中药丁香体外抑制人巨细胞病毒作用研究

中药丁香体外抑制人巨细胞病毒作用研究１０００３９北京解放军第３０２医院刘洪貌盼勇洪世雯鞠连才白雁平关键词植物，药用；人巨细胞病毒；体外抗病毒作用中国图书资料分类号Ｒ２８２．７人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染播及广泛，它可引起肺炎、肝炎、胃肠炎、新生儿疾病...

我国部分地区1049例职业献血员庚型肝炎病毒感染状况的研究

应用庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）多肽抗原和ＰＣＲ引物，对我国部分地１０４９例职业献血员进行了ＨＧＶ抗体和ＨＧＶＲＮＡ检测。抗－ＨＧＶＩｇＧ阳性率为３．５３％（３７／１０４９）。５条抗原多肽反应性不同，检测结果有交叉和重叠。其特异性较好，除ＳＰ２外，阻断率均在９０％以上。３７例抗－ＨＧＶＩｇＧ阳性者中，ＨＧＶＲＮＡ阳性率为４３．２４％（１６／３７）。证明在我国职业献血员中存在着较高的ＨＧＶ感染率。

慢性重型肝炎患者血清游离IGF-1检测及意义

目的分析血清游离IGF1水平变化与慢性重型肝炎患者的病情发展和预后的关系。方法应用ELISA方法检测44例慢性重型肝炎、46例肝硬化和43例慢性肝炎患者血清游离IGF1水平。并与肝功能各项指标、凝血酶原活动度和胆碱酯酶进行对照。结果慢性重型肝炎、肝硬化和慢性肝炎患者血清游离IGF1水平分别为0.24±0.15、0.33±0.17和1.06±0.70ng/ml,慢性重型肝炎与肝硬化和慢性肝炎有显著性差异(P<0.01);慢性重型肝炎早、中期IGF1水平比较,差异无显著性(P>0.05);早期与晚期比较,差异有显著性(P<0.0);中期与晚期比较,差异亦有显著性(P<0.05)。死亡组32例患者的血清游离IGF1平均低于0.2ng/ml,而存活组12例患者平均高于0.35ng/ml。结论在慢性重型肝炎患者血清游离IGF1显著下降,并与重型肝炎严重程度有关,因此可作为判断慢性重型肝炎预后的一个重要指标。

SARS定点医院工作人员白细胞及红细胞天然免疫黏附功能的变化

目的 :研究 SARS定点医院不同岗位工作人员白细胞分类及红细胞天然免疫黏附功能 (erythrocyte innate imm uneadhesion function,EIIAF)的变化 ,了解 SARS定点医院医务人员生理机能的变化。方法 :将研究对象分成 5组 ,分别为 SARS定点医院门诊检验人员组、SARS一线人员组、非 SARS病区人员组、医院机关人员组以及院外对照组。对以上各组人员分别进行白细胞分类及 EIIAF测定。SARS特异性 Ig G抗体的检测采用 EL ISA法。结果 :SARS定点医院各组人员的白细胞总数显著高于院外对照组 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1 ) ;SARS一线人员和门诊检验人员的 EIIAF显著低于非 SARS病区人员和机关人员(P<0 .0 1 ) ,其中有 37.5 %的 SARS一线人员的 EIIAF低于正常人平均水平。 6位参与重症 SARS抢救而无显性发病的医务人员 EIIAF全部处于高表达水平 (与正常人群平均水平比较 ,P<0 .0 5 )。结论 :SARS环境中的工作人员机体处于应激状态 ,与 SARS密切接触的一线人员机体存在免疫清除过程 ,亚健康状态可能是 SARS相关医务人员易感的重要原因之一。

两种干扰素α治疗慢性丙型肝炎抗干扰素NA与BA检测及临床意义

目的 :探讨干扰素α1b(IFNα1b)和干扰素α2a(IFNα2a)治疗慢性丙型肝炎抗干扰素中和抗体 (NA )和结合抗体 (BA)的产生及临床意义。方法 :采用抗病毒中和生物测定法 (ANB)和酶联免疫法检测30例用IFNα1b治疗和27例用IFNα2a治疗的慢性丙型肝炎患者治疗前后血清中NA和BA。结果 :健康者及IFNα治疗前患者血清中未检测出NA和BA ,27例IFNα2a治疗后9例(33 33 % )检出NA ,30例IFNα1b治疗后4例 (13 33 % )检出NA。NA阳性的13例中12例 (92 31 % )为无效病例。IFNα1b治疗组8例 (26 67 % )BA阳性 ,IFNα2a治疗组9例 (33 33 % )BA阳性。BA阳性的17例中1例显效 ,7例有效 ,9例无效。结论IFNα治疗慢性丙型肝炎能诱导机体产生NA和BA ,IFNα的不同亚型治疗后NA发生率不同。NA的产生影响IFNα治疗慢性丙型肝炎的疗效。BA的产生对疗效无影响。

