中枢神经系内辣根过氧化物酶的顺、逆行运送速度及其在标记部位的存留时间

用2~2.2公斤的白兔22只,在脊髓腰。段一侧注射一定量的HRP,存活12小时至7日,在脊髓脑干长距离顺、逆运送的基础上研究了顺、逆行运送的速度及HRP在标记部位存留的时间。脑干中主要观察的顺行标记部位为背侧副橄榄核,逆行标记部位为红核及苍白中缝核。各核中顺行或逆行标记的出现及其消长过程相同,存活18小时后首先出现,2日后达高峰,7日后消褪殆尽。本研究得到以下的结论:1.HRP被顺、逆行运送的速度相等,每日至少350毫米,属快速运送。2.标记的净积累时间约为1日,故最佳存活期大致相当按纤维长度计所需的运输时间加1日。3.HRP在顺、逆行标记部位最多可存留~6日。4.HRP在不同纤维系的运速及存留时间相同。

大鼠垂体后叶多巴胺阳性纤维的起源

3％CT-HRP和3％WGA-HRP混合液注射入大鼠垂体后叶,用逆行追踪和免疫组织化学相结合的方法,研究垂体后叶多巴胺能神经纤维的起源。投射到大鼠垂体后叶-中间叶的多巴胺能细胞主要分布于第三脑室室周,即A14区,单个双标记神经元也在A15区腹侧部可以看到。A12区即弓状核内未见任何双标记TH阳性神经元。

家兔结合臂旁核的构筑

用家兔6只,作脑干连续横切,切片作细胞及髓鞘染色以观察结合臂旁核的构筑。除一般观察外,选择了核簇的5个核(区),各测量了100个细胞之长、短径,用电子计算机进行了统计分析,计算了各区的长、短径比值及其均数与95%数值范围;细胞面积及其均数与95%数值范围;长、短径正态双变量的80%可信限;对分布分散的组进行聚类并计算各类的80%可信限。我们认为兔之结合臂旁核簇主要可分为内侧结合臂旁核、外侧结合臂旁核及结合臂旁大细胞核,内侧结合臂旁核之背侧还有一小区,暂名为“d”区。结合臂内侧核位于结合臂之内侧,细胞较圆,大小差别大,按大小可聚成三类。外侧结合臂旁核位于结合臂之外侧,细胞较小,多呈梭形,也有一些较大细胞,可聚成二类。结合臂旁大细胞核见于核簇之中段,位于结合臂之腹外侧,细胞密集,大而较圆,与周围分界明显。此核向背侧有一延伸部,夹在结合臂与外侧结合臂旁核之间,细胞大而密集,呈梭形。“d”区的细胞小而圆,此区和内、外侧结合臂旁核的关系尚未明了。本文讨论了K(?)lliker-Fuse核和结合臂旁核的关系。

哺乳动物脑下垂体前叶的直接神经调节

内分泌系统的活动受神经系的调节。脑下垂体前叶,作为内分泌系的核心器官,其神经调节历来是神经内分泌学的一个中心课题。早期对于垂体前叶的神经支配有过大量的研究,从无神经支配、仅有少量神经纤维到有较丰富神经,众说不一。多数认为这些神经纤维属血管运动性,主要来自交感神经系。也有从下丘脑发出大量神经纤维到垂体前叶的报告。Ha-

家兔脊髓至桥核及脑桥尾侧被盖腹外侧部的投射

用成年家兔18只,分别在其颈、胸、或腰髓之一侧灰质中注射HRP或WGA-HRP,追踪其在桥核及脑桥尾侧被盖腹外侧区的顺行标记。在桥核中,标记终支见于其尾侧1/3,分布于其旁正中核、脚核之背侧部及背外侧核中。在桥尾侧被盖腹外侧区中见4个小细胞群内有标记终支,暂名之为VLPT_(1~4)细胞群。各核中之标记均为两侧性者,无明显的体部定位关系。我们在Nissl染色片上观察了VLPT_(1~4)细胞群的细胞构筑,讨论了它们与Meessen及Olszewski的“k”、“m”细胞群及桥延体的关系。4细胞群中,VLPT_(2)(相当Meessen及Olszewski“k”细胞群之腹侧部)及VLPT_(3)(相当Meessen及Olszewski“m”细胞群之一部)向吻侧合为一群,并渐融入桥核之背外侧部。这两细胞群可能为桥延体之一部。

