经口感染弓形虫BALB/c小鼠血清及肠道分泌物中IgA抗体含量的检测

目的研究经口感染弓形虫速殖子小鼠血清及肠道分泌物中IgA含量的变化,探讨肠道粘膜免疫应答机制.方法将6～8周龄BALB/c小鼠100只随机分为对照组和感染组.感染组灌胃接种RH株弓形虫速殖子5×104个/只,对照组给予等量PBS.于感染后第2、4、6、8、10、13、16、19、22、25天,每组各5只小鼠分别处死,摘眼球采血分离血清,收集肠道冲洗液,用ELISA法测定血清及肠液IgA含量.结果对照组血清IgA抗体于第4～8天缓慢升高后保持平稳;感染组小鼠血清IgA水平从第8天起迅速升高,第10天达到高峰,之后迅速下降并接近对照组的水平,第25天再度升高.与对照组相比,感染组血清IgA水平在第10、25天显著升高(P＜0.01).肠液IgA含量明显高于血清,两组小鼠肠道冲洗液中的IgA抗体于第4、6天逐渐升高之后,对照组保持平稳,而感染组于第8天骤然下降并低于升高前的水平,之后又迅速升高,于第13天达到峰值,随后下降并接近对照组水平;第8和13天感染组IgA抗体含量显著低于和高于(P＜0.01)对照组.结论BALB/c小鼠经口感染弓形虫,可有效诱导肠道粘膜的免疫应答,产生高水平的IgA抗体,发挥局部抗虫作用;提示IgA抗体产生变化规律与虫株毒力及小鼠免疫反应特性等因素有关.

SARS_CoV中国株基因组全长cDNA的构建及其恢复病毒的生物学性质

严重急性呼吸综合征是SARS-CoV引起的一种重要新发传染病,其致病机制的研究对于防治该病十分必要。为了利用反向遗传学技术研究SARS-CoV的致病机制,将覆盖SARS-CoVBJ01株基因组全长的7个cDNA片段纯化后进行体外连接,构建基因组全长cDNA分子,以其为模板,使用T7RNA聚合酶系统在体外进行转录,获得病毒RNA。用电穿孔转染法将转录体RNA导入VeroE6细胞,可观察到典型的SARS-CoV致细胞病变作用。对收获的恢复病毒采用RT-PCR方法进行鉴定,结果表明获得的恢复病毒与SARS-CoVBJ01株原病毒序列一致。以针对SARS-CoV的抗体对感染细胞作间接免疫荧光反应,证明获得了具有特异感染性的恢复病毒。同时用细胞病变法和空斑试验测定了恢复病毒及其亲本毒株的病毒滴度,结果表明二者在致病性上没有明显差异,恢复病毒具有与原型株相似的生物学特性。SARS-CoVBJ01株基因组全长cDNA的成功构建及对恢复病毒生物学性质的研究将为进一步探索SARS-CoV致病的分子机制及研制新型疫苗奠定良好的基础。

弓形虫诱导的黏膜细胞免疫应答研究进展

弓形虫经口感染可引起肠道黏膜诱导及效应部位的免疫应答,黏膜免疫研究对于研制弓形虫口服黏膜疫苗具有重要的指导作用。本文从细胞水平对弓形虫感染后肠道黏膜各类细胞的功能及作用机制的研究进展作了综述。

HBV、HCV、HIV血筛多中心研究免疫学灰区的核酸检测分析与临床特征研究

目的分析化学发光灰区标本的临床特征及核酸检测对化学发光灰区标本结果判断的指导性意义。方法收集2021年7月—12月全国不同地区的5家综合医院入院患者术前/输血前血源性传播疾病样本检测结果,对化学发光灰区检测结果的标本进行核酸检测结果及临床特征分析。结果5723例样本中总计检出HBV免疫灰区样本28例(占比0.49%),HCV灰区样本20例(占比0.35%)。经核酸检测验证,28例HBV灰区样本中,15例HBV样本核酸检测为阳性(占比53.5%),其HBcAb也均为阳性;13例HBV样本核酸检测为阴性(占比46.5%),其中HBcAb阳性4例。HBV与HCV免疫检测灰区在临床各个科室均有发现,出现HBV灰区样本最多的前三科室为骨科、妇科、泌尿科,灰区样本核酸验证假阳性最多的临床科室为妇科与骨科。HCV灰区样本最多的前三科室为泌尿、肾内、外科,且均为假阳性。HBV灰区样本患者临床诊断结果有35.7%(10/28)为肿瘤类疾病,HCV灰区样本患者临床诊断结果有40%(8/20)为肿瘤类疾病。结论化学发光法容易造成假阳性结果,应注意复检验证,且设置灰区并非必要。灰区样本可见于多个临床科室,具有一定的临床分布特征。核酸检测可以提高检测灵敏度并且更大限度保证结果的准确性,能够验证免疫检测灰区。

