羊巴贝斯虫病流行病学的研究进展

羊巴贝斯虫病是一种由硬蜱传播的血液原虫病,呈全球性分布,主要临床症状为发热、四肢无力、贫血、腹泻、反刍减弱、厌食、精神不振、虚弱等,严重可导致死亡。本文阐述了巴贝斯虫病病原的种类,并对感染羊的莫氏巴贝斯虫、绵羊巴贝斯虫、粗糙巴贝斯虫、泰氏巴贝斯虫和叶状巴贝斯虫的流行病学情况进行了总结,为羊巴贝斯虫病的防控提供一定的依据。

G型产气荚膜梭菌的分离鉴定及其在鸡坏死性肠炎发病模型中的应用

目的:探讨不同诱导因素对鸡坏死性肠炎(Necrotic enteritis,NE)的诱发效果,以便建立鸡坏死性肠炎的发病模型。方法:以安徽省某规模化鸡场采集的病鸡肠道样品中分离出的G型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,C.perfringens)(CPG-AH5株)为病原菌,分析单独或联合感染毒害艾美耳球虫对在饲喂高蛋白饲料(添加鱼粉)和不饲喂高蛋白饲料条件下,诱发鸡坏死性肠炎的影响。结果:无诱导因素时,1.1×10^(9)CFU/mL剂量下CPG-AH5株感染可造成肠道损伤(平均病变评分为1.5±0.85分);单一诱导因素(鱼粉或球虫)不能有效促进CPG-AH5株的感染,肠道病变与无诱导因素条件下无显著性提高(2.0±1.15、2.4±1.08,P>0.05);多个诱导因素(鱼粉和球虫)联合诱导可有效促进CPG-AH5株的感染,与无诱导因素和单一诱导因素相比肠道病变显著性提高(3.6±0.52,P<0.001)。结论:鱼粉和球虫联合诱导可显著促进G型产气荚膜梭菌的感染,提高肠道病变。本研究建立了一种鸡坏死性肠炎发病模型,有利于对鸡坏死性肠炎发病机制的研究,为疫苗及药物的后续研发和筛选评价提供了新的技术支撑。

鸡球虫病7价多表位嵌合重组抗原ET seven真核质粒的构建、表达及其初步功能分析

为构建以鸡柔嫩艾美耳球虫EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等入侵相关蛋白分子为抗原基础的多表位嵌合重组抗原ET seven真核表达质粒,同时验证其在DF-1细胞中的表达和通过不同辅助递送方式在鸡体内的表达及其免疫功能。本研究利用生信分析获得7个抗原表位,分别提取柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段虫体总RNA,通过RT-PCR扩增获得EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等7个抗原的表位区域编码基因,构建基因图谱由公司合成以pcDNA3.1(+)为真核表达载体,构建真核表达质粒pcDNA3.1-ET seven;将鉴定阳性、测序正确的质粒pcDNA3.1-ET seven转染至DF-1细胞,利用RT-PCR和Western blot方法检测ET seven重组基因片段在DF-1细胞中的表达;以磷酸钙纳米颗粒作为辅助质粒递送佐剂检测pcDNA3.1-ET seven在鸡体内引起的细胞因子水平变化,间接ELISA检测特异性IgG抗体水平。结果显示:成功构建真核表达质粒pcDNA3.1-ET seven,RT-PCR和Western blot检测到ET seven的特异性表达,质粒通过磷酸钙纳米佐剂免疫鸡体后,检测细胞因子IL-2、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-γ、CD-40均在三次免疫后7 d高水平表达,其中CD-40与IL-6的表达水平最高。pcDNA3.1-ET seven重组质粒结合磷酸钙佐剂肌肉注射二次免疫后7 d间接ELISA检测特异性IgG抗体呈阳性。结果表明,pcDNA3.1-ET seven重组质粒构建成功,在鸡体内有良好的免疫原性,为鸡球虫病的疫苗防控提供新的思路和技术支撑。

