丹皮酚对缺糖缺氧再灌诱导的心肌细胞凋亡及相关基因Bcl-2 Bax蛋白表达的影响

目的:探讨丹皮酚(Paeonol Pae)对培养乳鼠心肌细胞缺糖缺氧再灌时心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法:建立原代培养的新生大鼠心肌细胞缺糖缺氧再灌损伤模型,随机分组:对照组;模型组;丹皮酚组;用AnnexinⅤ-FITC/PI双标记法测定细胞凋亡率;以免疫组织化学方法检测心肌细胞Bcl-2、Bax蛋白表达变化。结果:缺糖缺氧再灌后,细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.01),心肌细胞Bcl-2蛋白阳性表达指数(positive expression index PEI)显著低于对照组(P<0.01),Bax蛋白PEI明显的高于对照组(P<0.01),Bcl-2/Bax比值明显的低于对照组(P<0.01)。与缺糖缺氧再灌组比较,Pae干预组细胞凋亡率显著降低(P<0.01),Bcl-2蛋白PEI显著升高(P<0.01),Bax蛋白PEI显著降低(P<0.05,P<0.01),Bcl-2/Bax比值明显高于缺糖缺氧再灌组(P<0.01)。结论:Pae可抑制缺糖缺氧再灌损伤心肌细胞凋亡,其作用可能是通过上调Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达,增加Bcl-2/Bax比值实现的。

人食管癌EC9706单克隆的分离培养及其生物学特性的研究

用限制性稀释法对食管癌EC9706细胞系进行单细胞克隆分离,建立了3个亚系,分别命名为EC1、EC2和EC3。细胞遗传学分析显示,EC1仍为混合克隆,EC2和EC3的染色体众数分别为117条和62条。对EC2和EC3的生物学特性进行比较,生长曲线、平皿集落形成能力实验、流式细胞分析和细胞运动能力实验均表明,两者的恶性程度有显著差别,EC2较低,EC3较高。成功分离的2个食管癌单克隆细胞亚系,可为食管癌发生发展的分子机制研究、基因治疗研究、耐药机制研究以及抗肿瘤药物筛选提供实验材料。

Fuchs角膜内皮营养不良患者的共焦显微镜特征

目的:探讨共焦显微镜下Fuchs角膜内皮营养不良患者角膜各层的活体形态学特征。方法:对16眼Fuchs角膜内皮营养不良患者的中央部角膜进行活体共焦显微镜检查,应用NAVIS软件测量、分析角膜各层组织细胞形态和密度、以及滴状赘疣和角膜神经的直径。结果:①有症状组:9眼的角膜内皮层均见到滴状赘疣,直径20～60μm,内皮细胞密度低;4眼后弹力膜增厚;6眼角膜后基质层有长条形暗区结构;9眼角膜基质反光普遍增强;7眼Bowman膜有局灶性高反光区域;5眼显示正常的角膜神经结构;②无症状组:7眼的角膜内皮层均见到滴状赘疣,数目较有症状组者少,直径15～40μm;内皮细胞密度正常;角膜其余各层未见异常。结论:本研究初步揭示了Fuchs内皮营养不良患者共焦显微镜下的形态学特征;活体共焦显微镜检查有助于Fuchs角膜内皮营养不良患者的诊断,特别适用于角膜水肿、角膜内皮镜无法成像的患者。

川芎嗪注射液治疗糖尿病周围神经病变40例

目的观察川芎嗪注射液对糖尿病周围神经病变的疗效。方法将80例糖尿病周围神经病变患者随机分为治疗组和对照组,两组均给予饮食控制及糖尿病基础治疗、营养神经药物治疗,治疗组用川芎嗪注射液80mg加生理盐水250ml静脉滴注,1次/d,4周为1个疗程。结果治疗组总有效率92.5%,对照组总有效率82.5%,两组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论川芎嗪注射液能明显缓解糖尿病周围神经病变患者临床症状,提高神经传导速度,治疗糖尿病周围神经病变疗效显著。

