细胞凋亡相关基因与白血病

细胞凋亡是当前生命科学研究的热点之一,凋亡相关基因bcl-2、P_(53)、c-myc、ICE家族、APO-1/Fas(CD_(95))、bcr-abl、PML-RARα等涉及白血病发病机制、治疗和耐药,通过调控凋亡相关基因促进白血病细胞凋亡,可能是治疗白血病的新途径。

成人急性白血病过氧化物酶阴性病人免疫表型研究及其临床意义

使用一组淋、髓系单克隆抗体检测了35例成人急性白血病过氧化物酶(POX)染色阴性患者,发现13例为B 系急淋(ALL),3例T 系ALL,7例急非淋(ANLL),2例为杂合性急性白血病(HAL)、其余10例并无淋或髓系的特异标记。证实POX 阴性急性白血病是一组异质性疾病。

紫外线照射后可移植性白血病模型微核研究

研究了可移植性T细胞白血病模型(L_(7212))在不同剂量紫外线照射后的微核变化,发现该模型对紫外线敏感,当紫外线剂量为45×10^(-7)J/S.mm^(-2)时,其微核细胞率、微核率均高于对照组(P<0.005),并且剂量—效应曲线呈Y=a+blgx(P<0.01)。此外,研究还揭示胞质分裂阻断微核法比常规培养法灵敏(P<0.005)。

过氧化物酶染色阴性的急性非淋巴细胞白血病免疫诊断特点及其临床意义

作者报道一组急性白血病过氧化物酶（ＰＯＸ）染色阴性而无淋系相关抗原表达，但与一种以上髓系相关ＭｏＡｂ反应的ＰＯＸ阴性型急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）患者的免疫学特征。此组患者较同期化疗的急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）、ＰＯＸ（＋）ＡＮＬＬ反应差（Ｐ＜０．０１），病程短（Ｐ＜０．０２），提示ＰＯＸ（－）ＡＮＬＬ应按难治性急性白血病处理。

PRM1,一个新的候选结肠癌相关CT抗原基因的识别及其在结肠癌组织中的表达分析

目的筛选新的肿瘤/睾丸抗原相关基因,为肿瘤的诊断和治疗提供理论依据。方法利用文献报道的大规模平行信号测序技术获得的人类33种正常组织的基因表达谱,经生物信息学分析筛选出睾丸富集表达基因。利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,在15种人类正常组织中对候选基因进行验证,最后利用荧光定量PCR技术对睾丸特异基因在结肠癌组织和癌旁组织中的表达差异进行分析。结果在15种人类正常组织中,PRM2,PRM1,TNP1,AKAP4,TCP11为睾丸特异性表达,在其它组织中均无表达。其中PRM1基因在50%(6/12)的结肠癌组织中有明显的上调(>2倍)。其它基因在结肠癌中表达与癌旁组织比较无统计学差异。结论PRM1可能是一个新的CT基因,结果显示PRM1基因可能会在结肠癌的分子诊断或者免疫治疗中起到重要作用。

表遗传学与肿瘤

通常认为遗传学上的基因突变是肿瘤发病机制中的关键事件,尤其是抑癌基因的体细胞突变与肿瘤的发生有着密切的关系。但是,近年来随着对肿瘤认识的深入,人们发现DNA序列以外的调控机制异常在肿瘤的发生、发展过程中更为普遍、也更为重要,这种调控机制被称为表遗传学(epige-netics),研究DNA序列没有变化、可遗传的表达改变。例如,基因启动子区CpG岛甲基化模式的异常与许多肿瘤的发生有着密切的关系。除了DNA甲基化调控形式外,表遗传学还包括基因组印记、染色质组蛋白修饰、隔离蛋白以及非编码RNA(包括microRNA)等DNA序列以外的各种调控方式。现就表遗传学调控机制与肿瘤发生的关系作一简要综述。

microRNAs功能研究进展

microRNAs(miRNAs)是一类长约20～24个核苷酸的单链非编码小RNA分子,由一段具有发夹结构的70～80个核苷酸长度的单链RNA前体(pri-mRNAs)在类RNaseⅢ酶Dicer的剪切下而生成.miRNAs在各种生物中广泛存在,具有保守性,与机体生长发育、分化、疾病有着密切的联系.主要对MiRNAs最新的功能研究进展进行了综述.