高压蒸气消毒器对高速涡轮手机消毒效果的病毒学研究

高速涡轮手机(以下简称手机)在临床使用过程中,要直接接触患者的唾液,甚至血液.乙型肝炎病毒、艾滋病病毒主要通过血液、唾液等体液传染,手机如消毒不彻底,就很可能成为患-患之间交叉感染的根源.我们使用加拿大生产的STATIM抽屉式高压蒸气消毒灭菌器,对模拟临床使用污染了乙型肝炎病毒血清的手机进行消毒实验,评价其对手机表面、内部的消毒效果.

高压蒸气消毒器对高速涡轮手机消毒效果的病毒学研究

高速涡轮手机(以下简称手机)在临床使用过程中,直接接触病人的唾液,甚至血液.乙型肝炎病毒、艾滋病病毒主要通过血液、唾液等体液传染,手机如消毒不彻底,就很可能成为患-患之间交叉感染的根源.我们使用加拿大生产的STATIM抽屉式高压蒸气消毒灭菌器,对模拟临床使用污染了乙型肝炎病毒血清的手机进行消毒实验,评价其对手机表面、内部的消毒效果.

SARS患者红细胞天然免疫粘附功能快速检测方法的建立及应用

目的 建立SARS患者红细胞天然免疫粘附功能的快速检测方法，探讨天然免疫清除功能在评估SARS病情发展变化中的意义。方法 红细胞天然免疫粘附功能快速检测方法：将lμl离心沉淀的红细胞和100μ1自身血浆与150μl定量的靶细胞混合，37℃水浴30min。1个结合5个或以上红细胞的靶细胞为一个粘附功能单位，计算粘附率。结果 临床确诊为SARS的病人在收住院一周内其红细胞天然免疫粘附功能即不同程度地下降，并且随病情的加重持续降低，随病情好转开始回升，在完全恢复期出现一过性地高于正常人平均水平。随后稍有下降；死亡前病人的红细胞天然免疫粘附功能全部消失。结论 红细胞天然免疫粘附功能快速检测方法操作简单、重复性和稳定性好，可作为临床动态观察SARS病情发展变化、疗效评估及预后判断的重要参考指标。

SARS患者急性期与恢复期红细胞天然免疫黏附功能的变化

目的 :研究严重急性呼吸综合征 (SARS)患者急性期和恢复期红细胞天然免疫黏附功能 (erythrocyte innate imm uneadhesion function,EIIAF)的变化及意义。 方法 :采用 EIIAF快速检测方法 ,将 10 0 μl枸橼酸钠抗凝的待测患者血浆和 1μl离心沉淀红细胞 ,直接加到 15 0 μl定量包装的靶细胞管中 ,充分混匀 ,37℃水浴 30 min,结合 5个或以上红细胞的靶细胞为 1个黏附单位 ,计算黏附率。同时 ,采用细胞酶免疫分析法测定红细胞膜补体 1型受体 (com plem entreceptor type1,CR1)数量。结果 :临床诊断为 SARS的 4 7例患者 ,在急性期 EIIAF皆显著下降 (P<0 .0 1) ,部分患者降至正常人群水平的 5 0 %左右 ,因衰竭而死亡的 SARS患者死亡前 EIIAF接近消失 ;病情恢复并出院的 SARS患者 EIIAF全部恢复至正常水平 (部分患者在恢复早期可显著高于正常水平 )。SARS患者 EIIAF的下降与红细胞膜 CR1数量下降基本平行。结论 :对 SARS患者进行 EIIAF动态检测 ,可有效评估 SARS病情变化 ,同时有助于对

庚型肝炎病毒感染的初步研究

1995年Simons和Yoshiba分别报道,在非A-E型肝炎患者血清中检测出一种与肝炎有关的新的病毒RNA序列,即GBV-C RNA。并经基因克隆和DNA测序确定了其核酸及蛋白质一级结构。该病毒与Simons等在实验感染肝炎病人血清的狨猴(tamarin)血液中分离出的二种新病毒GBV-A和GBV-B不同。

余氯控制饮水再污染效果及改进措施的研究

为了评价余氯控制饮水再污染效果、改进饮用水质量,在不含氯不耗氯水样中造成接近天然再度污染的条件,研究了不同种类和不同含量余氯对再污染微生物的杀灭效果,改进结合余氯作用,实验以DPD法测定余氯质量变化,分别采用滤膜法、双层琼脂法、常规滴定法测定水样中大肠杆菌、噬菌体f2、呼肠弧病毒等微生物存活率以评价消毒效果。