食管鳞状上皮癌中表达失调蛋白的研究

背景与目的:食管鳞状上皮癌(esophagealsquamouscellcarcinoma,ESCC)是一种具有高发性和高死亡率疾病,本研究应用蛋白质组学方法分析ESCC中异常表达的蛋白。方法:对ESCC/癌旁组织标本的冰冻切片进行显微切割,分别分离肿瘤细胞和癌旁上皮细胞,提取细胞总蛋白,通过双相电泳得到ESCC及癌旁上皮的蛋白表达谱,采用质谱技术鉴定肿瘤表达异常的蛋白。结果:比较7对食管癌/癌旁组织的蛋白表达谱,并对差异的蛋白进行质谱分析发现:11个蛋白在食管癌中表达明显异常,其中热休克蛋白27(HSP27)在3例ESCC中表达上调,钙依赖磷脂结合蛋白ANNEXINI在正常食管粘膜存在分子量基本相同、等电点彼此相差约为1的3种变体(isoforms),3种ANNEXINI变体均在5例食管癌中表达下调。结论:双相电泳连接质谱的蛋白质组学方法是快速筛选肿瘤异常表达蛋白的有效手段,HSP27和ANNEXINI的表达失调是食管癌发生过程中的频发事件。

多色荧光原位杂交在膀胱尿路上皮癌诊断中的应用

背景与目的:膀胱尿路上皮癌是我国泌尿生殖系统常见的恶性肿瘤。本研究旨在分析中国人膀胱尿路上皮癌中染色体畸变的情况,探讨多色荧光原位杂交(multicolor fluorescence in situ hybridization,M-FISH)技术辅助诊断膀胱尿路上皮癌的可行性和有效性。方法:用随机引物法标记3、7、17号染色体着丝粒及9p21区带探针,对57例膀胱尿路上皮癌间期细胞核进行荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH),统计染色体畸变情况并分析其与病理分期、分级的关系以及染色体畸变组合诊断膀胱尿路上皮癌的阳性率。结果:3、7、17号染色体和9p21的畸变率分别为47.4%(27/57)、50.9%(29/57)、56.1%(32/57)和59.6%(34/57),畸变与分期无相关性,3、7和17号染色体畸变与病理分级有显著相关性(P<0.01)。四个探针组合诊断膀胱尿路上皮癌的总阳性率为54.4%。结论:M-FISH技术检测有助于探索3、7、17号染色体畸变与病理分级的关系。

1605例老年多器官功能衰竭的临床分析

目的 通过对 1 60 5例老年多器官功能衰竭 (MOFE)患者发病危险因素和临床特征的分析 ,为临床早期诊断、治疗和预防MOFE提供线索。方法 应用回顾性调查的方法。结果 99%MOFE的患者发病前患有 1种以上的基础疾病。MOFE的发病诱因以感染最为多见 ,其中肺部感染最多 ,占 73 .1 % ,首发衰竭的器官以肺居于首位 ,在衰竭器官的类型中 ,血液和肾功能衰竭是MOFE患者死亡的重要危险因素 (OR值分别为 2 .73和 3 .0 0 )。结论 在大多数情况下 ,肺可能是MOFE的启动器官 ;防止呼吸衰竭的发生 ,可能能降低MOFE的发生率 ;在MOFE的治疗中 ,防止肾功能衰竭的发生 。

细胞周期相关蛋白cyclin D1、p53和p21^(WAF1/Cip1)在食管鳞癌中的表达改变及其病理学意义

食管鳞状细胞癌(Esophageal squam ous cell carcinom a,ESCC)是我国常见的恶性肿瘤之一,虽然临床诊治手段正逐步改进,但中晚期患者5年生存率仍然很低。目前认为细胞周期调控异常与肿瘤发生发展关系密切,然而相关周期调节蛋白在食管癌患者中的表达改变、临床意义及其应用价值还没有明确结论。文章应用组织微阵列联合免疫组织化学技术(TMA-IHC),对148例食管鳞癌组织标本中细胞G1/S期调控蛋白cyclinD1、p53和p21WAF1/Cip1的表达进行检测,分析其与临床病理参数之间的相关性。结果显示,cyclinD1与p53蛋白在食管癌细胞中表达升高,p53表达阳性率与区域淋巴结转移显著相关(P=0.001)。p21WAF1/Cip1蛋白在肿瘤组织中表达降低,且p21WAF1/Cip1表达阴性患者的术后生存时间显著短于表达阳性的患者(P=0.001)。多因素生存分析显示p21WAF1/Cip1是一个独立的预后因素(相对危险度为0.418,P<0.001)。微阵列比较基因组杂交(array-CGH)检测进一步表明45.4%的食管癌患者存在cyclinD1基因扩增。以上结果提示食管鳞癌中存在细胞周期G1/S期调控异常,p21WAF1/Cip1蛋白可能是一个有应用价值的预后因子。