非洲猪瘟病毒抗体化学发光检测方法的建立与应用

【目的】建立一种特异性强、敏感度高、操作简捷、高通量的非洲猪瘟病毒(African swine fever,ASFV)抗体化学发光检测方法,用于早期监测ASFV的流行情况。【方法】本研究以羧基磁珠作为固相载体偶联ASFV重组p72蛋白,用适量的牛血清白蛋白(BSA)进行封闭,加入检测样品进行反应,以兔抗猪IgG-AP抗体作为酶标抗体,加入相应底物进行显色,优化各项反应条件,建立ASFV抗体化学发光检测方法,并对该方法的特异性、敏感度、重复性和检出率进行验证。【结果】建立的ASFV抗体化学发光检测方法蛋白与羧基磁珠偶联最适pH为7.0,最佳蛋白偶联浓度为5μg/mL,使用10%BSA溶液封闭效果最佳,反应磁珠终浓度为1.00 mg/mL,酶标二抗最佳工作稀释度为1∶40000。同时该方法反应时间为30 min,血清稀释度为1∶512,敏感度高于商品化ASFV抗体ELISA检测试剂盒,与猪瘟病毒、A型口蹄疫病毒、O型口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒gE、猪伪狂犬病病毒gB抗体阳性标准血清均无交叉反应。重复性试验中,批内变异系数为4.41%~8.70%,批间变异系数为2.43%~8.07%,均<10%。通过检测120份血清样品并与商业化ASFV抗体ELISA检测试剂盒进行对比分析,商业化ELISA试剂盒检出率为96.7%,本研究建立的化学发光检测方法检出率为100%。【结论】本研究建立的ASFV抗体化学发光检测方法可用于ASFV感染后抗体水平检测,为后续试剂盒的开发提供参考。

5株柔嫩艾美耳球虫对4种抗球虫药的抗药性

选择260只19日龄雏鸡,随机分成26组,每组10只,研究柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)南京株、凤阳株、扬州株、宣城株和蒙城株对地克珠利(Diclazuril)、马杜霉素(Maduramicin)、氯羟吡啶(Clopidol)、氯苯胍(Robenidine)的抗药性。每株球虫均设4个感染用药组、1个感染不用药组,另外设1个不感染不用药组。以POAA、RLS、ROP、ACI作为指标,判定5株球虫对4种药物的抗药性。结果表明凤阳株、扬州株和蒙城株分别仅对马杜霉素、氯苯胍、地克珠利敏感,南京株和宣城株对该4种药物均已产生不同程度的抗药性。提示目前在凤阳、扬州和蒙城地区可分别合理地使用马杜霉素、氯苯胍和地克珠利,对其它药物须减少或暂停使用。

不同硼水平对固始鸡胸腺胚后发育的影响

将240只1日龄固始鸡随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组,常规饲养,分别在饮水中添加0、100、200、400 mg·L-1硼.试验期6周,每周每组取鸡10只,扑杀,取胸腺,称重,制作切片并观察.结果显示:Ⅱ组鸡胸腺重(TW)及胸腺/体重(TW/BW)1～3周低于或等于Ⅰ组(对照组),4～6周高于或显著高于对照组(P＜0.05);Ⅲ组鸡TW低于对照组,TW/BW前3周低于对照组,4～6周高于对照组,但差异均不显著;Ⅳ组鸡TW和TW/BW显著(P＜0.05)或极显著低于对照组(P＜0.01).1～2周龄Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组鸡胸腺组织结构可见不同程度的退化现象,并与硼的添加量呈正相关,其中Ⅳ组胸腺组织结构明显萎缩,间质显著增多,实质急剧退化,胸腺细胞急剧减少或空竭,胸腺小体增多、增大,胸腺发育严重不良;3周龄起,Ⅱ、Ⅲ组鸡和Ⅳ组大多数鸡胸腺发育开始恢复,此时硼对胸腺发育的促进作用与添加量呈负相关,其中Ⅱ组的促进作用最为明显.上述结果表明,饮水中添加100 mg·L-1硼对2～6周龄固始鸡的生长发育和胸腺发育具有明显促进作用,而高硼(饮水中硼含量高于200 mg·L-1)对固始鸡的生长发育及胸腺的发育,尤其是胸腺的早期发育,有明显的抑制或毒性作用.