家兔结合臂旁核与脊髓的联系

将辣根过氧化物酶或麦芽凝集素-HRP(WGA-HRP)注射于家兔之颈,胸或腰髓的一侧灰质内,追踪结合臂旁核簇中之逆行标记细胞及顺行标记终支。标记细胞数量少,见于内、外侧结合臂旁核之腹侧部。标记终支较多,在外侧结合臂旁核中最为密集,“d”区中次之,两者绕结合臂之背方连成一片。“d”区又与脑桥上端中央灰质之背外侧区中的标记区相续。内侧结合臂旁核中仅有少量标记终支。结合臂旁大细胞核中无标记细胞或终支。脊髓—结合臂旁核投射与结合臂旁核—脊髓投射之间可能有单突触性联系。未发现结合臂旁核内的标记有明显的体部定位趋势。

大鼠垂体后叶中多巴胺能纤维的起源

成年Sprague-Dawley大鼠在戊巴比妥钠麻醉下,于垂体后叶直视下注入CT-HRP和WGAHRP混合液0.5μl,12小时后,经侧脑室注入秋水仙素120μg。再存活12~24小时后,用3.5%多聚甲醛经升主动脉灌注固定。连续冰冻切片,厚40μm。TMB成色后,再用DAB-硫酸镍胺方法加强。用抗酪胺酸羟化酶抗体孵育48小时后,用ABC方法呈色。镜下见有3种不同的神经元:1.单纯紫蓝色颗粒的神经元;2.单纯棕黄色标记的神经元;3.双标记神经元——投射到垂体后叶的多巴胺能神经元。

解放军神经科学研究的学科建设及人材培养

作者简述了神经科学研究的５条主线及其所取得的重要研究成果：①脑垂体前、后叶的直接神经调节，②慢性疼痛的机制，③中枢神经系统的再生，④延髓内脏带，及⑤神经免疫调节。提出我军神经科学研究应建立的学科人才培养机制。

大鼠终纹床核区的垂体后叶投射细胞

在大鼠垂体后叶内注入霍乱毒素结合辣根过氧化物酶后,在终纹床核群区发现一些逆行标记细胞。根据最近对于终纹床核群的细胞构筑学的研究,本文分析了其逆行标记细胞的分布。在终纹床核群的前腹区内,在纹旁核内有少量树突,核周有少量细胞;有一些散在的大细胞核神经元;腹侧核内也有一些标记细胞。在终纹床核群后部的背侧半附近,有若干比较明显的标记细胞群,包括前穹窿核、内侧背副细胞群、外侧背副细胞群及室间孔下群。这些细胞群紧靠终纹床核群,却难以归入终纹床核群本身。但其树突往往伸入至终纹床核后部的主核或束间核内,与终纹床核具有共同的传入来源。还有少量细胞非恒定地散在于终纹床核群各处。

芍药甙对体外培养大鼠星形胶质细胞活性的作用

目的 观察中药芍药有效成分芍药甙 (paeoniflorin ,PF)对培养的大脑皮层星形胶质细胞活性的影响。方法 采用体外星形胶质细胞培养的方法 ,对新生SD大鼠 (P2 )大脑星形胶质细胞进行培养 ,7d后纯化 ,再分别进行有血清和无血清培养。以MTT法观察PF对星形胶质细胞活性的影响 ,运用免疫组织化学的方法进行形态学观察。 结果 PF对星形胶质细胞活性有明显的抑制作用 ,不同浓度PF组星形胶质细胞活性均低于对照组 (P <0 0 1) ,并呈现出一定的量效关系 ,这种对星形胶质细胞活性的抑制作用与血清的存在与否无关。 结论 本实验表明芍药甙能抑制星形胶质细胞的活性 ,从而提示PF促进神经细胞活性的作用是一种直接的作用 。