生长特性差别的胃癌MGC803细胞亚系间细胞骨架、细胞通讯与癌基因表达的比较研究

肿瘤细胞表型差异是临床药物敏感性、抗原性、转移性、潜伏性和进展速度等差异的主要原因。为了弄清恶性表型差别的表现、相关性及调节机理、我们从胃癌MGC 803系分离了单细胞亚系,各亚系按克隆过程的时间差别归纳分组,选快组M 17、中组M 6和慢组M 3进行比较。软琼脂生长实验表明三者的恶性程度有显著差别;M17恶性度最高,M3最低,M6居中。与其它表型联系比较,证明细胞生长速度、细胞微丝、微管骨架破坏及细胞通讯功能抑制都与锚着不依赖性生长的恶性特征有平行相关性。同时,M 17和M 3原癌基因表达有明显差别。

多色荧光原位杂交应用于食管鳞状细胞癌早期诊断的探讨

背景与目的:染色体畸变检测已被用作一些癌症的诊断指标,但食管癌迄今尚无染色体水平的标志。本研究旨在分析食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)及其癌前病变部分染色体畸变情况,探讨多色荧光原位杂交技术(multicolor fluorescence in situ hybridization,M-FISH)辅助ESCC早期诊断及癌前病变风险预警的可行性。方法:选取文献报道最常发生改变的3、8、10、12、17和20号染色体,用其特异性着丝粒探针,采用M-FISH对来自113个病例的124份食管病变组织间期细胞核进行分析,统计各染色体的畸变情况,并分析其与ESCC染色体增加(增益)与临床病理参数之间的关系。结果:3、8、10、12、17和20号染色体在ESCC中增益畸变率分别为80.9%(93/115)、81.0%(94/116)、70.5%(79/112)、75.9%(85/112)、68.7%(79/115)和82.8%(48/58),与各项临床参数之间的相关性均无统计学意义(均P>0.05)。同时,6个染色体在ESCC癌前病变中的增益畸变率分别为62.5%(5/8)、75.0%(6/8)、62.5%(5/8)、87.5%(7/8)、87.5%(7/8)和100%(3/3);在早期ESCC的增益畸变率分别为80.0%(12/15)、93.8%(15/16)、71.4%(10/14)、64.3%(9/14)、75.0%(12/16)和63.6%(7/11)。结论:3、8、10、12、17及20号染色体在ESCC及其癌前病变组织中均存在较高的染色体数目畸变率;M-FISH检测有助于早期诊断ESCC,并可能作为ESCC癌变风险预警的一种方法。

TIVOLI完全可降解涂层西罗莫司洗脱支架与ENDEAVOR佐他莫司洗脱支架的临床随访结果

目的:评价冠状动脉粥样硬化性心脏病患者成功置入TIVOLI生物可降解涂层西罗莫司洗脱支架(简称TIVOLI支架)的有效性和安全性。方法:本研究为比较TIVOLI支架和ENDEAVOR佐他莫司洗脱支架(简称ENDEAVOR支架)的前瞻性、多中心临床研究,以证实TIVOLI支架在支架内晚期管腔丢失方面并不劣于ENDEAVOR支架。在中国12家中心共纳入324例患者(TIVOLI组168例;ENDEAVOR组156例),每例患者最多两处冠状动脉病变置入支架,病变长度≤40 mm,参考血管直径2.25～4.00 mm。主要终点为术后240天冠状动脉造影确定的支架内晚期管腔丢失。次级终点为术后1～3年的临床预后,包括主要心脏不良事件(心脏性死亡、心肌梗死或靶病变血运重建)和支架内血栓形成。结果:TIVOLI组支架内和支架节段内晚期管腔丢失、支架内再狭窄率均低于ENDEAVOR组,差异均有统计学意义(P<0.05～0.01)。TIVOLI组靶病变血运重建率术后1、2、3年均低于ENDEAVOR组,差异均有统计学意义(P<0.05～0.01)。TIVOLI组主要心脏不良事件发生率术后1、2、3年比ENDEAVOR组有更低的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TIVOLI支架术后8个月晚期管腔丢失优于ENDEAVOR支架,术后8个月造影界定的再狭窄和3年靶病变血运重建的发生率均较低。3年主要心脏不良事件发生率方面两组差异无统计学意义。

黄芩茎叶总黄酮对H_2O_2诱导的心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2及Bax表达的影响