多药耐药性肿瘤细胞相关噬菌体抗体库的构建

利用噬菌体抗体库技术 ,构建了多药耐药性肿瘤细胞相关噬菌体抗体库。以多药耐药性肿瘤细胞 KB- A1为免疫原免疫 Bal B/c小鼠 ,从其脾脏提取总 RNA,并分离出 m RNA。RT- PCR扩增出 VH 和 VL 基因 ,经重叠延伸反应组装成单链抗体 ( Sc Fv)。将其克隆入噬菌粒载体p CANTAB 5 E中 ,电转化 E. coli TG1 ,成功构建了库容为 0 .8× 1 0 6的噬菌体抗体库 。

钙拮抗剂逆转L_（1210）／HR细胞抗药性的动物体内试验研究

本文将体外培养的抗高三尖杉酯碱Ｌ１２１０耐药细胞（Ｌ１２１０／ＨＲ细胞）移植至ＤＢＡ／２小鼠体内，建立了Ｌ１２１０／ＨＲＤＢＡ／２小鼠动物模型，并用钙拮抗剂异搏定、尼群地平进行Ｌ１２１０／ＨＲＤＢＡ／２动物模型的逆转试验，证明异搏定能明显延长动物的存活期，有效地逆转了Ｌ１２１０／ＨＲ细胞的抗药性。另外用高效液相色谱议检测了经异搏定、尼群地平逆转的Ｌ１２１０／ＨＲ细胞内高三尖杉酯碱的药物含量，表明经钙拮抗剂异搏定逆转后细胞内高三尖杉酯碱药物含量明显增高，经异搏定逆转的细胞内药物含量比未逆转的细胞高２．３倍。

PNMA5基因在肝癌组织中的表达及功能研究

目的:研究功能未知基因PNMA5在肝癌组织中的表达及其与肝癌细胞生长的关系;方法:利用肝癌基因表达谱数据研究发现PNMA5基因在肝癌组织中高表达。采用RT-PCR及实时荧光定量-PCR(real-time fluorescemt quantitative PCR,RFQ-PCR)方法检测PNMA5在人类正常组织以及肝癌组织和癌旁组织中的表达水平;利用RNA干扰技术沉默肝癌细胞株(Focus和PLC)内PNMA5基因的表达;CCK-8实验定量分析内源性PNMA5基因被沉默前后的Focus和PLC细胞生长曲线的变化。结果:在14种人正常组织中,PNMA5只在睾丸、卵巢和脑组织中高表达,PNMA5基因在42%(5/12)的肝癌组织中有明显的上调(与癌旁组织比大于2倍以上,P<0.05)。沉默肝癌细胞株Focus和PLC中内源性PNMA5基因表达后,2种肝癌细胞的生长均受到明显的抑制(P<0.01),同时,从G1期进入S期细胞明显减少(P<0.01)。结论:PNMA5在维持肝癌细胞恶性表型过程中可能起到重要的作用,可能是一个新的肿瘤-睾丸相关基因。进一步研究其功能有可能发现肝癌发病的新机制,成为肝癌治疗的新靶点。

杂合性急性白血病（附2例报告）

报告２例具有淋系和髓系双标记的杂合性急性白血病，例１患者白血病细胞免疫表型为ＨＩ９８＋ＨＩＭ４＋ＨＩ１１５＋／ＣＤ１９＋，例２免疫多型为ＨＩ９８＋ＨＩＭ５＋ＨＩ１１５＋／ＣＤ７＋ＣＤ２＋。二者治疗反应、预后差。

白血病红细胞免疫功能的观察

我们用多种指标检测27例白血病的红细胞、白细胞免疫功能,并与正常人作了比较。白血病患者红细胞 C_3b 致敏肿瘤细胞血凝检测与红细胞 C_3b 受体检测结果均比正常对照组降低(P<0.01),红细胞免疫复合物检查与循环免疫复合物检查结果均比正常对照组升高(P<0.01),而 CD_3、CD_4、CD_8、CD_(30)也比正常对照组降低(P<0.01)。提示白血病患者红细胞免疫与白血细胞免疫功能均低下。