JM细胞分泌液体外抗病毒作用的研究

本文采用组织培养技术对ＪＭ细胞分泌液（ＪＭＣＳ）体外抗单纯疱疹病毒１型（ＨＳＶ１），巨细胞病毒（ＣＭＶ），腺病毒１型（ＡｄＶ１），麻疹病毒（ＭＬＶ）和小儿麻痹病毒１型（Ｐ１Ｖ）作用进行了研究。结果显示在病毒接种的同时或吸附后加入ＪＭＣＳ能明显地抑制ＨＳＶ１、Ａｄｖ１，ＣＭＶ的增殖且抑制作用随ＪＭＣＳ浓度的提高而增强。

丙型肝炎病毒NS5B基因的克隆及在大肠杆菌的分泌表达

由于全长丙型肝炎病毒NS5B的疏水性 ,其表达和纯化非常困难。为了分泌表达NS5B ,作者对NS5B进行截短 ,缺失其疏水部分从而在大肠杆菌细胞中分泌表达HCVNS5B基因 ,并测定其活性。用逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)的方法 ,设计截去NS5B疏水部分 ,PCR引物以HCV全长质粒pBRTM/HCV 1为模板 ,克隆到pGEM Teasy载体中 ,双酶切后回收连接到pET 2 1b中表达。大肠杆菌培养上清过柱纯化 ,进行十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和Western免疫印迹分析 ,并用液闪近端分析 (SPA)法分析NS5BRdRp活性。成功地构建了NS5B基因大肠杆菌表达载体 ,Western免疫印迹显示NS5B蛋白在大肠杆菌细胞中表达。表达产物在大肠杆菌培养上清中存在 ,分子量 6 8kD左右 ,而且 [3 H]总掺入率达 6 90 0cpm。NS5B蛋白在大肠杆菌上清中表达成功 ,经过活性测定 。

肝硬化患者红细胞CD44数量表达与血清透明质酸含量变化的关系研究

目的:研究肝硬化患者红细胞CD44数量与血清透明质酸含量变化的关系。方法:将戊二醛固定的2% 红细胞悬液定量“液相包被”到V型板中,依次加入鼠抗人CD44单克隆抗体、碱性磷酸酶标记的羊抗鼠第二抗体,洗板后加底物显色,移显色液于比色板中,测定其A405吸光值。本文对111例肝硬化病人的红细胞CD44进行测定,同时采用AU600全自动生化仪检测其胆碱酯酶(CHE),采用ACL200检测凝血酶原活动度(PTA),采用ELISA定量试剂盒检测血清透明质酸含量。结果:肝硬化患者红细胞CD44数量表达都显著低于正常对照,并且重度肝硬化患者的红细胞CD44的数量变化显著低于轻度肝硬化患者(t=-4. 55,P=5. 76×10-6 ),肝硬化患者红细胞CD44变化与血清HA含量的变化关系密切(P<0. 01),同时与CHE和PTA的变化密切相关(P<0 .05)。结论:肝硬化患者的红细胞CD44数量变化与其病情发展关系密切。

丙型肝炎病毒特异性核酶细胞内切割活性的研究

设计合成针对丙型肝炎病毒 (HCV )核心区基因 (第3 84— 3 86nt)的锤头状核酶 (Ribozyme ,Rz) ,从丙型肝炎病人的血清中提取HCV RNA ,经RT—PCR扩增HCV基因片段( 4 12bp) ,作为核酶的靶序列 ,将核酶基因和HCV靶基因片段分别克隆人反转录病毒载体 pLXN中构建重组载体 ,并用电击法分别转入包装细胞PA3 17中 ,将上述两种转细胞释放到培养液中的含Rz的假病毒颗粒和含HCV靶基因的假病毒颗粒混合后 ,共同感染空白的PA3 17细胞 ,被感染细胞维持液的RT -PCR结果表明 ,无HCV靶基因产物即无靶基因的假病毒颗粒释放至维持液中 ,证明Rz在细胞内有切割HCV靶RNA的活性。

引起细胞病变的甲肝病毒BJ-1株结构蛋白VP4-VP2基因序列的测定

目的测定我室分离的甲型肝炎病毒(HAV)BJ-1株结构蛋白VP4-VP2基因区的核苷酸序列。方法从BJ-1感染的A549细胞中提取病毒RNA模板,通过RT-PCR扩增相应的cDNA片段,测定其核苷酸序列。结果BJ-1株与野型株MBB比较,VP4-VP2区有4个核苷酸变异,同源性为99.5％(731/735),推论的氨基酸序列有1个氨基酸变异,同源性为99.6％(244/245)。与HM-175比较,有30个核苷酸变异,同源性为95.9％(705/735),推论的氨基酸序列均相同,同源性为100％。结论核苷酸序列分析结果初步确定BJ-1株属甲型肝炎病毒。

