韩先杰作品选登

七月雨绵绵七月雨绵绵七月雨绵绵如丝如线 如幔如帘隐了山峦

脱胶海带粉和藻纤素对母猪繁殖性能和营养物质消化率的影响

试验旨在研究脱胶海带粉和藻纤素对母猪繁殖性能和营养消化率的影响。选择90头健康、第3胎的长白×大白二元母猪,随机分为3组,每组30头,每头作为1个重复饲养在定位栏中。对照组饲喂基础日粮,2个试验组分别在基础日粮添加3%脱胶海带粉或3%藻纤素等量替代小麦麸。试验从母猪妊娠期70d开始到哺乳期28 d结束,测定体重、背膘厚度、平均日采食量和繁殖性能指标;在妊娠期的90 d和哺乳期20 d,分别在3个组中随机选择12头母猪采集粪便测定营养消化率。结果表明:与对照组相比,3%脱胶海带粉组平均窝增重提高了9.71%(P<0.05),平均窝产活仔数提高0.89头(P<0.05),仔猪断奶均重提高9.90%(P<0.05);3%藻纤素组平均断奶窝重较对照组提高了3.72%(P<0.05),3%脱胶海带粉组与3%藻纤素组间无显著差异;3组间营养消化率差异不显著。由此可见,妊娠后期和哺乳期母猪日粮中添加3%脱胶海带粉或3%藻纤素等量替代小麦麸可以提高仔猪平均断奶窝重和平均窝增重,对其他营养物质消化率没有影响,二者均可以作为膳食纤维添加到母猪饲料中,且脱胶海带粉效果更优。

禽源大肠埃希菌氟喹诺酮类药物耐药研究进展

氟喹诺酮类药物是家禽养殖中常用的抗菌药物之一。近年来,氟喹诺酮类药物在禽养殖业中的广泛过度使用导致大肠埃希菌耐药菌株出现,且该细菌对此类药物的耐药性愈发严重,耐药谱不断扩大;耐药机制越来越复杂,主要通过染色体介导、外排系统介导、膜通透性降低和质粒介导4种作用机制;耐药检测技术得到不断发展,目前已有药物敏感试验以及基因芯片、PCR、荧光原位杂交、全基因组测序、宏基因组测序等多种检测方法。针对当前日趋严峻的大肠埃希菌耐药形势,需要大力开展细菌耐药性监测,开发中药、喹诺酮类杂化物等新型药物;通过加强宣传教育,完善监测预警体系,指导合理用药;采取“减抗替抗”等综合防控措施,积极应对细菌耐药性问题。本文以4种常见的氟喹诺酮类代表药物恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、萘啶酸为例,综述了该类药物在禽源大肠埃希菌中的耐药进展状况,及其耐药作用机制、检测方法及防控措施研究进展,以期为保障食品动物安全和公共卫生安全提供依据。

塞内卡病毒LAMP可视化快速检测方法的建立及初步应用

为建立塞内卡病毒(SVA)的快速检测方法,本研究在SVA高度保守区域,分别设计了5对特异性LAMP引物,并通过反应条件优化、敏感性试验、特异性试验以及临床样本检测,建立了一种经济、特异、敏感的SVA检测方法。在62℃水浴55 min扩增出大于220 bp的特异性阶梯状条带,以质粒为模板进行敏感性试验结果表明该方法在5.1 copies/μL时仍可以检测出SVA,比普通PCR敏感1000倍。特异性试验结果显示该方法与猪肺炎支原体(MPH)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪圆环病毒3型(PCV3)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合增病毒(PRRSV)均无交叉反应,应用该方法检测72例临床疑似病料,阳性率为33%(24例)。与普通PCR相比较,该方法操作简便、快速、特异、经济,本研究提供了一种更适于临床检测的SVA检测方法。

嵌合型PCV1-3感染性克隆的构建及病毒拯救

为了构建猪圆环病毒1型(porcine circovirus type 1,PCV1)和猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)的嵌合病毒PCV1-3,并为PCV3疫苗研制奠定基础,该研究以PCV1基因组为骨架,将PCV1的ORF2基因替换为PCV3的ORF2基因,构建嵌合型猪圆环病毒(PCV1-3)DNA克隆。PCR和序列测序结果显示,成功构建出了PCV1-3感染性克隆;将感染性克隆转染PK-15细胞,并将第4代病毒进行免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)和蛋白免疫印迹(Western Blot)检测,结果显示成功拯救了重组病毒PCV1-3。对第4代病毒进行滴度测定,效价为105.13 TCID 50/mL。因此,该试验成功拯救出一种新型嵌合型病毒PCV1-3,并为进一步研究PCV3疫苗奠定了基础。

