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甲氨基阿维菌素苯甲酸盐对宽体金线蛭的急性毒性研究
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作者 李淇 陈鑫 +3 位作者 戴彩姣 王江华 顾泽茂 袁军法 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 2024年第5期826-833,共8页
宽体金线蛭是中药市场上常见药物原料,人工养殖已成为其主要供应渠道,并且是目前我国养殖规模最大的水蛭种类。甲氨基阿维菌素苯甲酸盐(甲维盐)是一种阿维菌素类有机化合物,在水果、蔬菜等种植中应用广泛,在稻田生态系统中也有较广泛的... 宽体金线蛭是中药市场上常见药物原料,人工养殖已成为其主要供应渠道,并且是目前我国养殖规模最大的水蛭种类。甲氨基阿维菌素苯甲酸盐(甲维盐)是一种阿维菌素类有机化合物,在水果、蔬菜等种植中应用广泛,在稻田生态系统中也有较广泛的使用,但其对水蛭的毒性尚未知。本研究通过甲维盐对宽体金线蛭的急性毒性实验,评估其对野生或养殖水蛭的影响。结果表明,甲维盐对宽体金线蛭高毒,96 h LC50为0.192 mg•L^(–1);农药制剂1%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐乳油(EC)对宽体金线蛭为低毒级农药,96 h LC50为19.22 mg•L^(–1)。中毒宽体金线蛭身体肿胀、结节,肠道大量积液;损伤主要集中在肌肉、肠道和肾管部分。甲维盐中毒水蛭肠道中的紧密连接蛋白ZO-1、水通道蛋白AQP2、AQP3、AQP4、AQP5和AQP6的转录水平均显著降低(P<0.05),而白细胞介素IL-16、肿瘤坏死因子TNF-α转录水平均显著上升(P<0.05),提示其对宽体金线蛭肠道的毒性机制包括影响了水蛭的肠道通透性,并诱导肠道炎症的发生。研究结果可为水蛭的资源养护以及健康养殖提供科学依据,在实际生产中使用甲氨基阿维菌素苯甲酸盐类农药时,建议选用低剂量农药制剂、更安全的剂型如微乳剂、于稻田无水时施药,降低用药对自然环境以及水蛭等物种的影响。 展开更多
关键词 甲氨基阿维菌素苯甲酸盐 宽体金线蛭 急性毒性 肠道损伤 炎症反应
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基于Nrf2/HO-1启动子筛选抗水生病毒药物的方法
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作者 王靖雯 吴苗苗 +2 位作者 李莉娟 顾泽茂 袁军法 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期141-152,共12页
为建立基于Nrf2、HO-1启动子活性的抗病毒药物筛选方法,实验以胖头鱥上皮细胞系(FHM)为材料,构建Nrf2、HO-1启动子重组质粒,利用双荧光素酶报告系统检测不同浓度(0、3.1、6.3、12.5、25.0、50.0μg/mL)的白藜芦醇、水飞蓟宾、穿心莲内... 为建立基于Nrf2、HO-1启动子活性的抗病毒药物筛选方法,实验以胖头鱥上皮细胞系(FHM)为材料,构建Nrf2、HO-1启动子重组质粒,利用双荧光素酶报告系统检测不同浓度(0、3.1、6.3、12.5、25.0、50.0μg/mL)的白藜芦醇、水飞蓟宾、穿心莲内酯及姜黄素对启动子活性的影响,并利用鲤春病毒血症病毒(spring viremia of carp virus,SVCV)和蛙虹彩病毒(rana grylio iridovirus,RGV)验证阳性药物的抗病毒效果。结果显示,Nrf2、HO-1启动子序列中存在FOX家族、IRF家族等多种转录因子的结合位点,并分别存在1个和3个与甲基化相关的CpG岛。双荧光素酶报告实验显示,水飞蓟宾、穿心莲内酯及姜黄素可激活Nrf2、HO-1启动子。药物浓度梯度实验显示,6.3μg/mL的姜黄素和穿心莲内酯可显著上调Nrf2和HO-1的启动子活性。病毒感染后的细胞病变效应、病毒的复制及病毒滴度结果均表明姜黄素和穿心莲内酯可抑制SVCV和RGV的感染。综上,本实验建立的pGL3-Nrf2和pGL3-HO-1启动子报告质粒,可用于抗水生病毒药物的筛选,也为Nrf2、HO-1转录调控机制的研究提供了工具。 展开更多
关键词 水生病毒 胖头鱥上皮细胞(FHM) NRF2 HO-1 启动子 抗病毒药物筛选
