嵌合抗原受体修饰T细胞免疫治疗食管癌的实验研究

目的 观察嵌合抗原受体修饰T细胞(CAR-T)对人食管癌细胞EC109的体内外抗肿瘤作用。方法 以表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)为分子靶点、EC109-EGFRvⅢ为靶细胞,将二代CAR表达框克隆入慢病毒表达载体中,制备慢病毒并转染人外周血T细胞,采用乳酸脱氢酶(LDH)活性及干扰素γ(IFN-γ)等方法检测体外抗肿瘤作用,通过NSG小鼠移植瘤模型观察体内抗肿瘤作用。结果 表达质粒pEGFRvⅢ/CAR经限制性内切酶片段分析、基因检测及NCBI/Blast同源性分析确认各功能单位核苷酸序列准确无误、基因片段连接正确,流式细胞术检测慢病毒转染后T细胞EGFRvⅢ/CAR表达率为82%。效应细胞(EGFRvⅢ/CAR-T)和靶细胞(EC109-EGFRvⅢ)混合培养,LDH细胞毒性检测结果显示靶细胞裂解死亡与效/靶比呈正相关(E∶T为5∶1、10∶1、20∶1、40∶1),IFN-γ在E∶T为5∶1时与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。NSG小鼠皮下移植模型提示EGFRvⅢ/CAR-T对移植瘤有肿瘤抑制作用。结论 体外和体内实验显示CAR-T细胞对EC109-EGFRvⅢ有靶向杀伤作用,这为食管癌细胞免疫治疗提供了实验依据和研究基础。

高分化直肠神经内分泌肿瘤的临床病理特征及预后分析

目的 探讨高分化直肠神经内分泌肿瘤(RNET)的临床病理特征及预后。方法 回顾性分析2017年8月-2021年12月在该院住院治疗的83例高分化RNET患者的临床资料,包括:临床表现、内镜检查、内镜下治疗、术后并发症、术后病理、随访情况和预后。以2019年世界卫生组织(WHO)确定的消化系统肿瘤分类为标准,根据病理分期,将83例患者分为G1期组(72例)和G2期组(11例);根据患者瘤体数,将83例患者分为单发RNET组(77例)和多发RNET组(6例);比较两种分组之间嗜铬粒蛋白A(CgA)、突触素(Syn)和CD56的表达情况。结果 根据病理结果分组时,G1期组CgA阳性率明显高于G2期组,差异有统计学意义(χ^(2)=4.23,P=0.040);根据瘤体数分组时,多发RNET组CgA阳性率明显高于单发RNET组,差异有统计学意义(χ^(2)=5.74,P=0.017);Syn和CD56在以上两种分组中比较,差异均无统计学意义(P> 0.05)。结论 高分化RNET常无特异性临床表现,多为单发直肠G1期,ESD切除安全性高,预后良好,G1期患者中CgA阳性率较高,多发RNET患者中CgA阳性率较高。

长链非编码RNA LINC01094在胰腺癌组织中的表达及其对胰腺癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响

目的探讨LINC01094在胰腺癌组织中的表达及其对胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移和血管形成能力的影响。方法应用GSE数据集分析LINC01094的表达水平。采用qRT-PCR检测LINC01094在胰腺癌细胞中的相对表达量。构建LINC01094过表达及敲低的稳转株,qRT-PCR验证转染效率。克隆形成实验、Transwell实验、划痕实验检测LINC01094对MIA PaCa-2和PANC-1细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响,血管形成实验检测LINC01094对血管形成的影响。结果LINC01094在胰腺癌组织中表达增高,且与患者的不良预后相关。LINC01094上调后细胞增殖、侵袭、迁移以及血管形成能力增强,LINC01094下调后细胞增殖、侵袭、迁移以及血管形成能力减弱。结论LINC01094在胰腺癌中高表达,发挥促细胞增殖、侵袭、迁移和血管形成的作用。

