在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单一核细胞(PBMC)中表达的检测价值。方法:在BLyS及其受体基因保守区设计特异性的引物和荧光探针,用反转录(RT)-PCR扩增目的片段实时检测产物的荧光强度,用所建立的RFQ-PCR方法检测23例SLE患者、23名正常人外周血BLyS及其受体mRNA表达。结果:SLE患者B淋巴细胞成熟抗原(BCMA)、穿膜蛋白活化物(TACI)和B淋巴细胞活化因子受体(BAFF)-RmRNA的表达明显高于正常人(P<0.01),活动期患者的表达高于缓解期(P<0.01),抗ds-DNA抗体阳性和尿蛋白阳性的SLE患者BCMA、TACI和BAFF-RmRNA的表达高于阴性患者(P<0.01)。结论:RFQ-PCR检测BLyS及其受体mRNA含量的方法具有较好的灵敏度和重复性;SLE患者BLyS、TACI和BAFF-RmRNA表达含量升高,提示BLyS、TACI和BAFF-R可能与SLE的发病有关。

血清BLyS和APRIL水平与非霍奇金氏病关联性的初步研究

目的:研究非霍奇金氏病(NHL)患者血清B淋巴细胞刺激因子(BLyS)和增殖诱导配体(APRIL)蛋白水平,并探讨其与血清乳酸脱氢酶(LDH)的关系。方法:应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测LDH升高患者组(10例)和LDH正常NHL患者组(12例)NHL患者血清BLyS和APRIL水平,以健康志愿者(23例)作为对照;同时将血清BLyS和APRIL水平与患者血清乳酸脱氢酶(LDH)进行相关性分析。结果:NHL患者组血清BLyS水平显著低于健康对照组(P<0.05);NHL患者血清APRIL水平与健康对照组无显著性差异(P>0.05),但LDH升高患者组血清APRIL水平明显高于LDH正常患者组(P<0.05);NHL患者组和LDH升高患者组血清APRIL水平与LDH正相关(r=0.923、0.799,P<0.05)。结论:NHL患者血清BLyS、APRIL水平与健康对照组差异,提示BLyS和APRIL可能与NHL的预后及恶性程度有关。

肿瘤坏死因子基因多态性与系统性红斑狼疮

肿瘤坏死因子 (TNF)是具有多种生物活性的细胞因子 ,已经证明TNF在许多疾病中 ,尤其是在自身免疫病中起重要作用 ,为了弄清TNF与这些疾病的关系 ,人们对TNF的基因多态性与转录及其与系统性红斑狼疮的关系进行了大量研究 ,认为TNF基因多态性在一定程度影响TNF的转录 ,这为探讨TNF基因多态性与系统性红斑狼疮提供理论依据。

B淋巴细胞刺激因子及其受体与多发性骨髓瘤关联性的临床实验诊断研究

目的:探讨B细胞激活因子(BLyS)及其受体在多发性骨髓瘤(MM)发病中的作用机制。方法:用酶联免疫吸附测定法(ELISA)和实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR),对19例MM患者和30名健康人血清BLyS含量、外周血单个核细胞(PBMCs)中BLyS及其受体mRNA含量进行检测;并比较MM患者血清BLyS含量与外周血BLyS及其受体基因表达水平和免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)浓度、乳酸脱氢酶(LDH)、轻链(kap、lam)的相关性。结果:MM患者血清BLyS含量[(7.95±4.93)g/L]明显高于健康对照组[(2.70±1.09)g/L,P<0.01],并与LDH浓度呈正相关性(r=0.734,P<0.001);97.4%(18/19),84.2%(16/19)的MM患者PBMCs中BLyS、BCMA mRNA表达水平较正常人明显增高,并且也与LDH的含量呈正相关;而47.32%(9/19)患者TACI mRNA表达水平降低。结论:MM患者的血清BLyS蛋白浓度和PBMCs中BLyS及其受体基因表达水平有异常改变,说明BLyS及其受体可能参与MM的发病;BLyS及其受体表达水平也许可作为预后的一个指标。

聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测肿瘤坏死因子β基因多态性

目的 建立聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR—RFLP)检测肿瘤坏死因β(TNFβ)多态性的方法。方法 采用PCR方法扩增TNFβ第一外显子到第二外显子包含G→A突变在内的DNA片段,扩增产物用限制性内切酶Nco I酶切后电泳,分析TNFβ的基因型。结果 TNFβ检测到3种基因型,分别为TNFβ*1/1、TNFβ*1/2和TNFβ*2/2。结论PCR—RFLP检测肿瘤坏死因子β多态性方法快速、简便、准确、可靠,适合普通实验室开展及大规模研究。

实时荧光定量测定人B细胞激活因子受体基因表达水平

目的：建立实时荧光定量聚合酶链反应（RFQ-PCR）检测人B细胞激活因子受体（BAFF-R）含量的方法，及探讨其在外周血单个核细胞（PBMC）中BAFF-RmRNA表达的检测价值。方法：在BAFF-R基因高保守区设计特异性引物和荧光探针，用逆转录（RT-PCR）扩增目的片段实时检测产物的荧光强度，根据标准品建立标准曲线，由软件自动计算出待测样本中BAFF-RmRNA含量，并以BAFF-RmRNA和132MmRNA含量的比值进行BAFF-R表达水平评价。结果：RFQ-PCR检测BAFF-R含量的线性范围为10^∧9～10^∧1pg／ml，低浓度样本批内和批间变异系数（CV）分别为12．5％和11．9％，高浓度样本批内和批间CV分别为8．3％和9．3％。30名健康献血员样本的PBMC中，83％（25／30）有BAFF-RmRNA表达，范围为0．14-1．03。结论：RFQ-PCR检测BAFF-mRNA含量的方法，具有较好的检测灵敏度和重复性。

中国江苏地区汉族人群肿瘤坏死因子β遗传多态性研究

目的 探讨中国江苏地区汉族人群肿瘤坏死因子 β遗传多态性分布。方法 收集江苏地区 16 8名无血缘关系健康个体的静脉血提取DNA ,应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性 (PCR -RFLP) ,对TNFβ基因多态性进行分析。结果 TNFβ检测到三个等位基因 ,其基因型频率分别为TNFβ 1/ 1=2 1 4 % ,TNFβ 1/ 2 =4 7% ,TNFβ 2 / 2 =31 5 % ,基因型分布符合Hardy-Weinberg定律。统计分析显示 :江苏地区汉族人群TNFβ等位基因频率分布与欧美白种人均有显著性差异(P <0 0 5 )。

BNP、NT-proBNP在心力衰竭患者中的应用价值再评估

目的探讨血浆脑钠肽(BNP)、N-末端B型脑钠肽前体(NT-proBNP)在心力衰竭患者中的应用价值。方法选择住院心脏病患者99例,采用美国纽约心脏学会(NYHA)标NT-proBNP、心肌肌钙蛋白(cTnI)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的浓度,并用SPSS20.0统计软件对结果进行分析,评估其在心力衰竭中的应用价值。结果 BNP、NT-proBNP的表达水平与心功能分级成正相关;BNP、NT-proBNP联合检测的灵敏度和特异度优于单独检测,分别为92.0%和81.3%;cTnI和血脂4项指标与心功能分级无相关性。结论 BNP、NT-proBNP联合检测,可用于心力衰竭患者的诊断和分级,对临床治疗具有重要的指导意义。

长期太极拳练习对冠心病患者缺血修饰清蛋白的影响

目的观察6个月太极拳锻炼对冠心病患者血清缺血修饰清蛋白(IMA)的影响。方法于2008年1月至2009年3月选择有明确冠心病病史的门诊患者50例,采用分层随机法分为两组:(1)太极拳组(n=26),在保持原有服药习惯基础上进行为期6个月的锻炼,每周2～3次,每次30～60min。运动处方包括3个部分,即准备活动15min,正式运动30min,整理阶段10～15min。正式运动为练习24式太极拳。活动强度保持在最大摄氧量50%～60%。患者在锻炼期间保持原有生活习惯和饮食习惯。(2)对照组(n=24),不进行太极拳运动及其他方式的运动,保持原有生活习惯。实验前后检测患者IMA水平。结果50例患者全部进入结果分析。6个月后太极拳组IMA水平与锻炼前比较,差异有统计学意义(P<0.001),对照组IMA水平与6个月前比较,差异也有统计学意义(P<0.05),但IMA下降程度无太极拳组明显,锻炼后太极拳组与对照组IMA比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论冠心病患者在原有基础上增加太极拳训炼有较好的改善心肌缺血作用。