阿立哌唑与齐拉西酮对精神分裂症患者血糖、血脂的影响

目的探讨阿立哌唑与齐拉西酮对精神分裂症患者血糖、血脂的影响。方法选取80例精神分裂症患者,40例使用阿立哌唑,标记为对照组,另外40例使用齐拉西酮,标记为治疗组,于治疗前及治疗后4周、8周采用全自动生化仪分别检测空腹血糖、胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)水平,并对测定结果进行分析。结果两组患者在治疗前及治疗后4周、8周血糖、TC、TG的结果差异均无统计学意义(P>0.05);对照组有2例嗜睡的不良反应,治疗组有2例失眠的不良反应,两组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论阿立哌唑与齐拉西酮对精神分裂症患者血糖、血脂的影响不显著,可以提高患者的生活质量,在实践中有一定的指导意义。

长期服用抗精神病药治疗对精神分裂症患者肝脏及血脂水平的影响

目的:分析长期服用抗精神病药治疗对精神分裂症患者肝脏及血脂水平的影响。方法:选取2015年2月-2016年3月我院收治的精神分裂患者70例,根据服用抗精神病药物的年限,将服药时间>5年的患者设为观察组,服药时间<5年的患者设为对照组,各35例。对比两组肝脏及血脂检查情况、观察组患者不同病程及年龄肝脏异常检出率。结果:观察组TG、FBG、TC、LDL-C、GGT、ALT、AST水平均高于对照组,HDL-C水平低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组年龄≥55岁且病程≥7年的患者肝脏异常检出率高于年龄<55岁及病程为1~6年的患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:长期服用抗精神病药物对精神分裂症患者肝脏及血脂水平均造成明显影响,使血脂水平升高、患者机体代谢功能紊乱;因此,患者在服药时需按时检查肝功能及血脂水平,减少药物对肝脏造成的伤害。

C反应蛋白检测在呼吸道感染中的应用的研究进展

呼吸道感染性疾病是呼吸科病原体病毒、细菌侵入呼吸道病变,发作反复,临床小儿较为常见,影响生长发育。C-反应蛋白是当机体出现炎性反应或受到各种损伤后由肝脏合成的一种急性时相的反应蛋白,为国内外公认的最敏感炎性指标之一。呼吸道感染中应用C反应蛋白检测,对于临床区分病毒、细菌感染,病情的检测有重要的参考价值。本研究检索国内外文献,综述呼吸道感染中应用C反应蛋白检测,以期临床各位同仁参考。

精神病患者血清肌酸激酶临床检测的相关结果分析

抽取2014年7月~2015年10月本院收治的120例精神病患者作为观察组研究对象,同时选取同期进行健康体检的120例健康人作为对照组研究对象,对两组研究对象进行血清肌酸激酶的检测。分析两组患者的肌酸激酶指标的水平。结果（1）两组不同性别CK升高数值比较,男性和女性对比无明显差异,P〉0.05;（2）观察组中CK升高36例,升高率30.0%,相较于对照组升高率的7.5%,组间比较存在明显差异（P〈0.05）;（3）观察组中精神分裂症和其他精神障碍患者CK升高数值比较,不同诊断结果的患者,CK升高率比较无明显差异,P〉0.05。精神病患者较健康人具有更高的血清肌酸激酶活性,通过药物治疗后,患者的CK指标明显降低,可将其作为临床诊断及治疗的一项参考依据。

