P21-GFP融合基因表达载体的构建与在视网膜色素上皮细胞的表达定位

目的构建绿色荧光蛋白GFP-p21融合基因表达载体,并观察其在人视网膜色素上皮细胞中的表达及定位,为研究细胞周期蛋白激酶抑制因子p21对视网膜色素上皮细胞细胞周期的影响提供实验基础。方法以含有p21的全长序列的质粒为模板PCR扩增p21cDNA,应用基因重组技术与GFP基因融合,构建以绿色荧光蛋白GFP为报告基因的重组表达质粒pGFP-p21。利用脂质体转染体外培养的人视网膜色素上皮细胞,在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察pGFP-p21融合蛋白在细胞中的分布和定位,用WesternBlot方法分析其蛋白的表达。结果1酶切、DNA测序均证实插入片断的正确性。2荧光显微镜观察结果显示在空载体pEGFP-C1转染组中,细胞内绿色荧光呈弥散分布;重组质粒pGFP-p21转染组中,绿色荧光主要集中在细胞核内。3WesternBlot证实了pGFP-P21融合基因的表达。结论成功的构建了pGFP-p21质粒。视网膜色素上皮细胞能高效表达pGFP-p21融合基因,且主要定位于细胞核内,与p21基因的表达方式相同。

翼状胬肉切除改良术式的临床观察

目的:探讨改良式翼状胬肉逆行剥离切除及角巩膜缘表层血管二次烧灼的临床效果和安全性。方法:对66例70眼原发性翼状胬肉,逆行广泛剥离切除胬肉。术后6～10d的表面麻醉下针对巩膜裸露区结膜下纤曲扩张的异常血管进行准确定位烧灼并结膜下注射地塞米松注射液0.3mL。术后随访6～20mo。结果:随访期内,10眼复发(14%),未见其他并发症发生。结论:翼状胬肉逆行剥离切除加角巩膜缘表层血管二次烧灼大大降低翼状胬肉的术后复发率。此方法操作简单、安全、并发症发生率低。

翼状胬肉切除联合球结膜下生物羊膜移植的初步研究

目的:探讨翼状胬肉切除联合球结膜下生物羊膜移植的临床效果和安全性。方法:52例52眼初发性翼状胬肉,在手术显微镜下进行手术,保留翼状胬肉表面的球结膜。在自然解剖状态下彻底分离切除球结膜下的翼状胬肉组织,同时进行结膜下生物羊膜移植。术后随访6～15(平均10.24±2.45)mo。结果:48例48眼治愈,4例4眼复发。复发率7.69%;术中术后未见并发症。结论:手术显微镜下行翼状胬肉切除联合球结膜下生物羊膜移植具有手术损伤小,最大限度保留了正常眼表面的解剖结构,术后复发率低,是治疗初发性翼状胬肉的一种新的有效方法。

依诺沙星缓释颗粒在兔眼内的药动学

目的 :观察聚乳酸 聚乙醇酸共聚物依诺沙星缓释颗粒植入兔眼内的药物释放过程。方法 :以高分子量的聚乳酸 聚乙醇酸共聚物为载体制得含药量为 30 %的依诺沙星缓释颗粒 ,并作体外药物释放度实验。将该缓释颗粒植入兔眼前房中 ,以高效液相色谱法在不同时间点做药物浓度测定。结果 :体外 4d内依诺沙星缓释制剂累积释放率为 6 .37% ,兔眼房水内 5d药物浓度变化范围 1.2 1～ 10 .2 2mg·L-1,远高于最小抑菌浓度。该缓释颗粒在兔眼房水内的药动学参数分别为T1/ 2 (Ka)0 .0 4 5h ,T1/ 2 (Ke) 2 4 .5 5h ,Tmax0 .4 1h ,Cmax9.18mg·L-1,AUC 32 8.96mg·h·L-1。结论 :该聚合物制备的依诺沙星缓释颗粒具有良好的缓释作用 ,在兔眼内药动学特点符合眼内炎抗菌药治疗的基本要求。

p21/WAF1基因对人视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的观察p21/WAF1基因对体外培养的人视网膜色素上皮(hRPE)细胞增殖的影响。方法hRPE细胞原代、传代体外培养,通过脂质体介导将p21/WAF1基因转入体外培养的hRPE细胞。免疫组织化学法检测p21蛋白表达水平,并用MTT法检测其对hRPE细胞增殖抑制的作用,同时利用流式细胞仪来分析p21/WAF1基因对细胞周期的影响。结果MTT法显示p21/WAF1基因抑制hRPE细胞的增殖。流式细胞仪检测显示转染后G0/G1期比例明显增加,S期比例减少。结论p21/WAF1基因可有效地抑制hRPE细胞的增殖活性。

Inhibitory Effect of Tissue Transglutaminase (tTG) Antisense Oligodeoxynucleotides on tTG Expression in Cultured Bovine Trabecular Meshwork Cells

To study the effect of tTG fully phosphorothioated antisense oligodeoxynucleotides （tTG-ASDON） on tTG expression in cultured bovine trabecular meshwork cells （BTMCs） in vitro and explore a new treatment alternative for primary open angle glaucoma （POAG）, the ASDON1 and ASDON2 complementary to the protein codogram region of tTG were designed, synthesized and phosphorothioated according to the secondary structure of tTG. The ASDON1 and ASDON2 were embedded in Lipofectamine and transfected into BTMCs. The untreated group served as negative controls. The expression of tTG in the mRNA and protein level were measured by semi-quantitative RT-PCR and immunohistochemical technique-Supervision method respectively. Our results showed that both the mRNA and the protein of tTG with tTG-ASDON1 and tTCr-ASDON2 were significantly decreased as compared with that of the controls （P〈0.05）. On the other hand, no significant difference was found between the ASDON1 group and the ASDON2 group. It is concluded that the expression of tTG mRNA and protein in cultured BTMC are down-regulated by tTG- ASDON. As a result, tTG-ASDON may be used for the treatment of POAG through the inhibitory effect on the expression of tTG.