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抗冻剂对蒸煮小龙虾虾仁冻融后品质的影响 被引量:2
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作者 胡筱波 陈文飞 +3 位作者 顾泽茂 邹圣碧 熊善柏 胡杨 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2023年第1期116-124,151,共10页
目的:提升冷冻蒸煮小龙虾虾仁的冻藏品质.方法:将虾仁浸泡在不同配比复合磷酸盐、海藻糖与山梨糖醇抗冻剂中,测定虾仁冻融后的解冻损失率、水分含量及分布、持水力、盐溶性蛋白、总巯基含量、质构特性并观察微观结构变化以评价各抗冻剂... 目的:提升冷冻蒸煮小龙虾虾仁的冻藏品质.方法:将虾仁浸泡在不同配比复合磷酸盐、海藻糖与山梨糖醇抗冻剂中,测定虾仁冻融后的解冻损失率、水分含量及分布、持水力、盐溶性蛋白、总巯基含量、质构特性并观察微观结构变化以评价各抗冻剂的效果,选择效果较好的抗冻剂作为水平因素设计正交试验优选适宜的抗冻剂配比.结果:1.5%复合磷酸盐、8%海藻糖或10%山梨糖醇具有较好的抗冻效果;复配抗冻剂组(1%复合磷酸盐+6%海藻糖+6%山梨糖醇)具有最佳的抗冻效果,在此条件下解冻损失率为9.97%,显著低于单一抗冻剂组(15.95%,17.44%,16.78%);复配抗冻剂组显著提高了虾仁与水的结合能力,较好地抑制了冻融过程中冰晶对肌肉组织的破坏.结论:复配抗冻剂组(1%复合磷酸盐+6%海藻糖+6%山梨糖醇)可有效提升蒸煮小龙虾虾仁的抗冻能力. 展开更多
关键词 抗冻剂 小龙虾 冻融 复合磷酸盐 海藻糖 山梨糖醇
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不同包装方式对香酥虾球品质的影响 被引量:2
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作者 全爽 顾泽茂 +3 位作者 王陈 胡筱波 熊善柏 胡杨 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2023年第4期296-307,共12页
为研究不同包装方式对香酥虾球(crispy shrimp balls)贮藏过程中品质的影响,以聚乙烯尼龙(PE/PA)作为包装材料,采用普通热封包装、气调包装(100%N_(2)、70%N_(2)+30%CO_(2)、50%N_(2)+50%CO_(2)、30%N_(2)+70%CO_(2)、100%CO_(2))和真... 为研究不同包装方式对香酥虾球(crispy shrimp balls)贮藏过程中品质的影响,以聚乙烯尼龙(PE/PA)作为包装材料,采用普通热封包装、气调包装(100%N_(2)、70%N_(2)+30%CO_(2)、50%N_(2)+50%CO_(2)、30%N_(2)+70%CO_(2)、100%CO_(2))和真空包装7种包装方式,测定不同贮藏时间下香酥虾球的感官评分、脂质、蛋白质和微生物指标的变化,确定香酥虾球的最佳包装方式,同时,采用电子鼻/舌和气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对最佳包装方式下香酥虾球贮藏过程中的风味品质变化进行研究。结果表明,在贮藏过程中,30%N_(2)+70%CO_(2)气调包装组和100%CO_(2)气调包装组的过氧化值、羰基价、丙二醛含量、蛋白质羰基含量和菌落总数均低于其他组,感官评分和蛋白质巯基含量则均高于其他组(P<0.05)。随着CO_(2)浓度增加,香酥虾球的品质劣变速率降低,但100%CO_(2)气调包装组在贮藏30 d后存在塌瘪现象。因此,最佳包装方式为30%N_(2)+70%CO_(2)的气调包装。在最佳包装方式下(30%N_(2)+70%CO_(2)气调包装),香酥虾球贮藏过程中的风味成分变化明显,贮藏30 d后香酥虾球中的醇类、醛类、含氮硫类及含氧类的挥发性种类及含量总量显著(P<0.05)增加。新鲜和贮藏30 d香酥虾球的挥发性风味物质分别有39种和57种,新鲜香酥虾球中甲酸乙烯酯、环丁醇、3,4-癸二烯和3,3-二苯基-5-甲基吡唑含量较高,贮藏30 d后香酥虾球中甲酸乙烯酯、2-异氰基-环己醇(反式)、3-环己基丙醇、(E,E)-2,4-十二烷醛、柠檬醛、2-异氰基-2,4,4-三甲基戊烷和2,3-环氧丁烷含量较高。本研究表明30%N_(2)+70%CO_(2)的气调包装可以有效减缓香酥虾球的品质劣变。 展开更多