非洲猪瘟病毒p22蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)引起的一种高度传染性病毒性疾病,发病率和死亡率高达100%,对我国的生猪养殖业造成了毁灭性打击。p22蛋白为ASFV的结构蛋白,本研究构建了重组原核表达质粒pET-32a-p22,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞表达重组p22蛋白并纯化,经Western blot鉴定证实重组p22蛋白与ASFV阳性血清有良好的免疫反应性。利用重组p22蛋白免疫Balb/c小鼠并通过间接ELISA方法筛选到2株能够稳定分泌p22蛋白单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株2D6和5E7。经抗体亚型鉴定两株抗体均为IgG1型;经Western blot鉴定,两株抗体能够特异性识别过表达的p22蛋白。综上,本研究成功表达并纯化了p22重组蛋白,制备了p22单克隆抗体,为进一步探讨p22蛋白的结构功能及其在ASFV中的感染致病机制提供了基础条件。

PCR检测鸭瘟病毒的研究

根据鸭瘟病毒DNA聚合酶基因序列 ,设计、合成了 1对引物 ,以 1株鸭瘟病毒疫苗株DNA为模板 ,进行PCR扩增 ,扩增出预期 5 6 3bp的目的DNA片段。将扩增出的DNA片段克隆到pMD18 T载体 ,经Amp/IPTG/X gal平板筛选 ,HindⅢ、XbaⅠ双酶切鉴定 ,获得阳性重组质粒。对重组质粒进行序列测定 ,与参考序列比较 ,二者同源性为 99.3%。小鹅瘟病毒、鸭肝炎病毒、鹅副黏病毒PCR扩增均为阴性。用此方法检测人工感染和自然感染鸭瘟的组织 (脑、肝、脾 ) ,均能检测到鸭瘟病毒DNA。PCR检测鸭瘟病毒具有高度的特异性、敏感性 。

绵羊歧腔吸虫病的诊治报告

歧腔吸虫病，又称双腔吸虫病，是由歧腔科（Dicrocoeliidae）、歧腔属（Dicrocoelium）的矛形歧腔吸虫和中华歧腔吸虫寄生于反刍动物（牛、羊、骆驼等）肝胆管和胆囊内所引起的疾病。虫体可引起胆管卡他性炎症、胆管壁增生、肥厚、肝肿大。严重感染的患畜，可见到黏膜黄疸，逐渐消瘦，下垂部位水肿，下痢，并可致死，对养殖业危害严重。

猪繁殖与呼吸综合征病毒TCID_(50)的测定

本文建立一种测定猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)滴度的新方法-免疫染色法。用免疫染色法测得病毒在Mark-145细胞系上的滴度为105.8TCID50/0.1ml,常规法测得病毒滴度为105.2FCID50/0.1ml,这表明前者敏感性和准确率高于后者。

兽医传染病学试卷分析及教学思考

为了评价动物医学专业本科生兽医传染病学期末考试试题的质量和学习效果，改进教学方法，该文用统计软件SPSS19．0对74名学生的兽医传染病学期末考试成绩进行分析。结果表明：74名学生的考试成绩为24-92分[（70．96±11．52）分]，大致符合正态分布。试题总体难度为0．71，信度为0．81，总体区分度为0．82，效度为0．77，由此得出试题难度适中，考试成绩可以信赖，区分度良好，与平日成绩相关度高。同时针对学生考试出现的问题提出今后教学改进的方向。

对一起绵羊歧腔吸虫病的暴发调查

本调查描述了一起羊歧腔吸虫病的发生经过和发病特点,通过实验室诊断认定该病为羊矛形歧腔吸虫病,其暴发的主要风险因素为引进羊只检疫不严、驱虫措施不科学和粪便处理不当。

猪生殖与呼吸综合症病毒的分子生物学研究进展

猪生殖与呼吸综合症（ＰＲＲＳ）是由病毒ＰＲＲＳＶ引起猪的一种高度接触性传染病。其主要特征为母猪发热，厌食，妊娠晚期流产，死产，产木乃伊胎，仔猪有呼吸道症状和高的死亡率。此病于１９８７年首先在美国发现，当时由于病原不清而称之为“猪神秘病”，“不孕呼吸综...