目的探讨黄芩茎叶总黄酮(scutellaria baicalelensis stem leaf total flavonoid,SSTF)对过氧化氢(H2O2)诱导的培养乳鼠心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法培养大鼠乳鼠心肌细胞,随机分为3组,即正常对照组;H2O2损伤组;SSTF干预组。以免疫组织化学方法检测心肌细胞Bcl-2/Bax蛋白表达变化;心肌细胞损伤程度以心肌细胞存活率表示。结果H2O2损伤组心肌细胞Bcl-2蛋白的阳性表达指数(positive expression index,PEI)显著低于对照组(P<0.01),Bax蛋白PEI明显高于对照组(P<0.01),细胞存活率明显低于对照组(P<0.01)。SSTF干预组Bcl-2蛋白的PEI显著高于H2O2损伤组(P<0.01),Bax蛋白PEI明显低于H2O2损伤组(P<0.01),细胞存活率明显高于H2O2损伤组(P<0.01)。结论SSTF对心肌细胞的保护效应可能与其促进Bcl-2蛋白高表达,抑制Bax蛋白的表达从而抑制心肌细胞凋亡有关。

建立十二色荧光原位杂交技术鉴定食管癌KYSE450细胞系的核型

目的:应用12色荧光原位杂交技术(multicolor fluorescence in situ hybridization,M-FISH)鉴定食管癌细胞系KYSE450的染色体畸变．方法:采用DOP-PCR(degenerate oligonucleotide primer-polymerase chain reaction)法混合标记两组多色painting探针,先后两次杂交到相同的KYSE450染色体片,结合反相DAPI显带技术进行核型分析．结果:成功地建立了一种重复的12色荧光原位杂交技术,并鉴定出KYSE450中存在的畸变染色体．该细胞系共有54条染色体,只有13, 21和X号染色体是正常的,其余21条染色体均表现异常．1,2,3,5,6,8,9,14,15,16和17号染色体部分区带增益,4和18号染色体部分区带缺失．7,11,12和19号染色体同时存在区带增益和其它部分区带缺失．1,2,3,4,5,6,7,8,9, 11,12,14,15,16,17,18和19号染色体显示有易位．22号染色体丢失1条,未检测到10,20,Y 染色体成分．结论:12色荧光原位杂交可用于鉴定肿瘤中复杂的染色体异常．KYSE450存在较多与原发性食管鳞癌一致的染色体改变．

食管癌中癌基因MUC4的变化及临床病理意义

目的探讨癌基因MUC4在食管癌中的拷贝数变化及其意义。方法应用FISH方法检测MUC4基因在35例食管癌组织中的拷贝数变化,并与18例癌旁组织做对比研究。结果 MUC4基因在35例食管癌组织均出现高频率(100％)扩增,18例癌旁组织中仅5例出现低频率扩增(27.8％),两者之间差异极显著(P<O.01)。MUC4基因扩增频率与食管癌患者的年龄、性别、肿瘤TNM分期、淋巴结转移及分化程度无相关性(P>0.05)。 结论MUCA基因扩增可能与食管癌的发生关系密切。

D10-86cDNA片段在人食管癌中的表达

目的:D10-86cDNA片段是通过mRNA差异显示技术分离的在食管癌中低表达的cDNA片段。由于mRNA差异显示技术具有较高的假阳性,故需进一步鉴定其在食管癌中的表达情况。方法:采用RT-PCR方法检测了41对食管癌组织及配对食管癌旁粘膜和食管癌细胞系EC9706和肺癌细胞系GLC82中D10-86cDNA片段的表达。结果:D10-86cDNA片段在41.5%(17/41)食管癌组织中的表达明显低于相应的癌旁粘膜,未检测到表达和微弱表达的分别为9.8%(4/41)和31.7%(13/41),食管癌组织中的表达高于相应的癌旁粘膜7.3%(3/41),表达无差别的51.2%(21/41);在食管癌细胞系EC9706和肺腺癌细胞系GLC82未检测到表达;D10-86cDNA片段表达下调与食管癌临床病理因素无显著相关性(P>0.05)。结论:D10-86cDNA片段在人食管癌中表达下调。

食管癌组织中cystatin B基因、D10-86 cDNA片段的表达

目的:研究食管癌组织中cystatin B基因、D10-86 cDNA片段的表达及相关性。方法:采用RT-PCR方法检测了41对食管癌组织及配对食管癌旁正常黏膜cystatin B基因、D10-86 cDNA片段的表达。结果:cystatin B基因、D10-86 cDNA片段各在82.9％(34/41)、41.5％(17/41)食管癌组织中的表达水平低于配对的食管癌旁正常黏膜,cystatin B基因的表达下调情况显著高于D10-86 cDNA片段(P<0.05),但2者的表达无相关性(JD>0.05)。结论:cystatin B基因、D10-86 cDNA片段在食管癌中表达下调,可能源于不同的机制。2者可能分别是由不同的机制而导致在食管癌组织中表达下调。