关键词 小龙虾 贮藏 包装方式 品质 风味
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黑斑侧褶蛙脑微血管内皮细胞的原代培养及鉴定 被引量:1
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作者 艾单寒 侯家昊 +2 位作者 刘芳园 顾泽茂 胡瑞雪 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期87-94,共8页
为了建立蛙脑微血管内皮细胞原代培养方法,实验以黑斑侧褶蛙脑组织为实验材料,在无菌条件下分离出大脑灰质,利用0.1%Ⅱ型胶原酶和胶原酶-分散酶进行消化,经过Percoll密度梯度离心后,将获取的脑微血管段接种于鼠尾胶包被的培养瓶中,于28... 为了建立蛙脑微血管内皮细胞原代培养方法,实验以黑斑侧褶蛙脑组织为实验材料,在无菌条件下分离出大脑灰质,利用0.1%Ⅱ型胶原酶和胶原酶-分散酶进行消化,经过Percoll密度梯度离心后,将获取的脑微血管段接种于鼠尾胶包被的培养瓶中,于28℃、5%CO_(2)条件下原代培养蛙脑微血管内皮细胞,并通过细胞形态学观察和Ⅷ因子相关抗原免疫荧光对细胞进行鉴定,最后用四唑蓝比色法(MTT)测定细胞的生长状态。结果显示,微血管段在体外培养1 d后开始贴壁生长,并逐渐扩大成团簇状,培养至7 d时,细胞呈“铺石路样”镶嵌式排列,表现为区域性单层生长;Ⅷ因子免疫荧光检测发现胞质呈红色,表达为阳性,阳性细胞率达97%以上;MTT实验显示,细胞在第3~5天时生长速率最快。本研究首次建立了蛙脑微血管内皮细胞的原代培养与鉴定方法,为体外研究蛙类神经性疾病的发病机理奠定基础,也为相关药物的研发和筛选提供了细胞模型。 展开更多
关键词 黑斑侧褶蛙 脑组织 微血管内皮细胞 原代培养
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外膜蛋白OmpA在蛙源米尔伊丽莎白菌致病性中的功能
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作者 刘芳园 胡瑞雪 +3 位作者 余芳 侯家昊 于子润 顾泽茂 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期203-209,共7页
为探究外膜蛋白A(outer membrane protein A,OmpA)对米尔伊丽莎白菌致病作用的影响,以蛙源米尔伊丽莎白菌FL160902为研究对象,通过同源重组法构建OmpA缺失株△ompA,比较缺失株和野生株的生长特性、生物膜形成能力、抗血清杀伤能力、对... 为探究外膜蛋白A(outer membrane protein A,OmpA)对米尔伊丽莎白菌致病作用的影响,以蛙源米尔伊丽莎白菌FL160902为研究对象,通过同源重组法构建OmpA缺失株△ompA,比较缺失株和野生株的生长特性、生物膜形成能力、抗血清杀伤能力、对细胞的黏附能力以及对蛙的致病性差异。结果显示:△ompA的生长能力和抗血清杀伤能力与野生株无显著差异;但与野生株相比,△ompA的生物膜形成能力增加了66%,△ompA对bEnd.3细胞的黏附能力降低了61%;黑斑蛙感染试验显示,△ompA在黑斑蛙血液、脾和脑组织中的载菌量分别为(3.15×10^(8)±0.09×10^(8))、(2.11×10^(8)±0.07×10^(8))和(6.61×10^(8)±0.16×10^(8))copies/g,均显著低于野生株,且△ompA对黑斑蛙的致死率为37%,显著低于野生株的致死率(75%)。上述结果表明,ompA基因缺失不改变米尔伊丽莎白菌的抗血清杀伤能力,但增加了菌株的生物膜形成能力,减弱了菌株的黏附能力,从而降低了该菌对蛙的致病性。 展开更多
关键词 米尔伊丽莎白菌 基因缺失 外膜蛋白A 致病性
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基于I-FABP的鲫肠道通透性检测方法的建立
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作者 王靖雯 邹振江 +2 位作者 李莉娟 顾泽茂 袁军法 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 2023年第5期809-816,共8页