乙型肝炎病毒YMDD变异与肝功能损伤程度的关系

目的采用自行研制的“微量核酸释放剂(micronucleicacidreleasingreagent,MNRR)”,建立微量血清直接进行PCR扩增的“一步法”实时荧光PCR检测拉米夫定治疗后YMDD变异的情况,探讨乙肝病毒YMDD变异与肝脏功能损伤程度的关系。方法设计包含YIDD和YVDD变异区和无变异参照的三条下游引物,与同一上游引物和探针建立3管荧光PCR扩增体系,变异Ct值与参照Ct值之差在3.3之内判断为阳性变异。建立将血清标本直接加到含有MNRR的扩增管进行核酸处理和PCR扩增的“一步法”检测。将0.2ml的PCR扩增管按3管/份标本排放到核酸提取仪,每管加入3.5μl的MNRR和3.5μl待测血清,用带虑芯吸头的加样器轻轻吹打混匀,加30μl无菌石蜡油覆盖,于80℃静置8min和10℃静置1min,直接加入PCR扩增液,封盖后移至实时荧光PCR仪进行扩增。对154例采用拉米夫定治疗1年后的乙肝患者YIDD变异发生率进行分析,并研究其与肝脏功能损伤程度之间的关系。结果拉米夫定治疗1年后YIDD变异率为15.9%;YVDD变异率为9.6%,YIDD和YVDD共生变异率为4.4%。发生YIDD/YVDD共生变异的患者其血清HBVDNA含量显著高于单一发生YIDD变异的患者(P<0.05),发生YMDD共生变异的乙肝患者其肝脏功能损伤的程度明显较单一发生YIDD变异者严重。结论拉米夫定治疗发生共生变异的患者其血清HBVDNA含量显著高于单一发生YIDD或YVDD变异的患者;发生YMDD共生变异的乙肝患者其肝功能损伤的程度明显重于无变异或单一发生YMDD变异的患者。

SARS患者红细胞天然免疫黏附功能变化的探讨

目的 研究SARS患者红细胞天然免疫黏附功能 (erythrocyteinnateimmuneadhesionfunction ,EIIAF)的变化及与红细胞CR1数量、循环补体C3、C4及免疫复合物含量等变化之间的关系 ,探讨引起EIIAF变化的可能原因。方法 EIIAF检测 :将 10 0 μl枸橼酸钠抗凝的待测病人血浆和 1μl离心沉淀红细胞 ,直接加到 15 0 μl定量分装的靶细胞管中 ,充分混匀 ,37℃水浴 30min ,结合 5个或以上红细胞的靶细胞为 1个黏附单位 ,计算黏附率。正常人血浆和红细胞与病人红细胞和血浆互换试验 :洗涤病人红细胞 ,与正常人血浆进行EIIAF检测 ,同时将正常人红细胞与病人血浆进行EIIAF检测作为对照。红细胞补体Ⅰ型受体 (CR1)定量测定 :采用细胞酶免法。补体C3、C4含量 ,采用免疫比浊法测定。循环免疫复合物采用凝集法。结果 6 5例SARS患者在出现发热等临床症状 1～ 3d内EIIAF即不同程度地下降 ,EIIAF的下降程度与患者发热、全身中毒症状及肺部炎症渗出的程度密切相关。重症SARS和因呼吸窘迫综合症死亡的患者其EIIAF接近完全消失 ;肺部阴影全部吸收时EIIAF回升到正常水平 ,并一过性地高于自身正常水平 ,然后再有不同程度的下降。正常人红细胞在SARS病人血浆中的EIIAF明显受到抑制 ,病人红细胞在正常人血浆中的EIIAF无明显回升。?

慢性肝炎患者ECR1基因多态性、数量及活性的变化

目的 研究慢性肝炎 (CH)患者红细胞Ⅰ型补体受体 (ECR1)密度相关基因多态性、数量表达及活性的变化。方法 采用PCR和HindⅢ酶切技术测定ECR1分子基因多态性 ,采用酶联免疫法定量测定ECR1分子的数量 ,采用红细胞天然免疫粘附功能试验测定ECR1粘附活性。结果 慢性肝炎患者ECR1密度相关基因多态性与健康人群相比差异无显著性。活动性慢性肝炎、肝功能异常的肝炎后肝硬化患者ECR1的数量表达及活性明显低于健康人群 (t=9 87,P <0 0 0 0 1) ,失代偿性肝炎后肝硬化患者的ECR1分子数量明显低于代偿性肝炎后肝硬化患者 ,但肝功能正常的慢性肝炎患者ECR1数量与健康人群比较无明显变化。结论 慢性肝炎患者ECR1数量表达及活性缺陷系后天引起 ,测定慢性肝炎患者ECR1的数量对临床病情判断及发展预测有重要参考价值。