缺血修饰白蛋白在急性冠脉综合征早期诊断中的价值

目的:探讨缺血修饰白蛋白(IMA)对急性冠脉综合征(ACS)的早期诊断价值。方法:研究61例急性胸痛<6h的患者,分别测定IMA、肌钙蛋白(cTnI)并记录心电图(ECG)。ACS的诊断是由不知道IMA检测结果的心内科专家根据病史、体格检查以及就诊当时及随后的心电图、心肌酶cTnI等结果作出。结果:IMA、ECG及cTnI对心肌缺血灵敏度分别为80%、43%及26%。IMA与cTnI结合灵敏度达89%,三者结合灵敏度达92%。结论:IMA联合常规检测方法,可提高对急性冠脉综合征早期诊断能力。

实时荧光定量检测HCV RNA含量的临床意义

目的:建立实时荧光定量RT-PCR(RFQ-RT-PCR)检测HCV RNA含量的方法,初步探讨HCV RNA含量变化与病情的相关性. 方法:HCV抗体阳性样本80例,包括慢性肝炎(CH) 39例,肝硬化(LC)23例,肝癌(HCC)18例,献血员样本40例为正常对照.在HCV基因组5’非编码区(5’UTR)设计特异性引物和一对杂交探针,构建相应基因片段载体,体外转录RNA作为标准品,根据其建立的标准曲线对血清HCV RNA进行定量,同时用传统的套式RT-PCR进行定性分析. 结果:本法检测HCV RNA含量的线性范围为1012-104copies/L,批内和批间重复性测定的v分别为1.68-5.97%和6.40-10.58%.在HCV抗体阳性患者中, 肝硬化和肝癌患者的HCV RNA含量显著高于慢性肝炎患者(7.75±0.29,7.86±0.32 vs 4.67±0.41,P<0.05), 而且HCV RNA含量与ALT水平呈正相关(r=0.89, t=8.29,P<0.05). 结论:RFQ-RT-PCR检测HCV RNA含量具有较好的灵敏度和特异性,其含量与丙型肝炎患者的病情变化及严重程度有一定相关性.

血清Cyfra21-1、CEA及SF联合检测在非小细胞型肺癌中的临床应用

目的探讨血清细胞角蛋白19片段（Cyfra21-1）、癌胚抗原（CEA）、血清铁蛋白（SF）联合检测在非小细胞型肺癌（non-small-cell cancer,NSCLC）诊断中的临床应用价值。方法采用化学发光免疫分析法检测72例NSCLC患者、54例良性肺部疾病患者以及53健康体检合格者血清Cyfra21-1、CEA以及SF水平并进行比较分析。结果 NSCLC组患者血清Cyfra21-1、CEA及SF浓度显著高于良性肺疾病组以及对照组（P〈0.05）。NSCLC患者血清Cyfra21-1、CEA与TNM分期、病理类型以及有无淋巴结转移有关（P〈0.05）;而血清SF与NSCLC患者临床病理参数之间无相关性（P〉0.05）。血清Cyfra21-1、CEA及SF联合检测用于NSCLC诊断的Cut-off值为0.33,曲线下面积（AUC）为0.948,95%CI为0.913~0.984;诊断的灵敏度为91.67%,特异性为88.79%,阳性预测值为84.62%,阴性预测值为94.06%,诊断总有效率为89.94%;3指标联合检测的诊断价值以及临床效能评价均优于Cyfra21-1、CEA及SF单独检测以及CEA＋SF二指标联合检测。手术后血清3指标均阳性的NSCLC患者,其生存时间明显短于单指标阳性和双指标阳性的NSCLC患者（P=0.011）;同时,血清3指标均阳性时可用于判断NSCLC患者的不良预后,其相对风险度为3.950,95%CI为1.639~9.519,P=0.002。结论 NSCLC患者血清Cyfra21-1、CEA及SF均显著增高,且3指标联合检测对于NSCLC诊断及预后评估具有重要的临床价值。