肠道通透性与肠道稳态及个体健康状况直接相关,目前尚缺乏鱼类肠道通透性的定量评价方法及试剂。血清中肠脂肪酸结合蛋白(intestinal fatty acid binding protein,I-FABP)是肠道通透性的重要血清生物学指标,可用于肠道通透性的定量评价... 肠道通透性与肠道稳态及个体健康状况直接相关,目前尚缺乏鱼类肠道通透性的定量评价方法及试剂。血清中肠脂肪酸结合蛋白(intestinal fatty acid binding protein,I-FABP)是肠道通透性的重要血清生物学指标,可用于肠道通透性的定量评价。为建立鲫(Carassius auratus)血清I-FABP的定量检测方法,克隆了鲫I-FABP基因,经原核表达和纯化,并利用重组蛋白分别免疫新西兰白兔(New Zealand white rabbit)及小鼠(Mus musculus),制备了兔源及鼠源多克隆抗体,其效价均为1∶80000。以纯化的兔源多克隆抗体作为包被蛋白,以辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的鼠源多克隆抗体作为酶标抗体,通过优化各反应条件建立了基于鲫I-FABP的双抗体夹心酶联免疫检测方法(double antibody sandwich ELISA,DAS-ELISA)。标准曲线的线性回归方程为y=0.0035x+0.0367,拟合度较高R2为0.9991,临界值为0.0906。批内及批间变异系数分别为1.17%~5.50%及0.16%~4.78%,具有较好的重复性。以该方法对54份样品进行检测,与商业化试剂盒对比,符合率为100%。构建的DAS-ELISA检测方法可用于鲫肠道通透性的定量评估。鉴于鱼类I-FABP的保守性,该方法或可用于其他鱼类肠道通透性的定量评价。 展开更多
关键词 肠脂肪酸结合蛋白 肠道通透性 双抗体夹心ELISA 原核表达 多克隆抗体
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致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌RAA-LFD快检方法的建立
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作者 田飞焱 吴葵 +8 位作者 黄海莉 孟霞 裴建明 刘文珍 张锦波 李小勇 周文华 顾泽茂 徐节华 《中国动物检疫》 CAS 2023年第12期91-97,共7页
为建立一种简单、快速的现场检测致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(VpAHPND)的方法,根据VpAHPND pVA1质粒pirB基因保守序列设计RAA-nfo特异性引物和探针,建立了VpAHPND核酸RAA-LFD检测方法。该方法特异性强,仅对VpAHPND特定毒力株核酸检测... 为建立一种简单、快速的现场检测致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(VpAHPND)的方法,根据VpAHPND pVA1质粒pirB基因保守序列设计RAA-nfo特异性引物和探针,建立了VpAHPND核酸RAA-LFD检测方法。该方法特异性强,仅对VpAHPND特定毒力株核酸检测为阳性,与副溶血弧菌非毒力株、霍乱弧菌、志贺氏菌、沙门氏菌、白斑综合征病毒(WSSV)、传染性皮下和造血器官坏死病病毒(IHHNV)、十足目虹彩病毒(DIV1)、虾肝肠胞虫(EHP)等病原核酸无交叉反应;灵敏度高,最低可检测到3.8×10^(2) CFU/mL的菌体细胞,质粒检测限为1.17×10^(1) copies/μL;检测时间短,37℃恒温反应20 min,以LFD显色5 min后即可完成结果判定;同时该方法具有良好的重复性和可信度,利用该方法和世界动物卫生组织(WOAH)推荐的qPCR方法平行检测58株副溶血弧菌分离株,二者符合率为100%。结果表明,本研究建立的RAA-LFD方法特异、灵敏、反应快速、操作简单且结果肉眼可视,适用于VpAHPND的现场快速检测。 展开更多
关键词 急性肝胰腺坏死病 副溶血弧菌 重组酶介导扩增技术 侧流层析技术
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鲍曼不动杆菌斑点叉尾鮰株的分离与鉴定 被引量:22