用地高辛标记的核酸探针检测猪伪狂犬病毒野毒感染的研究

利用PCR技术从带有伪狂犬病毒(PRV)gE基因的重组质粒pMD18-T-gE中扩增回收约304 bp大小的片段,并制备出地高辛标记的gE基因核酸探针。特异性检测结果表明,该探针能与重组质粒DNA发生特异性杂交,而与对照的PRV Bartha-k61株疫苗毒DNA、猪细小病毒(PPV)DNA、猪圆环病毒(PCV)DNA、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)cDNA、猪瘟病毒(CSFV)cDNA的杂交反应均为阴性;敏感性检测结果表明,该探针对PRV野毒的最低检出量为4 pg。应用该探针对11份繁殖障碍病料进行了杂交检测,共检出4份阳性病料,该结果与PCR检测结果一致,表明该核酸探针可用于猪伪狂犬病野毒感染的临床诊断。

PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV复合PCR检测方法的建立

根据GenBank上猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)的已发表序列,分别设计并合成了5对特异性扩增引物,建立PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV单项PCR检测方法,分别扩增出预期的466bp、759bp、349bp、202bp和706bp片段。在优化单项PCR反应条件基础上,建立了PCV2-PPV-PRV-PRRSV-CSFV复合PCR检测方法,为预防和控制上述几种病毒性传染病提供了一种快速、敏感、特异的检测方法。

山东省PRRS血清学调查及PRRSV分离株ORF3-7基因的克隆及序列分析

应用荧光抗体技术对山东省猪场PRRS的流行情况进行了血清学调查并分离到一株PRRSV。用 5对引物分别扩增了PRRSV山东分离株ORF3_ORF7,将其克隆入PMDl8_TVector并进行了序列测定。结果表明 ,山东分离株与美洲疫苗株ATCCVR_2 332 0RF3_ORF7各读码框核苷酸同源性分别为 98%、99%、99%、10 0 % ,氨基酸同源性分别为97%、98%、98%、98%、10 0 %。

应用PCR技术检测鹅细小病毒

根据鹅细小病毒GPVH1株结构蛋白VP1与VP3编码基因非重叠核苷酸序列设计了一对引物GPR1 /GPR2 ,用这对引物对感染器官内的GPR和接种鹅胚增殖的GPV进行PCR扩增 ,其结果引物GRP1 /GPR2能特异性地扩增GPVVP1 VP3区段核苷酸序列 ,扩增出与设计核苷酸片段大小相符的 0 6kb的序列 ,而对照的鹅副粘病毒cDNA及鸭瘟病毒 (DPR)DNA对照组均出现阴性结果。

牛病毒性腹泻病毒P20和P14基因的克隆及序列分析

参考GenBank中BVDVOregonC2 4V株的基因组序列设计两对引物 ,利用套式PCR方法扩增P2 0基因 ,扩增出预期 5 2 5bp的目的片段。扩增产物克隆至pMD18_T载体 ,经酶切鉴定获得阳性重组质粒并对其进行测序。测序结果与参考序列OregonC2 4V比较 ,二者的核苷酸同源性仅为 80 95 % ,推导氨基酸同源性为 87 5 0 %。测序结果经NCBI上的Blast(Http :/www ncbi nlm nih gov/BLAST/ )同源性比较 ,克隆得到的基因与Osloss株同源性最高 ,核苷酸同源性为93 6 5 % ,推导氨基酸同源性为 95 83%。根据P2 0的测序结果 ,参照GenBank中BVDVOsloss株设计一对引物 ,扩增P14基因 ,经同源性比较 ,扩增的P14基因与Osloss株核苷酸同源性为 94 77% ,推导氨基酸同源性为 95 10 % ,通过系统发生分析 ,推测P2

免疫应激对不同品种仔猪白介素-1β、皮质醇和生长激素的影响

试验选用体重(12.6±0.7)kg的健康莱芜猪、鲁莱和大约克夏仔猪各12头,每个品种随机分对照组和试验组,每组6头。试验组腹膜注射200μg/kg体重的脂多糖(LPS),对照组注射等量生理盐水。于注射前、后采血,测定血浆中白介素-1β(IL-1β)、皮质醇和生长激素(GH)含量。结果表明:用LPS刺激后2、4h和7h每个品种的试验组与对照组相比,血浆中IL-1β和皮质醇含量均显著提高(P<0.05),GH含量均降低,且LPS刺激后2h的GH水平显著降低(P<0.05)。3个品种猪相比,莱芜猪在LPS刺激后2h时IL-1β、皮质醇的升高幅度和GH降低幅度均最小,与大约克夏猪相比差异均显著(P<0.05)。结果显示,用LPS进行免疫应激,不同品种猪抗应激能力不同,莱芜猪相对于引进品种、地方品种有较强的抗免疫应激能力。