登革1型病毒广州2006年分离株的基因组特征与进化分析

目的对2006年分离自广州登革热患者血清的4株登革1型病毒(GZ57/06、GZ63/06、GZ69/06和GZ128/06)进行全基因组序列测定,并同其他毒株序列进行比对分析,以了解其基因组序列特征及可能的传播来源。方法将登革1型病毒分离株基因组分为9个片段进行RT-PCR扩增,5′与3′末端序列采用RACE法扩增,扩增产物纯化后进行PCR测序。通过末端重叠序列拼接成全长病毒基因组序列,利用生物信息学软件对序列进行比对分析。结果测序获得的4株广州登革1型病毒基因组全长均为10735核苷酸(nt),编码3393个氨基酸。5′和3′端各有一段非编码区,长度分别为94nt和462nt。4株病毒的编码区与非编码区核苷酸及氨基酸序列存在一些差异,其中GZ57/06、GZ63/06和GZ69/06毒株的基因组核苷酸和氨基酸序列同源性均在99%以上,而GZ128/06株变异较其他3株大,编码区差异尤其明显。序列比对分析表明,GZ57/06、GZ63/06和GZ69/06毒株均与泰国2001年分离毒株ThD1/0049/01和ThD1/0102/01同源性最高,而GZ128/06毒株与缅甸1998年分离毒株D1.Myanma.r31987/98同源性最高。这些新分离毒株与东南亚毒株属于同一基因型。结论新分离毒株可能来自泰国等东南亚国家和地区,不同毒株表型差异可能与其基因组特征具有密切关系。

痘苗病毒载体在冠状病毒反向遗传学中的应用

反向遗传学方法是研究RNA病毒的主要方法,痘苗病毒载体则是感染性克隆技术的主要媒介,目前这一技术已趋向成熟并扩大其应用领域及对象。本文对痘苗病毒载体的构建、在冠状病毒反向遗传学中的应用情况以及目前该领域的进展作一综述。

支撑喉镜声带肿物鼻内镜与显微镜临床研究

目的:分析支撑喉镜低温等离子治疗声带良性肿物195例病人进行治疗的疗效总结。方法:应用鼻内镜和显微镜支撑喉镜低温等离子治疗声带肿物治疗病人,分析其疗效。结果:声带暴露容易显微镜和鼻内镜下手术无明显差别,声带暴露困难鼻内镜手术优于显微镜,术后3例声门闭合遗留小缝隙,3mo后声嘶消失,1例复发,191例治愈。结论:声带暴露困难鼻内镜优于显微镜支撑喉镜下手术术治疗,恢复快,术后恢复好。

日本脑炎病毒非结构蛋白NS5对IFN-α介导的信号转导通路的抑制作用

目的探讨日本脑炎病毒抑制IFN-α介导的JAK-STAT信号转导通路过程中发挥关键作用的病毒特异蛋白,为阐明日本脑炎病毒抑制Ⅰ型IFN介导的JAK-STAT信号转导通路的作用机制奠定基础。方法分别构建日本脑炎病毒编码的7种非结构蛋白基因(NS1,NS2A,NS2B,NS3,NS4A,NS4B和NS5)的重组真核表达载体。采用间接免疫荧光法和Western blotting观察它们在细胞内的表达及定位情况。利用含萤火虫荧光素酶(Luc)报告基因的重组载体pISRE-Luc,观察表达病毒不同非结构蛋白的细胞内IFN-α介导的JAK-STAT信号转导通路的活化程度。构建融合表达红色荧光蛋白的STAT1重组真核表达载体pRed-STAT1,利用该重组载体在表达病毒非结构蛋白的细胞内观察融合蛋白Red-STAT1在IFN-α作用下的细胞内定位情况。同时,对表达病毒非结构蛋白的细胞内IFN-α介导的STAT1分子的磷酸化水平进行检测。结果日本脑炎病毒的7种非结构蛋白均可在哺乳动物细胞内正确表达,而且表达蛋白均位于细胞质中。在这7种非结构蛋白中,NS5可阻断STAT1分子的核转运及抑制STAT1分子的磷酸化水平,从而抑制IFN-α介导的细胞内JAK-STAT信号转导通路的活化。结论日本脑炎病毒的非结构蛋白NS5对Ⅰ型IFN系统的信号转导通路具有显著的抑制作用,可能是一种Ⅰ型IFN系统的拮抗蛋白。