经口内镜下肌切开术与经胸Heller术治疗贲门失弛缓症的临床疗效对比

目的对比分析贲门失弛缓患者经口内镜下肌切开术(POEM)与经胸食管贲门部黏膜外肌层切开手术(即Heller术)的临床疗效及安全性。方法回顾性研究2012年1月-2014年10月该院78例确诊为贲门失弛缓症患者。其中,接受POEM术患者为42例,接受Heller术患者36例,观察并对比两组患者术后症状缓解情况、食管下段括约肌(LES)静息压力、Eckardt评分、术中和术后并发症发生率、手术时长、住院时间及住院费用等。结果两组患者术后均获得明显的临床缓解,POEM组患者的并发症发生率、Eckardt评分及LES静息压力和Heller术组相比差异无统计学意义(P>0.05)。而POEM组患者的手术耗时、住院时长及住院费用均明显低于Heller术组(P<0.05)。结论 POEM作为一种近期疗效显著的内镜微创手术方式,与外科手术疗效相当,对患者造成的创伤小,痛苦小,使患者耐受性好,住院时间及住院费用减少,值得推广。

脐带间充质干细胞移植治疗终末期肝硬化的疗效及安全性

背景:骨髓间充质干细胞移植已应用于治疗终末期肝病并取得一定疗效。目的:观察脐带间充质干细胞治疗终末期肝硬化患者的疗效及安全性。方法:无菌条件下分离培养脐带间充质干细胞,选择60例肝硬化患者,在内科治疗基础上经肝动脉插管进行脐带间充质干细胞移植。结果与结论:移植2,4,8,12周后,患者血清白蛋白、前白蛋白水平逐渐升高(P<0.05),总胆红素、凝血酶原时间明显低于治疗前水平(P<0.05)。移植后患者乏力、腹胀、纳差明显好转,未发生与移植相关的严重并发症。说明脐带间充质干细胞治疗终末期肝硬化安全有效,能改善患者的肝功能、凝血功能及临床症状。

脐血间充质干细胞移植治疗失代偿期肝硬化的临床疗效观察

目的探讨脐血间充质干细胞移植治疗失代偿期肝硬化的临床疗效。方法选择2009年8月—2011年2月在郑州大学附属郑州市中心医院就诊的失代偿期肝硬化患者46例,采用随机数字表法分为治疗组24例,对照组22例。对照组患者给予常规治疗,治疗组在常规治疗基础上加用脐血间充质干细胞移植治疗。观察两组患者治疗前,治疗1、2、4、8、12周时血浆清蛋白、前清蛋白、总胆红素水平变化及不良反应发生情况,并于治疗前、治疗12周时对治疗组患者进行SF-36量表(中文版)评分。结果两组患者治疗前,治疗1、2周时血浆清蛋白、前清蛋白水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗组治疗4、8、12周时血浆清蛋白、前清蛋白水平高于对照组(P<0.05);两组患者治疗前,治疗2、4、8、12周时总胆红素水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗组治疗1周时总胆红素水平高于对照组(P<0.05)。治疗组患者治疗后躯体功能、肢体疼痛、总的健康状况、活力、社会功能、心理健康领域评分均高于治疗前(P<0.05),且均有临床和统计学意义;而躯体角色、情绪角色评分治疗前后比较,差异均无统计学意义(P>0.05),亦无临床和社会意义。两组患者均未出现皮疹、恶心、出血、感染等不良反应。结论脐血间充质干细胞移植治疗失代偿期肝硬化安全有效,能有效改善患者肝功能和生活质量,延缓其病程进展。

复发性肝细胞性小肝癌超声造影强化模式量化分析

目的:分析复发性肝细胞性小肝癌超声造影强化模式(CEUS)时间-强度曲线特征及临床意义。方法:将65例直径≤30 mm复发性肝细胞性小肝癌患者分组,42例复发时间≤2年为B1组,23例复发时间>2年为B2组,49例初发性肝细胞性小肝癌为A组,比较3组动脉期、门脉期、延迟期CEUS增强表现的异同,应用TIC分析软件对病灶进行定量分析,比较3组时间-强度曲线异同。绘制TIC定量参数的ROC曲线并计算曲线下面积。结果 :CEUS 3期增强表现:动脉期高增强B2组与A组比较差异有统计学意义(P′=0.008);门脉期等增强3组比较差异无统计学意义(P=0.078);延迟期低增强B2组与A组及B1组比较差异有统计学意义(P′=0.003,P′=0.005)。TIC定量参数比较:降支减半时间B2组与A组及B1组比较差异有统计学意义(P′=0.007,P′=0.013);上升时间、达峰时间、平均渡越时间3组比较差异无统计学意义(P=0.319,P=0.104,P=0.461);降支减半时间的曲线下面积0.841。结论:复发灶的强化模式与时间具有相关性,复发性肝细胞性小肝癌(>2年)CEUS强化模式不典型,CEUS应结合时间-强度曲线定量分析,从而为治疗和判断预后提供一定的临床价值。