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作者 顾泽茂 柳阳 +3 位作者 陈昌福 朱健 谢骏 徐跑 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期489-493,共5页
从湖北省宜昌市清江水库网箱养殖发病的斑点叉尾鮰肝脏分离到1株细菌CH016,该菌可在淡水琼脂平板上生长,单菌落圆形白色,表面圆滑,边缘整齐。经腹腔注射回归感染试验,复制出与自然发病相同的病症,且从人工感染病鱼体内再次分离到与自然... 从湖北省宜昌市清江水库网箱养殖发病的斑点叉尾鮰肝脏分离到1株细菌CH016,该菌可在淡水琼脂平板上生长,单菌落圆形白色,表面圆滑,边缘整齐。经腹腔注射回归感染试验,复制出与自然发病相同的病症,且从人工感染病鱼体内再次分离到与自然发病相同的细菌,表明该菌对斑点叉尾鮰具有致病性。经生理生化鉴定、16S rRNA基因序列及其系统发育分析,结果均显示该菌为鲍曼不动杆菌。 展开更多
关键词 斑点叉尾鮰 鲍曼不动杆菌 生化鉴定 16S RDNA
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锥虫系统发育的研究进展 被引量:3
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作者 顾泽茂 龚小宁 汪建国 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期214-219,共6页
锥虫(trypanosome)是最早在鱼类血液中发现、随后在几乎所有的脊椎动物血液里都有发现的原生动物寄生虫。它主要通过水蛭和吸血昆虫传播,使宿主受到不同程度的危害。为了较全面地了解锥虫系统发育的研究进展,本文综述了国内外有关锥虫... 锥虫(trypanosome)是最早在鱼类血液中发现、随后在几乎所有的脊椎动物血液里都有发现的原生动物寄生虫。它主要通过水蛭和吸血昆虫传播,使宿主受到不同程度的危害。为了较全面地了解锥虫系统发育的研究进展,本文综述了国内外有关锥虫系统发育研究的四个方面的内容锥虫的起源(介绍了锥虫起源于脊椎动物和起源于无脊椎动物的两种不同观点);锥虫的系统发育方式(单系发育);锥虫的进化是否与寄主存在协同性及进化史上分歧时间的差异性;目前研究中存在的问题。 展开更多
关键词 锥虫 系统发育 单系发育 协同性 分歧时间 寄生虫
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水生动物医学领域本科人才培养体系的探索与实践 被引量:2
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作者 顾泽茂 袁军法 +1 位作者 黄丹 柳阳 《安徽农业科学》 CAS 2016年第25期243-244,246,共3页
水产业的快速发展对水生动物医学领域专业人才培养提出了新的要求。该研究从人才培养理念、人才培养规划与定位、人才培养方案3个方面,对华中农业大学在淡水养殖领域水生动物医学领域人才培养的探索与实践进行总结,以期推动水生动物医... 水产业的快速发展对水生动物医学领域专业人才培养提出了新的要求。该研究从人才培养理念、人才培养规划与定位、人才培养方案3个方面,对华中农业大学在淡水养殖领域水生动物医学领域人才培养的探索与实践进行总结,以期推动水生动物医学专业的建设,促进我国水生动物医学教学质量的提高,为水产品从池塘到餐桌的安全保驾护航。 展开更多
关键词 水产养殖 水生动物医学 本科 人才培养
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用Percoll试剂和DEAE-纤维素层析柱分离纯化鳝锥虫 被引量:1
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作者 顾泽茂 汪建国 +1 位作者 章晋勇 龚小宁 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期204-208,共5页