宠物犬蓝氏贾第鞭毛虫和隐孢子虫感染的分子检测

目的了解皖浙两省部分城镇地区宠物犬蓝氏贾第鞭毛虫和隐孢子虫感染情况,及聚集体类型或虫种。方法在安徽多地和浙江杭州共采集315份新鲜宠物犬粪样,分别采用基于蓝氏贾第鞭毛虫谷氨酸脱氢酶(GDH)基因的半巢式PCR和隐孢子虫核糖体小亚基(SSU r RNA)基因的巢式PCR方法对所有粪样进行扩增,并对获得的阳性扩增产物进行测序和生物信息学分析,确定蓝氏贾第鞭毛虫的聚集体和隐孢子虫的虫种类型。结果 315份犬粪样中,蓝氏贾第鞭毛虫和隐孢子虫的阳性率分别为3.2%(10/315)和1.6%(5/315)。幼龄犬(≤12个月)蓝氏贾第鞭毛虫阳性率(17.8%)和隐孢子虫阳性率(11.1%)均显著高于成年犬(0.7%和0)(P<0.05)。雌性犬和雄性犬蓝氏贾第鞭毛虫和隐孢子虫阳性率差异均无统计学意义(P>0.05)。发现蓝氏贾第鞭毛虫两种聚集体类型,即聚集体B(n=6)和聚集体D(n=4)。从5份阳性犬粪中分离的隐孢子虫经巢式PCR SSU r RNA基因检测,均为犬隐孢子虫(Cryptosporidium canis)。结论皖浙两省部分地区宠物犬蓝氏贾第鞭毛虫和犬隐孢子虫的阳性率分别为3.2%和1.6%。发现的蓝氏贾第鞭毛虫聚集体类型为聚集体B和聚集体D。

自由基的生理和病理作用

在正常的生命过程中 ,自由基为维持生命所必需。体内自由基不断产生 ,也不断地被清除 ,两者处于动态平衡之中 ,使之维持在一个正常的生理水平上。自由基在生物体内具有参与吞噬病原体 ,参与前列腺素和凝血酶原的合成、解毒 ,参与体内部分生化反应和胶原蛋白的合成 ,调节细胞增殖与分化 ,参与机体免疫和环核苷酸的生物合成 ,以及生殖和胚胎发育等重要的生理功能。与此同时 ,自由基在机体内损伤蛋白质、核酸和细胞膜 ,导致细胞凋亡 ,并参与许多疾病的发病过程等。

基于重组核衣壳蛋白的猪德尔塔冠状病毒间接ELISA检测方法的建立

目的:建立一种关于猪德尔塔冠状病毒(Porcine Deltacoronavirus, PDCoV)抗体的检测方法。方法:对猪德尔塔冠状病毒的核衣壳蛋白(N)进行原核表达,通过Western Blot、SDS-PAGE等方法,对重组蛋白进行鉴定;在获得正确表达的重组蛋白后,以此为抗原,对ELISA反应条件进行优化,并对其特异性、敏感性、重复性进行测试,最终建立ELISA检测方法,并对临床样品进行检测。结果:优化后的抗原包被浓度为2μg/孔,37℃孵育1 h;1%BSA 37℃封闭1 h;一抗稀释最佳浓度为1∶1 600,孵育时间为1 h;酶标二抗最佳孵育时间为60 min。重组蛋白能与猪德尔塔冠状病毒血清发生特异性反应,所建立的检测方法具有优良的敏感性、特异性、重复性。结论:本研究建立了一种针对猪德尔塔冠状病毒的间接ELISA检测方法,为猪德尔塔冠状病毒的抗体水平检测及疾病的防控提供了一种有效的方法。