大鼠脊髓切断术后神经纤维残留量与运动功能恢复的关系

目的 观察成年大鼠下胸段脊髓切断术后是否出现神经纤维残留 ,以及神经纤维残留量与后肢运动功能恢复的关系。 方法 取 12只成年大鼠 ,以尖刀片沿椎管骨壁横切下胸段脊髓。术后定期观察截瘫后肢运动功能恢复情况 ,8周处死动物 ,灌注后取损伤部位及其上下节段脊髓 ,矢状冰冻切片 ,抗神经丝抗体免疫组织化学染色 ,光镜下观察有无残留神经纤维 ,计算机技术重建脊髓横断面 ,确定残留纤维的部位及其所占脊髓横断面的比例 ,并分析残留纤维数量与后肢运动功能恢复程度的相关性。 结果 42 %动物出现程度不等的后肢运动功能恢复 ,其脊髓横切处腹侧或腹外侧有数量不等的神经丝免疫反应残留纤维 ,并与后肢运动功能的恢复呈正相关关系。 结论 以尖刀片横切大鼠脊髓的常用方法 ,易造成脊髓神经纤维的残留 ,少量残留纤维即可引起后肢运动功能相当程度的恢复。因此 ,在评价脊髓损伤后的功能恢复时 ,必须首先确定损伤是否完全。

Nogo-A在成年大鼠脑内神经元的分布

目的研究Nogo_A阳性神经元在正常成年大鼠脑内的分布。方法免疫组织化学方法(ABC法)。结果Nogo_A在正常大鼠脑内的神经元和纤维有广泛的表达,出现在许多核团,主要在1.前脑的大脑皮质、嗅觉系统、海马、隔区、基底神经节、丘脑、下丘脑和视前区等部位;2.脑干的视听觉、体躯感觉、内脏觉核团、运动核团以及网状结构等;3.小脑Purkinje细胞和深核。阳性反应物主要见于神经元的胞浆和突起内,在脑室系统的嗅球室管膜、侧脑室和第三脑室部分室管膜细胞及其突起内也有表达。结论Nogo-A在脑内神经元的广泛存在提示其在正常状态下的脑功能中可能起重要作用。

巢蛋白在成年C57小鼠和SD大鼠中枢神经系统中的分布及比较

目的 观察巢蛋白 (nestin)在成年C5 7小鼠和SD大鼠中枢神经系统中的分布 ,探讨并比较神经干细胞在两种啮齿类动物中分布的异同。 方法 采用免疫组织化学ABC法和间接免疫荧光法 ,显示含神经干细胞特征性的标志物巢蛋白的阳性结构在上述两种啮齿类动物中枢神经系统中的分布。 结果 在成年C5 7小鼠中枢神经系统中 ,巢蛋白在整个脑室系统周围均有表达 ,免疫阳性结构位于室管膜细胞胞体及其突起 ,并呈现由吻端向尾端渐次减少的趋势。在成年SD大鼠的脑室系统中 ,巢蛋白主要分布在侧脑室外侧壁及其周围脑区。此外 ,在两者的齿状回、穹窿下器、最后区等脑结构中也有巢蛋白的表达。成年C5 7小鼠中枢神经系统中巢蛋白的表达 ,无论在免疫阳性结构的数量上还是在染色强度上都明显多于和强于成年SD大鼠。 结论 巢蛋白在成年C5 7小鼠中枢神经系统中的广泛脑区均有表达 ,而在成年SD大鼠中仅见于有限的脑区 ,提示成年C5 7小鼠中枢神经系统可能具有较强的神经可塑性和损伤修复能力。

利用伊文思蓝的荧光显示肾上腺素诱发的血脑屏障开放

本文采用伊文思蓝静脉注射，在荧光显微镜下观察了不同剂量的肾上腺素诱发的大鼠血脑屏障开放状况，结果发现：（1）伊文思蓝在血脑屏障开放局部呈现出鲜艳明亮的荧光斑；（2）随着肾上腺素剂量加大，光斑数量增加；（3）光斑在实验组全脑的分布，以下丘脑、丘脑、小脑和尾壳核内密度最高。上述结果表明利用伊文思蓝的荧光染料性质观察血脑屏障的开放具有简便易行、灵敏度高等优越性．

芍药苷对培养小鼠皮层神经元的保护作用

目的 探讨芍药苷是否促进培养皮层神经细胞的存活 ,并对抗兴奋性氨基酸海人藻酸 (KA)所致的神经损伤。方法 解剖分离 15d胚胎小鼠皮层神经细胞 ,接种于 2 4孔板中加药培养 ,台盼蓝染色细胞 ,相差显微镜及免疫组织细胞化学方法进行形态学观察。结果 ①加入芍药苷 2 0 .8和 4 1.6mg·L- 1培养 4d增加神经细胞存活数量 ,降低死亡率。②加入KA 5 0 μmol·L- 1作用 30min ,神经元肿胀 ,失去折光性 ,核偏位 ,死亡率增高。预先加入芍药苷2 0 .8和 4 1.6mg·L- 1培养 4d ,可对抗KA所致的神经损伤。结论 芍药苷可增加神经细胞存活数量 ,降低死亡率 ,对抗KA所致的兴奋性神经损伤。