重组人IL-2对感染弓形虫孕鼠T细胞亚群及NK细胞的影响

目的 研究妊娠期感染弓形虫的小鼠脾脏T细胞亚群和NK细胞水平的变化及IL - 2对二者的影响。方法 BALB/c孕鼠被随机分为 4组 :空白对照、感染对照、两个IL - 2处理组。于妊娠第 8d ,空白对照腹腔注射 0 2ml生理盐水 ,其余组腹腔接种 4 0 0个弓形虫速殖子。在感染的 - 1、0、1d ,IL - 2处理组分别腹腔注射rhuIL - 2 5 0 0u(低剂量组 )和 10 0 0u(高剂量组 )。妊娠第 10、12、14、16d取孕鼠脾 ,流式细胞术检测T细胞亚群和NK细胞水平。结果与空白组相比 ,在妊娠各期感染组的脾CD4 + T细胞水平显著降低 ,而CD8+ T细胞水平显著升高 (第 10、12、14d) ,二者比值明显倒置 ;NK细胞水平明显下降。高剂量IL - 2处理组的CD4 + T细胞水平在妊娠第 10、12d高于感染组 ,CD8+ T细胞水平在妊娠第 10、14d低于感染组 ,CD4 + /CD8+ T细胞比值在妊娠第 10、12、14d高于感染组。低剂量IL - 2处理组CD4 + T细胞与感染组无显著性差异 ,CD8+T细胞水平仅在妊娠第 14d显著性低于感染组。结论 感染弓形虫孕鼠的外周免疫受到一定抑制 ,妊娠各期脾CD4 + /CD8+T细胞比例失衡 ;感染孕鼠NK细胞数量减少 ;注射适量rhuIL - 2可以使倒置的CD4 + /CD8+ T细胞比值逆转 ,促进NK细胞增殖 ,提高母体免疫水平。

弓形虫垂直传播小鼠动物模型的建立

目的 探讨乙底酚 (己烯雌酚 ,DES)处理时 ,弓形虫垂直传播小鼠动物模型的建立条件。方法 采用不同数量 (0、2 0 0、4 0 0、80 0、16 0 0、32 0 0 )复苏的弓形虫速殖子 ,于不同妊娠期 (妊娠第 6、8、10天 )接种小鼠 ,并用一定剂量DES处理后 ,于妊娠第 18天处死 ,观察其流产情况及未流产小鼠的胎仔脑组织弓形虫感染情况。结果 妊娠第 6天接种速殖子 ,流产率高 ,垂直传播率低 ;妊娠第 10天接种时 ,流产率低 ,垂直传播率高。流产率和垂直传播率都随着接种速殖子数量的增加而升高。结论 于妊娠第 8天接种复苏后的弓形虫速殖子 4 0 0个 /只建立的弓形虫垂直传播的小鼠动物模型 ,既可以使流产率控制在较低水平 。

经口感染弓形虫诱导的小鼠肠道粘膜T细胞亚群变化

目的研究经口感染弓形虫速殖子小鼠肠道粘膜组织诱导部位与效应部位T细胞亚群的变化,探讨肠道粘膜免疫应答机制.方法将6～7周龄BALB/c小鼠100只随机分为对照组和感染组.感染组灌胃接种RH株弓形虫速殖子5×104个/只,对照组给予等体积PBS.于感染后第2、4、6、8、10 d分别处死小鼠,分离Peyer's patches(PP结)、肠系膜淋巴结(MLN)淋巴细胞、小肠上皮内淋巴细胞(IEL),用免疫细胞化学法检测CD4+、CD8+T细胞亚群.结果感染组小鼠PP结CD4+T细胞有随感染天数增加呈升高趋势,第6、8、10 d显著高于对照组(P<0.01);CD8+T细胞亦有增高趋势,但与对照组相比差异无显著性(P＞0.05);CD4+/CD8+比值第6 d起增高(P<0.05),第8 d最大(P<0.01),第10d回落(P<0.05).MLN中T细胞亚群有较弱增高趋势,无统计学意义(P＞0.05).IEL CD4+、CD8+T细胞在第6、8、10 d均增高,其中CD8+T细胞增高显著(P<0.01);CD4+/CD8+比值第6 d开始下降,两组间差异有显著性(P<0.05).结论诱导部位PP结CD4+T细胞明显增高,诱导对弓形虫抗原的处理、提呈作用;效应部位IEL CD8+T细胞增殖明显,在清除虫体的过程中起主导作用.