安徽省部分地区山羊蓝氏贾第鞭毛虫流行病学调查及基因型分析

为了解安徽省山羊蓝氏贾第鞭毛虫的流行及基因型,本研究对安徽省六安、阜阳、宿州、池州、芜湖、滁州和亳州的506份山羊粪样采用卢戈氏碘液染色镜检法进行鉴定,对鉴定出的蓝氏贾第鞭毛虫阳性粪样,进行基于磷酸丙糖异构酶(TPI)和谷氨酸脱氢酶(GDH)基因的巢式PCR扩增,并对阳性产物进行测序,序列用Clustal X 1.81和Mega 5.05软件进行比对分析。镜检结果显示,共检出32份蓝氏贾第鞭毛虫阳性粪样,总感染率为6.3%。巢式PCR扩增结果显示,32份阳性粪样中,TPI基因扩增阳性23份,GDH基因扩增阳性16份,产物大小分别为530 bp和450 bp。序列分析表明,分离的虫株均为反刍动物特有的聚集体E,但基因亚型存在地区性分布差异,未发现具有人兽共患潜力的A型或B型。

奶牛隐性乳房炎与被毛中Zn、Cu、Mn含量的关系

分别用火焰原子吸收光谱法检测了健康对照组奶牛和 CMT/BMT 法检验为阳性的奶牛的被毛中 Zn、Cu、Mn 的含量,研究奶牛隐性乳房炎与被毛微量元素 Zn、Cu、Mn的关系。试验选择 1 个乳区患隐性乳房炎组(Ⅰ组)、2 个乳区患隐性乳房炎组(Ⅱ组)、3个乳区患隐性乳房炎组(Ⅲ组)、4个乳区患隐性乳房炎组(Ⅳ组)和健康对照组(Ⅴ组)。结果表明,Ⅰ组的Cu、Mn含量与Ⅲ组的差异显著(P<0.05),其他各组间的差异均不显著(P>0.05)。

GC_(02)球虫病疫苗的最佳免疫剂量与免疫日龄的研究

The experiments were carried out to investigate the optimum immune age and immune dosage of GC02 coccidian vaccine.Ninety healthy cross broilers were chosen and randomly divided intoⅠ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ,Ⅵ groups（n=15） to study the immune effect of different immune dosage at the same immune times.Each chicken in Ⅰ-Ⅳ groups were orally inoculated with 4 000,8 000,16 000,20 000 sporulated oocysts of GC02 coccidian vaccine,respectively.Chickens in Ⅴ group were not infected with sporulated oocysts and chickens in Ⅵ group were not inoculated.On the 7th day after the second immunity,Ⅰ-Ⅳgroups were（orally） challenged with 1.0×105 sporulated oocysts for each chicken.On the 8th day after challenging with the sporulated oocysts,all chicken were slaughtered.According to lesion scoring and faces scoring,OPG,ACI,relative growth rate,feed conversion,etc.,the effects of different immune dosage of GC02 coccidian vaccine were evaluated.The results suggested that optimum immunization method was inoculating 8 000 sporulated oocysts per bird two times.One-hundred and eighty healthy chickens were randomly divided into A,B,C,D,E,F,G1,G2,G3 groups（n=20） to study the immune effects of different immune age with the same immune dosage.Chickens in A,B,C groups were immunized with GC02 coccidian vaccine at the different immune age;D,E,F and G1,G2,G3 were positive and negative control groups respectively,the immune and challenge is the same as experiment one.The results concluded that GC02 coccidian vaccine is safe and effectual in preventing coccidiosis,immunize with 8 000 sporalated oocysts per bird at the age of 7 days and 14 days can obtain the ideal effects.