用51%的Percoll分离液和DEAE-纤维素层析柱,从自然感染的黄鳝(Monopterus albusZuiew)中分离鳝锥虫(Trypanosoma monopteriChen et Hsieh,1964)。对含虫血液样品分别以2.1×103r/min、2.5×103r/min、2.9×103r/min、3.3... 用51%的Percoll分离液和DEAE-纤维素层析柱,从自然感染的黄鳝(Monopterus albusZuiew)中分离鳝锥虫(Trypanosoma monopteriChen et Hsieh,1964)。对含虫血液样品分别以2.1×103r/min、2.5×103r/min、2.9×103r/min、3.3×103r/min、3.6×103r/min离心5、10、15、20min,观察红细胞的去除和鳝锥虫存留百分数,结果表明:2.9×103r/min离心15min分离效果最佳。离心分离的混悬液含有锥虫、白细胞、血栓细胞和极少的红细胞,悬混液再经DEAE-纤维素过柱,得到纯净的鳝锥虫。过柱后光学显微镜观察,锥虫形态正常,运动活泼,无血细胞。本方法具有耗时短、回收率高的特点,是把梯度分离和离子交换结合在一起的一种快速有效方法,为鳝锥虫的进一步研究奠定了基础。另外,此方法还可以作为快速、准确检测自然状态下黄鳝是否感染锥虫的手段,为鳝锥虫的流行病学研究提供可靠的数据。 展开更多
关键词 鳝锥虫 Percoll试剂 DEAE-纤维素层析柱
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水霉菌的形态及ITS区分子鉴定 被引量:17
13
作者 可小丽 汪建国 +2 位作者 顾泽茂 李明 龚小宁 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期293-301,共9页
研究利用形态学和分子生物学相结合的方法,对从患病黄颡鱼病灶处分离的水霉菌株(HSY)的分类地位进行了研究。结果显示,该菌在18-23℃均能形成游动孢子囊,但只在20℃才大量释放游动孢子;在15℃培养约3周出现大量的藏卵器,多数顶生,形态与... 研究利用形态学和分子生物学相结合的方法,对从患病黄颡鱼病灶处分离的水霉菌株(HSY)的分类地位进行了研究。结果显示,该菌在18-23℃均能形成游动孢子囊,但只在20℃才大量释放游动孢子;在15℃培养约3周出现大量的藏卵器,多数顶生,形态与Saprolegnia litoralis和Saprolegnia ferax的均非常相似。序列比对分析显示,HSY菌株与S.litoralis、S.bulbosa、S.oliviae、S.longicaulis、S.ferax、S.mixta和S.anomalies的ITS区(包括5.8S rDNA)序列相似性均高于99%。系统发育分析显示,所选的真菌分为3个群,HSY落于第一个群,MP树显示HSY菌株与S.litoralis、S.bulbosa、S.oliviae、S.longicaulis、S.ferax以及S.mixta枝系均互相平行,而NJ树显示其与S.ferax和S.mixta更近。综合形态学、ITS区序列及系统发育分析,将HSY菌株暂定为多子水霉(Saprolegnia ferax)。 展开更多
关键词 卵菌纲 水霉 分类 ITSrDNA 系统发育
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金鱼鲤疱疹病毒Ⅱ型的分子诊断 被引量:26
14
作者 李莉娟 罗杨志 +2 位作者 刘学芹 顾泽茂 袁军法 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期92-96,共5页
针对国内市场上流通的金鱼,开展CyHV-2的流行病学调查,并比较CyHV-2不同分离株的分子特征。结果显示:无明显临床症状的金鱼带毒率较高(13.89%),表明我国已有CyHV-2的分布。分子生物学研究显示,我国金鱼和异育银鲫来源的CyHV-2编码的解... 针对国内市场上流通的金鱼,开展CyHV-2的流行病学调查,并比较CyHV-2不同分离株的分子特征。结果显示:无明显临床症状的金鱼带毒率较高(13.89%),表明我国已有CyHV-2的分布。分子生物学研究显示,我国金鱼和异育银鲫来源的CyHV-2编码的解旋酶基因部分序列一致,表明异育银鲫来源的CyHV-2和金鱼来源的CyHV-2极可能为同一种病毒。同日本分离株(H.Fukuda)比较,我国金鱼来源的CyHV-2编码的DNA聚合酶基因片段序列同该毒株完全一致,但两者编码的衣壳体间三联蛋白和解旋酶各有1~2个氨基酸的差异,表明我国分布的CyHV-2同H.Fukuda毒株高度相似,但存在一定的差异。 展开更多
关键词 鲤疱疹病毒 锦鲤疱疹病毒 流行病学 金鱼