经口感染弓形虫诱导小鼠黏膜免疫动物模型的建立

目的建立经口感染弓形虫速殖子诱导黏膜免疫的动物模型。方法BALB/c小鼠分别灌胃接种5×103、5×104、5×105、5×106个RH株速殖子,观察小鼠的体况、病理变化;检测肠道分泌型IgA(SIgA)和Peyer’spatches(PP)淋巴细胞及小肠上皮内淋巴细胞(IEL)T细胞亚群的变化。结果经口接种5×104个弓形虫RH株速殖子可使小鼠出现临床症状和病理改变;SIgA水平升高;黏膜诱导部位的CD4+T亚群及效应部位的CD8+T亚群水平升高。结论5×104个弓形虫RH株速殖子灌胃接种小鼠可以诱导机体黏膜免疫应答。

常温储存的人同种异体骨制备

目的 探讨常温储存的人同种异体骨制备流程。方法 遵循供体选择标准 ,无菌条件下取骨经脱脂、脱钙等处理 ,制备新鲜骨、脱钙骨基质 (DBM)、表面脱钙骨、半脱钙骨 ,封装常温储存备用。结果 临床应用常温储存人同种骨植骨 10例 ,成活良好。结论 常温骨库制备人同种骨流程可靠。

西尼罗病毒Chin-01株基因组非编码区的序列测定及分析

目的对西尼罗病毒(WNV)Chin-01株基因组非编码区(UTR)序列进行测定,了解其与已报道毒株的序列差异及系统发育关系。方法采用5′和3′RACE法对Chin-01株病毒基因组的UTR进行RT-PCR扩增,测定扩增产物序列,采用DNAstar软件对该株及其他9株WNV的UTR进行序列同源性分析,同时构建了基于3′UTR的系统发育树,并用RNA structure软件预测其二级结构。结果Chin-01株基因组5′和3′UTR分别为96nt和630nt,序列同源性分析的结果表明,其5′UTR与其他9株的同源性均达到99%或100%,而3′区UTR与埃及Eg101株的同源性最高,达98·1%。5′UTR的起始核苷酸为AG,并含有一段与3′UTR互补的14nt序列。3′UTR的末端为CUOH,包含一段完全保守的5nt序列,以及三个保守的称为CS2、RCS2和CS1的基序。二级结构预测发现,Chin-01株5′UTR呈长茎环结构,3′UTR的3′端也可形成多个保守的茎环结构。结论Chin-01株与埃及Eg101株亲缘关系最为密切。

Ad-BMP-2促进兔骨髓间质干细胞成骨转化的研究

探讨用携带有人BMP 2基因片段的复制缺陷重组腺病毒 (Ad BMP 2 )转染对体外培养MSCs成骨转化的影响。取日本大耳白兔 2 0只自双侧股骨大转子取材培养MSCs,左侧来源细胞为实验组 ,右侧为对照组。以复制缺陷重组腺病毒介导人BMP 2基因转染MSCs后用RT PCR法及免疫组化染色证实转基因MSCs的BMP 2蛋白表达情况 ,通过改良Gomori钙钴法及ALP检测试剂盒检测两组细胞的ALP活性 ;通过RT PCR及Westernblot检测两组细胞Ⅰ型胶原的表达 ;通过BGP放免分析试剂盒检测两组细胞的OCN含量 ;并通过透射电镜观察转基因前后MSCs超微结构的变化。实验证实用Ad BMP 2转染的MSCs具有成骨细胞的结构特征和生物学特性。定量分析显示转基因组MSCs培养上清中ALP活性为 ( 7 0 1± 0 5 9)U L ,对照组为 ( 5 2 3± 0 5 5 )U L。Ⅰ型胶原表达的半定量分析显示转基因组为 1 3 5± 0 12 ,对照组为 3 65± 0 3 7。OCN含量在转基因组为 ( 2 4 5 0± 0 93 ) μg L ,对照组为 ( 15 45± 1 81) μg L。认为Ad BMP