GC_(02)鸡球虫病疫苗免疫效果的观察

试验研究了GC02鸡球虫病疫苗免疫预防鸡球虫病的效果。试验一选择100只肉杂鸡,饲养至21日龄时,随机分为A、B、C、D四组,其中A组免疫肉鸡球虫病疫苗,B组免疫GC02鸡球虫病疫苗,C组为不免疫攻虫组,D组为不免疫不攻虫组,A、B组于21日龄口服免疫球虫苗,A、B、C三组于28日龄时口服接种1×105个孢子化卵囊攻虫,于36日龄捕杀A、B、C、D组全部鸡只,以比较肉鸡球虫病疫苗与GC02鸡球虫病疫苗的预防效果。结果表明两种球虫病疫苗均能有效的抗雏鸡艾美耳球虫感染,且是安全有效的。试验二选择100只肉杂鸡,随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ五组。研究了GC02鸡球虫病疫苗不同免疫次数的保护作用,Ⅰ组于14日龄免疫GC02鸡球虫病疫苗(4000个卵囊),Ⅱ组分别于7日龄(4000个卵囊)、21日龄(8000个卵囊)免疫GC02鸡球虫病疫苗,Ⅲ组分别于7日龄(4000个卵囊)、14日龄(8000个卵囊)、21日龄(12000个卵囊)免疫GC02鸡球虫病疫苗,Ⅳ组为不免疫攻虫组,Ⅴ组为不免疫不攻虫组,于28日龄时,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组均口服接种1×105个孢子化卵囊攻虫,36日龄捕杀全部鸡只,观察GC02鸡球虫病疫苗不同免疫次数的免疫效果。结果表明:2次免疫的效果优于1次免疫和3次免疫,2次免疫能有效的控制球虫病的发生,对雏鸡有明显的促生长作用。

5株柔嫩艾美耳球虫对4种抗球虫药的抗药性(英文)

试验选择260只19日龄雏鸡,随机分成26组,每组10只,研究柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)南京株、凤阳株、扬州株、宣城株和蒙城株对地克珠利(Diclazuril)、马杜霉素(Maduramicin)、氯羟吡啶(Clopidol)、氯苯胍(Robenidine)的抗药性。每株球虫均设4个感染用药组、1个感染不用药组,另外设1个不感染不用药组。以POAA、RLS、ROP、ACI作为指标,判定5株球虫对4种药物的抗药性。结果表明凤阳株、扬州株和蒙城株分别仅对马杜霉素、氯苯胍、地克珠利敏感,南京株和宣城株对该4种药物均已产生不同程度的抗药性。提示目前在凤阳、扬州和蒙城地区可分别合理地使用马杜霉素、氯苯胍和地克珠利,对其它药物须减少或暂停使用。

柔嫩艾美尔球虫感染对鸡的若干生理生化指标的影响

以74只33日龄蛋公鸡作为试验对象,随机分成感染组(n=37)和对照组(n=37).感染组每只口服接种1.5×105个柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊,分别于感染前(0 d)和感染后(2、4、6、8 d)颈静脉采血研究球虫感染对鸡生理生化指标的影响.结果表明柔嫩艾美尔球虫感染后鸡红细胞数、白细胞数、血红蛋白含量、血清中葡萄糖显著减少,血清钾含量显著升高,血清钠、血清钙、氯化物、无机磷都显著降低.血清镁含量也降低,但与对照组相比无差异.

血清4型禽腺病毒Fiber-1蛋白截短表达及多克隆抗体制备

目的:制备血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-1基因截短蛋白多克隆抗体,为FAdV-4病的诊断、检测及致病机制研究奠定基础。方法:对FAdV-4的CH/AHMC/2015分离株Fiber-1基因序列(MG148335.1:30459-31754)进行信号肽、疏水性和抗原决定簇分析,截取具有较高免疫原性的片段,设计合成特异性引物,以CH/AHMC/2015分离株基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得截短Fiber-1(sFiber-1)基因片段,将其连接至原核表达载体pET-32a,验证后转化至大肠杆菌BL21感受态中,诱导表达sFiber-1蛋白。纯化后的蛋白与佐剂乳化后免疫SD大鼠,制备多克隆抗体,并测定多克隆抗体效价。用Western-blot检测抗体免疫原性。结果:成功构建了sFiber-1的原核表达载体,获得FAdV-4的sFiber-1重组蛋白,经SDS-PAGE鉴定,重组sFiber-1蛋白大小约为52 kDa,主要以包涵体形式表达;间接ELISA法测得sFiber-1多克隆抗体效价为1∶2^(13);Western blot结果显示制备的多克隆抗体能特异性识别出重组sFiber-1蛋白。结论:本研究成功表达了FAdV-4的重组sFiber-1蛋白,制备了具有较高免疫活性的sFiber-1多克隆抗体,可为FAdV-4的检测及诊断奠定基础。