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水霉菌总DNA提取方法研究 被引量:9
15
作者 可小丽 汪建国 +2 位作者 顾泽茂 李明 龚小宁 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期68-73,共6页
本实验采用EP管反复冻融和研磨的破壁方式,利用溶菌酶法、CTAB法、改良CTAB法、尿素法、十二烷基硫酸钠(SDS)法等5种方法,分别对5种鱼类致病性水霉菌(寄生水霉、多子水霉、异株水霉及两未定种)的基因组DNA进行提取,并采用紫外分光光度计... 本实验采用EP管反复冻融和研磨的破壁方式,利用溶菌酶法、CTAB法、改良CTAB法、尿素法、十二烷基硫酸钠(SDS)法等5种方法,分别对5种鱼类致病性水霉菌(寄生水霉、多子水霉、异株水霉及两未定种)的基因组DNA进行提取,并采用紫外分光光度计和ITS区基因(包括5.8SrDNA)PCR扩增对DNA进行了评价。紫外分光光度计检测结果表明,5种方法均可提取到水霉菌DNA,其中改良CTAB法提取的5种水霉菌的DNA产量和质量最高,A260/A280在1.79—1.82之间,浓度为45μg/mL;PCR检测结果表明,只有改良CTAB法提取的DNA全部扩增到明亮、整齐、无拖尾的特异性条带,其他几种方法均存在暗带或无带现象。因此,改良CTAB法可以作为水霉菌DNA提取以开展分子生物学研究的首选方法。 展开更多
关键词 水霉菌 DNA提取 溶菌酶 十六烷基三甲基溴化铵(CTAB) 尿素 十二烷基硫酸钠(SDS)
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皮质醇对黄颡鱼头肾巨噬细胞呼吸爆发活动的影响 被引量:9
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作者 刘小玲 葛海燕 +2 位作者 田珍 顾泽茂 雷曼红 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期749-754,共6页
用Percoll连续密度梯度离心法分离黄颡鱼头肾巨噬细胞,经含0.1%牛血清的L-15培养液中培养,在光镜和电镜下观察其形态、超微结构和吞噬作用;采用硝基四氮唑蓝(NBT)与多孔酶标仪检测细胞在佛波豆蔻酸乙酯(PMA)刺激下产生的呼吸爆发,... 用Percoll连续密度梯度离心法分离黄颡鱼头肾巨噬细胞,经含0.1%牛血清的L-15培养液中培养,在光镜和电镜下观察其形态、超微结构和吞噬作用;采用硝基四氮唑蓝(NBT)与多孔酶标仪检测细胞在佛波豆蔻酸乙酯(PMA)刺激下产生的呼吸爆发,并观察外源皮质醇对黄颡鱼体内外头肾巨噬细胞呼吸爆发活动的影响。结果表明:每尾黄颡鱼可分离出1.2-1.6 mL浓度为1×10^7cells/mL的高纯度头肾巨噬细胞;培养3-18 h后,贴壁纯化的头肾巨噬细胞达到95%-98%;分离培养的头肾巨噬细胞具有巨噬细胞的形态结构特征,对福尔马林灭活的金黄色葡萄球菌(F-SA)的吞噬率达95%以上。PMA刺激分离的头肾巨噬细胞产生显著的呼吸爆发活动。在较高浓度和较长作用时间情况下,外源皮质醇对黄颡鱼体内外头肾巨噬细胞的呼吸爆发均产生抑制作用。 展开更多
关键词 黄颡鱼 巨噬细胞 分离培养 吞噬作用 外源皮质醇 呼吸爆发
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氰戊菊酯对鲤科鱼类致突变效应的研究 被引量:8
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作者 陈秀荣 罗宇良 +2 位作者 顾泽茂 闫海燕 石焱 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2010年第1期21-25,共5页
通过统计草鱼(C tenopharyngodon idellus)外周血红细胞的微核率和斑马鱼(Brachydanio rerio)胚胎致畸率,研究了氰戊菊酯对鱼类的致突变效应。结果显示:氰戊菊酯对1龄草鱼的96 h半致死浓度(LC50)为60.62μg/L;1.2μg/L以上的氰戊菊酯能... 通过统计草鱼(C tenopharyngodon idellus)外周血红细胞的微核率和斑马鱼(Brachydanio rerio)胚胎致畸率,研究了氰戊菊酯对鱼类的致突变效应。结果显示:氰戊菊酯对1龄草鱼的96 h半致死浓度(LC50)为60.62μg/L;1.2μg/L以上的氰戊菊酯能显著提高草鱼的微核率、核异常率以及总核异常率,三者的变化趋势均是随着暴露时间的延长先升高,达到峰值后再缓慢下降;微核率与空白对照组比较呈显著性差异。表明氰戊菊酯对草鱼染色体畸变有明显影响。在2~32μg/L的氰戊菊酯中,随着浓度的升高,斑马鱼的胚胎死亡率升高、出膜率降低、80%胚胎出膜时间延长,仔鱼畸形率升高,说明氰戊菊酯对斑马鱼胚胎及仔鱼有致畸作用。 展开更多