基于代谢车的营养管理方案在肝病患者中的应用

目的 探讨间接能量测定系统(代谢车)在肝病患者营养治疗中的应用效果。方法 2020年8月至2021年1月,对住院肝病患者采用随机数字表法分成干预组(n=90)和常规组(n=88),分别按代谢车监测的静息能量消耗(REE)及Harris-Benedict(H-B)公式计算出的基础能量消耗(BEE)给予对应的营养治疗。治疗第10天测定比较患者血清前白蛋白、血清白蛋白。结果 入院时,不同年龄段不同性别患者REE比较,以及不同年龄段患者REE与BEE测量值比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。治疗10 d后,干预组血清前白蛋白(171.32±11.24)mg/L,血清白蛋白(37.65±2.11)g/L,显著高于常规组患者血清前白蛋白(129.52±12.31)mg/L,血清白蛋白(33.46±2.27)g/L,差异有统计学意义(均P<0.01)。结论 依据代谢车测定能量需求值确定的营养治疗方案对于肝病患者营养指标改善效果更好。

胎儿LAK细胞治疗中晚期肝癌的疗效观察

自１９８９年１月至１９９１年１０月，我们应用６－７个月龄的胎儿脾脏细胞和白细胞介素－２共培养３天后制备成胎儿ＬＡＫ细胞，静脉输注或肝动脉插管灌注治疗中晚期肝癌１８例。结果疼痛减轻１６例，占８８．９％；食欲增加１４例，占７７％；临床完全缓解２例，占１１％；部分缓解１４例，占７７％；总有效率占８８．９％（１６／１８）。而且ＬＡＫ细胞治疗后患者周围血ＬＫＴ４比率升高，ＯＬＴ８比率下降。

基于嵌合抗原受体修饰T细胞的肿瘤免疫治疗新策略

嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)修饰T细胞是近年来迅速发展的肿瘤过继免疫治疗新手段,其独特的作用机制和诱人的应用前景为肿瘤生物治疗开辟了一个崭新的舞台。CAR将识别肿瘤相关抗原的单链抗体和T细胞的活化基序相结合,通过基因转导赋予T细胞肿瘤靶向性、更强的杀伤活性和持久的生命力。自1989年Eshhar等首次提出CAR以来,CAR已从第一代发展至含有共刺激分子的第二、三代,CAR的Ⅰ/Ⅱ期临床试验在白血病、淋巴瘤、黑素瘤等恶性肿瘤中取得了可喜的成果,但是也面临脱靶效应、细胞因子风暴、移植物抗宿主病等潜在的安全性问题,未来研究将集中于设计更安全的第四代CAR、甄选具备最佳治疗潜质的T细胞亚群、优化临床治疗方案、完善临床前试验模型等方面。相信随着免疫学、基因治疗和细胞工程等领域不断取得新突破,CAR从实验室向临床转化的障碍将会逐一扫除,CAR有望成为主流的肿瘤治疗方法。

肿瘤过继免疫治疗临床级抗原特异性T细胞的研究进展

抗原特异性T细胞是肿瘤过继免疫治疗的核心,靶向性强、杀伤活性高、毒性作用小、疗效卓越的临床级细胞的制备是提高治疗效果的关键。近年来,全封闭自动化T细胞分离系统提高了安全性,新型人工抗原提呈方法和γc家族细胞因子增加了T细胞扩增效率,低分化表型T细胞的选择提高了有效性,而T细胞受体和嵌合抗原受体基因修饰赋予T细胞抗原特异性杀伤性能,病毒基因转导和理化基因转染T细胞方法的不断改进为基因修饰重定向T细胞的抗原特异性提供了保障。越来越多的临床试验展示了令人鼓舞的治疗效果,为肿瘤过继免疫治疗注入了新的生命力。