ING5在肝癌中表达的研究

背景：生长抑制因子（ING）家族基因对多种肿瘤的发生具有抑制作用。目的：研究ING5基因在肝癌发生、发展中的作用。方法：构建表达ING5的真核和原核质粒，制备ING5多克隆抗体。以实时荧光定量RT-PCR检测肝癌组织中ING家族基因mRNA表达以及肝癌组织和肝癌细胞株中ING5mRNA表达，分别以蛋白质印迹法和免疫组化染色检测肝癌细胞株和肝癌组织中ING5蛋白表达。结果：肝癌组织中ING家族基因mRNA表达均下调。肝癌组织和肝癌细胞株中ING5mRNA和蛋白表达均下调。结论：ING5在肝癌中表达下调．对其发生、发展可能起抑制作用。

HBx基因转染对Huh7细胞中基因转录的影响

目的:研究HBx基因对肝癌细胞Huh7中基因表达的影响,为探讨HBx在肝癌发生发展中的分子机制提供依据。方法:以pcDNA3.1b质粒为载体,将HBx转入Huh7细胞中,同时将pcDNA3.1b作空白对照。用Western印迹法证实基因转染成功。应用Affymetrix公司的人类全基因组寡核苷酸基因芯片分析转染HBx基因前后,Huh7细胞的基因表达谱。随机选择转染前后有明显差异的6个基因(3个上调,3个下调),用荧光定量PCR技术进行验证。结果:从基因芯片结果分析中发现,与对照组相比,HBx转染后Huh7细胞中明显上调的基因有88个,下调的基因有111个,这些差异基因的功能涉及多个方面。结论:HBx基因对肝癌细胞的影响是双向的,既有转录激活的作用,同时又有转录抑制的功能。这些数据对于理解HBx基因在肝癌发生发展中的作用具有重要的参考意义。

用于活体成像的小鼠肝癌移植瘤模型的建立

目的建立可用于活体成像的小鼠肝癌移植瘤模型。方法利用脂质体将荧光素酶表达载体pGL3(LUC/NEO)转染至人肝癌细胞株SMMC-7721、Huh-7、Hep3B、MHCC-97H、HCC-LM6、PLC/PRF/5中,经G418筛选获得稳定表达荧光素酶的细胞克隆。根据体外生物发光情况及细胞的生长特性,从中挑选合适克隆,进行裸鼠皮下接种,建立肝癌移植瘤模型。利用活体成像系统监测肿瘤的生长转移情况,并对肝脏组织进行HE染色分析肿瘤细胞的生长分布特点。结果建立了6株肝癌细胞株的荧光素酶基因稳定表达的亚克隆,并且体外验证了各种细胞株中的荧光素酶活性情况;裸鼠皮下成瘤实验显示了SMMC-7721^(Luc+)、Huh7^(Luc+)、PLC/PRF/5^(Luc+)、MHCC-97H^(Luc+)稳定细胞具有成瘤特性;裸鼠肝脏原位注射肝癌细胞(SMMC-7721^(Luc+)、MHCC-97H^(Luc+)、HCC-LM6^(Luc+)、PLC/PRF/5^(Luc+)),利用活体成像系统能够有效对活体肿瘤生长情况进行监测;裸鼠脾动脉注射肝癌细胞(MHCC-97H^(Luc+)、PLC/PRF/5^(Luc+)),利用活体成像系统能够监测到小鼠肝癌模型的生长状况,之后处死小鼠,对肝脏组织HE染色发现肝癌细胞局部分布于肝脏中。结论本研究成功地构建了可用于活体成像的小鼠肝癌移植瘤模型,模型稳定可靠、直观、灵敏,为肿瘤生长转移机制的研究及抗肿瘤药物的研发提供了重要工具。

JmjC家族在肿瘤发生中作用的研究进展

肿瘤通常伴有遗传学和表观遗传学的改变,组蛋白修饰是一种重要的表观遗传学调控方式,常参与肿瘤的发生和发展。研究表明部分包含JmjC结构域的蛋白具有组蛋白去甲基化酶的活性,能够移除组蛋白上的甲基。JmjC家族在肿瘤的发生中发挥重要作用,其机制研究已成为肿瘤表观遗传学研究的热点。文章主要介绍JmjC家族成员的基本信息,并对其在肿瘤发生中的作用进行探讨。