表达柔嫩艾美耳球虫HMGB1基因质粒DNA的免疫效果分析

旨在评价表达柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)HMGB1基因质粒DNA免疫对同源株攻虫的免疫保护效果。将EtHMGB1基因插入pcDNA3.1(-)/myc-His A真核表达载体中,并在Hela细胞中进行体外瞬时表达。设计了pcDNA3.1(-)/myc-EtHMGB1免疫组、pcDNA3.1(-)/myc-His A免疫组、重组蛋白质+FCA佐剂免疫组、pcDNA3.1(-)/myc-EtHMGB1+重组蛋白质联合免疫组、FCA佐剂免疫组、未免疫攻虫组和未免疫未攻虫组7个试验组。分别于14和21日龄对鸡进行两次免疫,28日龄时除未免疫未攻虫组外各组用1×104个E.tenella孢子化卵囊攻虫,以平均增重、卵囊产量和病变记分作为免疫保护效果的评价指标。结果显示,成功构建了pcDNA3.1(-)/myc-EtHMGB1重组质粒,转染后该质粒可在Hela细胞中进行瞬时表达。该重组质粒单独免疫、重组蛋白质单独免疫或重组质粒与重组蛋白质联合免疫均对鸡肠道病变改善效果不明显,但可显著提高增重,降低卵囊产量,尤以重组质粒与重组蛋白质联合免疫效果最佳,显示Prime-boost免疫策略可提高该重组质粒的免疫保护效果。上述结果显示HMGB1可作为未来球虫疫苗研制的良好候选抗原之一。

家畜附红细胞体病免疫学诊断方法的研究进展

概述了补体结合试验、荧光抗体技术、间接血凝试验和酶联免疫吸附试验等用于诊断家畜附红细胞体病的血清学方法的建立和应用情况,同时简述了家畜附红细胞体的分子生物学检测技术,这些技术包括DNA探针技术、常规PCR和实时定量PCR。指出了上述各种诊断方法存在的不足,期待这些方法的进一步完善和规范。

日粮中添加半胱胺对肉鸡生产性能的影响

选择144只1日龄肉用仔鸡,随机分成4组,每组36只,适应饲养1周后,分别于其基础日粮中添加0、50、100、150mg/kg半胱胺(CS),并于饲喂添加CS日粮后2、4、6、8周屠宰,研究CS对肉仔鸡生长性能的影响。结果表明(1)在饲料中持续添加CS的前期可影响饲料的适口性。(2)随时间的延长,屠宰率、半净膛率、全净膛率随剂量的加大而升高。(3)在连续添加CS的后期(第6周、第8周)添加50mg/kg的CS组的日增重及料肉比均最好,与对照组相比日增重提高了22.9%、17.8%,料肉比下降了15.7%和3.5%。

半胱胺对肉仔鸡部分生理生化指标的影响

试验选择144只1日龄的AA肉仔鸡随机分为4个组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组）；预饲1周后分别在基础日粮中添加0、50、100、150mg／kg的半胱胺，于添加半胱胺后第2、4和6周龄时颈静脉采血，测定血液中红细胞数、白细胞数、血红蛋白含量，血清中葡萄糖、钙、磷、钾、镁、铜浓度以及血清中碱性磷酸酶（ALP）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）和门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性，研究半胱胺对肉仔鸡部分生理生化指标的影响。结果表明：饲料中添加适量的半胱胺（50—100mg／kg）能提高血液中红细胞数、白细胞数、血红蛋白含量和血清中钾、钙浓度，降低血清中镁、铜浓度，对肉仔鸡血清中磷、血糖浓度影响不明显。添加50—100mg／kg的半胱胺对ALT、AST活性影响不明显；而ALP活性随着半胱胺添加量的增加而升高。说明肉仔鸡饲料中半胱胺的添加量以50—100mg／kg为宜。