microRNA-145对人结肠癌Caco-2细胞生物学行为的影响

目的探讨微小核糖核酸-145(miRNA-145)对人结肠癌细胞系Caco-2细胞迁移、增殖及细胞周期等生物学行为的影响。方法选用Caco-2细胞并进行培养,用脂质体转染法分别将miRNA-145及阴性对照miRNA过表达的质粒转入Caco-2细胞,分为对照组和miRNA-145组进行实验。在倒置荧光显微镜下观察细胞转染效率;采用划痕试验检测miRNA-145对Caco-2细胞迁移的影响;噻唑蓝法检测miRNA-145对Caco-2细胞增殖的影响;流式细胞术检测miRNA-145对Caco-2细胞周期的影响。结果与对照组相比,Caco-2细胞过表达miRNA-145后,细胞迁移速度减慢,生长活力明显受到抑制(P<0.05),G1期细胞百分比增高(P<0.05),而G2期及S期细胞百分比则无明显改变(P>0.05)。结论miRNA-145可抑制Caco-2细胞的迁移和增殖,同时可使Caco-2细胞发生G1期阻滞,减慢细胞周期进程。

肝癌组织中KLF4的表达及意义

目的探讨Kruppel样因子4(KLF4)在肝细胞癌(简称肝癌)中的表达及意义。方法应用寡核苷酸基因芯片、逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学技术检测KLF4在健康人、肝硬化及肝癌组织中的表达,并分析KLF4与肝癌临床病理特征的关系。结果寡核苷酸基因芯片分析,KLF4在肝癌差异表达基因谱中明显下调(Ratio=0.438);RT-PCR及免疫组织化学方法证实,KLF4在肝癌中低表达,其表达缺失与病理学分级显著相关。结论KLF4在肝癌组织中的低表达与肿瘤分化程度密切相关。

GADD45β在肝癌中的异常表达

目的:探讨生长抑制DNA损伤诱导因子β(GADD45β)与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生、发展的关系.方法:应用寡核苷酸基因芯片、反转录PCR(RT-PCR)、免疫组织化学技术检测GADD45β在人正常肝组织、肝硬化组织和肝癌组织中的异常表达,分析GADD45β与临床病理学特征的关系及其异常表达的可能分子生物学机制.结果:正常肝组织、肝硬化组织和肝癌组织中GADD45β mRNA的阳性表达率分别为80%、60%和26%,肝癌组织与正常肝组织间有非常统计学差异(χ2=15.128,P<0.01);GADD45β蛋白的阳性表达率在正常肝组织、肝硬化组织和肝癌组织中分别为85%、70%和31%,有显著统计学差异(χ2=24.619,P<0.01).GADD45β在肝癌组织中的表达缺失与病理学分级显著相关(P<0.01).结论:GADD45β作为抑癌基因在肝癌的发生发展中起到相当重要的作用,且与肿瘤分化程度密切相关.

中药穴位贴敷联合复方聚乙二醇电解质散在成人肥胖病人肠道准备中的应用

目的:探讨中药穴位贴敷联合复方聚乙二醇电解质散在成人肥胖病人肠道准备中的应用效果。方法:选取2019年7月—2020年1月在河南省人民医院消化内科住院或门诊行结肠镜检查的168例成人肥胖病人作为研究对象,按照随机数字表法将病人分为对照组和观察组,每组84例。对照组采用复方聚乙二醇电解质散进行肠道准备,观察组在对照组基础上使用中药穴位贴敷。比较两组病人肠道清洁准备有效性、不良反应发生情况、病人肠道准备接受程度。结果:观察组肠道准备有效率为94.05%,Boston肠道准备量表总分为(7.50±1.84)分,均高于对照组[肠道准备有效率为83.33%,Boston肠道准备量表总分为(6.50±3.24)分],两组比较差异有统计学意义(P<0.05);观察组病人不良反应评分为(1.20±0.63)分,低于对照组[(2.30±1.16)分];两组用药后恶心、全身乏力、腹痛腹胀、心慌发生率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);两组肠道准备接受度比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:与单纯使用复方聚乙二醇电解质散相比,成人肥胖病人使用中药穴位贴敷联合复方聚乙二醇电解质散行肠道准备效果较好,不良反应较轻,且病人可接受。