CL-L 1基因在肝癌中的表达及其功能研究

目的:通过对肝癌相关基因CL-L1表达的研究,探讨其在肝癌发病机制中的作用。方法:采用RT-PCR分析CL-L1基因在61例肝癌和癌旁组织中的表达差异;利用pcDNA3.1/Myc-His(-)B和pEGFP-N1载体将CL-L1基因转入PCL肝癌细胞株,观察其克隆形成能力的变化以及该基因产物的亚细胞定位。结果:CL-L1基因在75.4%的肝癌组织中明显下调;该基因蛋白产物定位于细胞质中;CL-L1基因过表达引起PCL细胞的克隆形成能力明显下降。结论:CL-L1可能是一个新的肝癌相关的抑癌基因,对其进行深入研究有可能发现肝癌发病的新机制,也有可能发现肝癌治疗的新靶点。

MAGEA9基因在肝癌中的表达及RNAi沉默后对肝癌细胞生长和克隆形成的影响

目的研究基因MAGEA9在肝癌中的表达,以及被沉默后对肝癌细胞株Focus和PLC/PRF/5生长的影响。方法采用半定量RT-PCR方法检测MAGEA9基因在48例肝癌样本的癌和癌旁组织,14种人正常组织和17株人肝癌细胞株中的表达差异;同时观察沉默MAGEA9表达后肝癌细胞生长曲线和克隆形成能力的变化。结果与癌旁样本相比,MAGEA9基因在肝癌组织mRNA表达水平上调的比例为29%(14/48);在正常人体组织中局限于睾丸、心脏、脾脏、肾脏组织中表达;利用RNA干扰技术下调MAGEA9基因的表达后,Focus和PLC/PRF/5细胞生长受到明显的抑制;同时,PLC/PRF/5细胞克隆形成能力明显减弱。结论 MAGEA9基因在维持肝癌细胞的恶性表型中可能起到重要的作用,因此它可能与肝癌发生发展有密切的关系,深入研究MAGEA9在肝癌中的功能,有可能为肝癌诊断发现新的指标或为肝癌治疗提供潜在的药物靶点。

一个富含谷氨酸的人类分泌蛋白基因hMGRAP的克隆与表达分析

为了筛选有功能意义的新的分泌蛋白,并对其功能进行探索,采用生物信息学工具预测得到一个新的人类分泌蛋白基因hMGRAP(HumanMultipleGlutamineRepeatAcidicProtein)。该基因定位于染色体7q22.1,全长cDNA为1547bp,编码含有248个氨基酸的蛋白,该蛋白富含重复的谷氨酸序列,等电点为4.6。用PCR方法从正常人的混合cDNA文库中克隆到hMGRAP。Westernblot实验表明hMGRAP能大量地从瞬时转染的COS 7细胞中分泌到细胞培养液中。RT PCR结果显示,hMGRAP相对表达较高的组织为睾丸、骨骼肌和肾。总之,筛选并克隆到一个新的人类分泌蛋白基因hMGRAP,其生物学功能可能因其重复的谷氨酸编码序列而具有一定特殊性。

母系胚胎亮氨酸拉链激酶基因在肝癌中的表达及siRNA干扰后对肝癌细胞Hep3B生长、凋亡的影响

目的探讨母系胚胎亮氨酸拉链激酶(MELK)基因在肝癌中的表达及siRNA干扰后对肝癌细胞Hep3B生长、凋亡的影响。方法利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术和实时定量PCR技术检测MELK基因在肝癌和癌旁组织中的表达差异;评价MELK与肝癌早期指标甲胎蛋白(AFP),δ1样同系物(DLK1)在48例肝癌样本中表达的关系;采用化学合成siRNA沉默内源性MELK基因表达,分析肝癌细胞Hep3B的生长活性、凋亡。结果在半定量PCR检测的72例肝癌患者中,55例癌组织中MELK基因mRNA的表达水平高于相应癌旁组织;实时定量PCR结果显示MELK基因在肝癌组织中的表达量显著高于癌旁组织(P<0.001)。MELK、AFP、DLK1在肝癌样本中的阳性率分别为66.7%、50%、54.2%,MELK在肝癌中的阳性比例高于AFP、DLK1;干扰MELK基因在肝癌细胞Hep3B中的表达可抑制细胞生长。结论 MELK激酶作为胚胎干细胞标志性基因在肝癌发生时高表达,是治疗肝癌的潜在靶基因。