补阳还五汤对大鼠脊髓损伤后红核脊髓束再生及功能修复的影响

为探讨补阳还五汤对脊髓损伤后轴突再生及功能修复的影响,将SD大鼠C3-C4右侧红核脊髓束(RST)横断后,分别以补阳还五汤和蒸馏水连续灌胃8周,用BDA顺行束路示踪方法检测轴突再生情况,采用自发性直立探究行为学测试方法评判前肢运动功能的恢复。结果显示:灌服补阳还五汤组的大鼠在损伤RST的尾侧可见少量的BDA标记纤维,伤侧前肢使用率明显高于蒸馏水组(P<0.01)。上述结果提示,补阳还五汤能促进大鼠横断的红核脊髓束轴突再生及部分功能修复。

大鼠侧脑室置管方法的改良

国际上公认的实验动物脑室内给药方法是先在侧脑室内埋置固定于颅顶的套管,5～10 d后待动物从埋管过程造成的应激反应恢复后再经内管给药,这可以去除插管过程造成的应激对实验结果的干扰.但目前此种方法所用的管道系统多依赖进口,价格昂贵,且为一次性使用,其代价是很多国内实验室难以承受的.故国内神经生物学实验中动物脑室内给药的方法多为在颅骨钻孔后以微量注射器或玻璃微电极直接插入脑室内即刻给药,这种方法显然是有缺陷的.为克服这一问题,我们研究出了重复使用进口管道系统的方法,自行设计了置管时将管道固定在立体定向仪上的装置以取代国外公司昂贵的相关产品并可适用于国产定向仪.实验结果证实了这种方法是可行的.本文对这一实验方法的改造进行了详细的描述.

MK表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达

ＭＫ是属于肝素结合因子家族的一种多肽，仅在胚胎中期和成年期肾脏表达，在某些肿瘤细胞中也有异常表达．ＭＫ能够促进细胞特别是神经细胞的生长和分化，并抑制某些肿瘤细胞的生长．通过ＲＴＰＣＲ从胚胎肾脏中获得了ＭＫ成熟肽ＤＮＡ编码序列，克隆入载体ｐＢＶ２２１中，并转入大肠杆菌，建立了重组ＭＫ的高表达菌株．

小鼠脊髓损伤早期不同炎症因子的表达变化

目的:探讨小鼠脊髓夹伤后早期各时间点损伤区中IL-1β、IL-6、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白-1(MIP-1)、IL-4、IL-10、TGF-β的表达变化情况。方法:6 8周雄性BALB/c小鼠行T8节段脊髓重度夹伤模型,分别于术后6 h、12 h、24 h、3 d和7 d取以损伤区为中心共5 mm脊髓,用TRIzol试剂提取总RNA,反转录后进行实时定量PCR检测上述各基因的表达情况。结果:小鼠脊髓损伤早期,损伤区促炎因子IL-1β、IL-6及趋化因子MCP-1、MIP-1急剧升高,6 h内即达高峰,随后开始下降,3 d内归于正常;而炎症抑制因子IL-4早期不升反降,3 d降至最低;IL-10在6 h有所升高,但无统计学意义;TGF-β逐渐升高,12 h至高峰,随后下降,7 d再度升高。结论:脊髓损伤早期损伤区促炎因子表达增加,炎症抑制因子表达不变或减少,可能使损伤局部的炎症反应呈扩大趋势,从而导致继发的炎症损伤。

脊髓坏死面积的测量方法介绍

将Photoshop7.0图像处理软件应用于脊髓损伤后坏死面积的测量,并与图像分析软件Quantimet570的传统测量方法进行比较。显微镜采集成年大鼠损伤脊髓的HE染色组织切片的数字化图像,运用Photoshop软件选取坏死区域并测其面积。另用Quantimet570软件测量同一切片同视野经Camera Lucida描绘的坏死区线图的面积,两种测量方法所得坏死区面积无显著性差异。因此,同Quantimet570软件相比,Photoshop7.0图像处理软件测量脊髓损伤后坏死区面积的功效相当,并具有功能强大、简便、快捷、直接及无需额外辅助设备的特点。