实时荧光定量PCR检测大肠癌患者外周血鸟苷酰环化酶C基因及其临床意义

目的:建立人鸟苷酰环化酶C(GC-C)含量实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)检测的新方法,观察大肠癌患者外周血单个核细胞(PBMC)GC-C mRNA表达水平并探讨其临床意义.方法:在GC-C基因高保守区设计了特异性的引物和探针,RT-PCR扩增目的片段并实时检测产物的荧光强度,根据标准品建立的标准曲线,由软件自动计算出待测样本(30例健康献血员、11例大肠良性病变和37 例大肠癌)中GC-C mRNA准确含量,并以GC-C mRNA和β2微球蛋白 mRNA含量的比值作为评价GC-C表达水平的指标.结果:本法检测GC-C mRNA含量的线性范围为101 ～109 pg/ml,样本批内和批间变异系数(CV)值分别为6.87%～11.12%和8.86%～15.19%.30例健康献血员和11例大肠良性病变样本的PBMC中均未检出GC-C mRNA表达,大肠癌患者外周血GC-C mRNA的检出率为83.8%(31/37).大肠癌患者外周血PBMC GC-C mRNA表达水平为0.88±0.06,与Duke分期、淋巴结转移和肝转移密切相关,与年龄、性别、肿瘤大小等无关.结论:GC-C mRNA RFQ-PCR检测外周血大肠癌细胞具有较好的检测灵敏度、特异性和重复性,GC-C mRNA表达水平可能对指导大肠癌Duke分期、判断淋巴结转移和肝转移、指导术后综合治疗均有一定价值.

多发性骨髓瘤患者B淋巴细胞刺激因子及其受体的表达水平

目的探讨B细胞激活因子（BLyS）及其受体在多发性骨髓瘤（MM）发病中的作用机制.方法用酶联免疫吸附测定法（ELISA）和实时荧光定量聚合酶链反应（RFQ—PCR），对31例MM患者和30名健康人血清BLyS含量、外周血单个核细胞（PBMCs）中BLyS及其受体mRNA含量进行检测;并比较MM患者血清BLyS含量与外周血PBMCs中BLyS及其受体基因表达水平和β2微球蛋白（β2M）的相关性.结果MM患者血清BLyS含量（6．99±3．28g/L）明显高于健康对照组（2．70±1．09g/L，P〈0．01），并与β2M浓度呈正相关性（r=0．954，P=0．000）;77．42%（24/31），93．55%（29/31），90．32%（28/31）的MM患者血清BLyS蛋白和PBMCs中BLyS，B细胞成熟抗原（BCMA）mRNA表达水平较正常人明显增高，并且也与β2M的含量呈正相关;而64．52%（20/31）患者穿膜蛋白活化物（TACI）mRNA表达水平降低.结论MM患者的血清BLyS蛋白浓度和PBMCs中BLyS及其受体基因表达水平有异常改变，说明BLyS及其受体可能参与MM的发病;BLyS及其受体表达水平也许可作为预后的一个指标.

缺血修饰白蛋白与冠状动脉狭窄程度分析

近年缺血修饰白蛋白（IMA）作为灵敏的缺血指标在国外受到广泛关注，国内研究刚刚起步。它是第一个被FDA批准销售的心肌缺血标记物。ACB试验（albumin cobalt binding test，ACB）测定IMA主要是根据心肌缺血时人血清白蛋白N末端与钴离子的结合力会下降而测定。本研究通过测定心肌缺血患者血清IMA水平并与健康对照组比较，结合冠状动脉造影结果。探讨IMA水平与冠状动脉病变狭窄程度的关系。