肝癌组织中maspin mRNA和蛋白的表达及意义

目的探讨肝癌组织中maspin基因在mRNA和蛋白水平的表达及意义。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学(IHC)法检测maspin在人正常肝脏、肝硬化和肝癌组织中的表达。结果maspin在人正常肝脏、肝硬化和肝癌组织中mRNA阳性表达率分别为88.9%(16/18)、57.1%(8/14)和41.7%(15/36),蛋白阳性表达率分别为83.3%(15/18)、50%(7/14)和38.9%(14/36),三组间相比差异均有统计学意义。maspin蛋白表达与肝癌的组织分化程度和远处转移有关(P均<0.05),而与肿瘤大小无关(P>0.05)。结论maspin在肝癌组织中呈低表达,maspin基因的缺失可能是肝癌发生、发展和转移的原因之一。

CD133、EGFRvⅢ在人脑胶质瘤组织中的共表达及临床意义

目的探讨CD133、EGFRvⅢ在人脑胶质瘤组织中的共表达及临床意义。方法选择行手术治疗的脑胶质瘤患者40例,采用免疫组化双重染色法检测其脑胶质瘤组织中的CD133、EGFRvⅢ表达。结果 40例患者脑胶质瘤组织中的CD133+细胞、EGFRvⅢ+细胞阳性表达率分别为100%、40%,二者双染阳性表达率为35%。CD133呈棕黄色,位于细胞质和细胞膜上,多数阳性细胞在肿瘤组织中散在分布,部分呈聚集现象;EGFRvⅢ呈深蓝色,主要分布在细胞膜上,细胞质中有少量分布;在肿瘤组织靠近血管区两种阳性细胞存在共聚集现象。结论 CD133、EGFRvⅢ在脑胶质瘤组织中的分布具有相关性,在细胞水平上存在共表达,二者可以成为胶质瘤干细胞治疗的分子靶点。

EphrinA1-PE38/GM-CSF壳聚糖纳米粒治疗荷胶质瘤鼠原位激活树突状细胞研究

壳聚糖（chitosan）是从甲壳类生物的贝壳中提取出来的一种可生物降解的多糖，具有良好的生物相容性，对包裹的分子有很好的结合和保护作用，对生物体无毒、相容性好，且很容易制成不同途径给药的基因治疗载体［1］。在表面覆盖吐温‐80的纳米微粒，能很好地透过血‐脑屏障，对颅内肿瘤治疗具有很好前景。值得注意的是，纳米粒能够用配体进行表面修饰，如抗体片段，可进行靶向治疗。EphA2属于受体酪氨酸激酶家族，EphrinA1是其特异性的配体。在成人各种正常上皮细胞中，EphA2几乎不表达，在能够形成血管的胶质瘤中EphA2高表达明显［2］。以树突状细胞为基础的免疫治疗是一种非常有前景的新疗法，具体做法是使DCs负载肿瘤相关抗原，有效激发机体CTLs的抗肿瘤免疫反应，达到靶向性杀伤肿瘤细胞而不伤害正常细胞的目的。本研究内容主要为高性能壳聚糖包裹EphrinA1结合绿脓杆菌毒素PE38杀伤胶质细胞瘤血管生长造成肿瘤缺血、缺氧性坏死，同时联合免疫调节剂GM‐CSF在体内完成DCs抗原负载并产生DCs疫苗。

包裹EphrinA1-PE38/GM-CSF壳聚糖纳米粒的制备方法及特性研究

目的制备EphrinA1-PE38/GM-CSF壳聚糖纳米颗粒系统,检测其物理性能。方法制备EphrinA1-PE38/GM-CSF壳聚糖纳米颗粒系统并检测颗粒大小、形态、包装容量、包装效率、稳定性、包裹方式。结果 EphrinA1-PE38/GMCSF壳聚糖纳米颗粒大小50-100nm,类似球形,分布较为均匀,呈聚集团块状,4℃条件下状态稳定。电泳显示纳米颗粒上清中EphrinA1-PE38/GM-CSF与游离EphrinA1-PE38/GM-CSF在同一分子水平。CLSM图像证实EphrinA1-PE38/GMCSF不仅仅与其表面结合,且包裹于壳聚糖纳米颗粒内。结论 EphrinA1-PE38/GM-CSF可与壳聚糖结合形成纳米颗粒,且包装容量、包装效率、稳定性均较高。