关键词 氰戊菊酯 草鱼(Ctenopharyngodon idellus) 斑马鱼(Brachydanio rerio) 微核试验 胚胎发育毒性
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多子小瓜虫的形态发生及其寄生导致翘嘴鲌鳃组织病理变化 被引量:9
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作者 王哲 刘春雷 +1 位作者 顾泽茂 翟艳花 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期935-941,共7页
为阐明小瓜虫的形态发生及其对鳃组织的危害过程,本文开展了多子小瓜虫的光镜观察和翘嘴鲌鳃组织病理切片方面的研究。光镜形态研究发现小瓜虫运动时呈球形,直径500—800μm;前端具有耳廓状胞口和内陷的袋状胞咽;环境温度为18℃时,滋养... 为阐明小瓜虫的形态发生及其对鳃组织的危害过程,本文开展了多子小瓜虫的光镜观察和翘嘴鲌鳃组织病理切片方面的研究。光镜形态研究发现小瓜虫运动时呈球形,直径500—800μm;前端具有耳廓状胞口和内陷的袋状胞咽;环境温度为18℃时,滋养体经1h左右发育成包囊,体表形成一层透明胶膜,并以虫体中央的分裂沟为界进行二分裂;子代虫体从8细胞期进入16细胞期时,包囊内部形成内胞膜将子代虫体等分为两个集团。组织切片结果显示虫体呈卵圆形,挤压了周围的包裹细胞,导致组织变形;鳃小片黏连,鳃丝上皮细胞受到破坏,严重区域鳃丝结构被完全破坏。本研究解析了小瓜虫的形态发生与发育过程以及对宿主危害的组织病理结构与机制,为揭示小瓜虫的侵染、发育和成熟规律奠定了理论基础,并为小瓜虫病害的有效防控提供理论资料。 展开更多
关键词 多子小瓜虫 滋养体 形态发生 翘嘴鲌 组织病理
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药敏实验筛选药物在鱼类细菌性病害防治中的作用
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作者 顾泽茂 《当代水产》 2012年第9期68-68,共1页
抗生素是人类20世纪最伟大的发现,在细菌感染的治疗中取得了重大疗效,但随着抗生素的滥用和乱用,不仅导致了水产品的质量安全、环境污染,还直接加速了病原菌耐药性的形成,导致养殖生产中形成无药可用的局面。在鱼类细菌性病害的防治中,... 抗生素是人类20世纪最伟大的发现,在细菌感染的治疗中取得了重大疗效,但随着抗生素的滥用和乱用,不仅导致了水产品的质量安全、环境污染,还直接加速了病原菌耐药性的形成,导致养殖生产中形成无药可用的局面。在鱼类细菌性病害的防治中,先针对病症,分离病原菌,通过药敏实验筛选对病原菌敏感的抗菌药物,不仅可以达到"对症用药"的效果,还能减少盲目用药带来的病原菌耐药性及所投入的药物成本。加州鲈又名大口黑鲈,原产美国加利福尼亚州密西西比河水系,现为我国养殖中较为高端的淡水水产品。现经驯养,能食配合饲料,在适宜养殖环境下,摄食极为旺盛。在高密度精养条件下,病害问题比较严重,尤其细菌性病害。2012年5月,某水库网箱养殖的加州鲈死亡严重,主要症状为:早期在尾柄、背鳍基部等部位出现圆形褪色斑点,褪色区域表皮粘液层薄,逐渐出现腐烂,并逐渐扩大褪色,后期出现鳞片脱落,表皮腐烂,部分肛门有红肿现象出现,轻压有少许腹水,解剖后内脏器官尚好。 展开更多
关键词 细菌性病害 病害防治 抗菌药物 药敏实验 鱼类 筛选 淡水水产品 加利福尼亚州
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感染累枝虫对黄颡鱼血液生化指标的影响 被引量:4
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作者 程辉辉 Kommaly Onxayvieng +5 位作者 王哲 顾泽茂 李大鹏 亓成龙 马玲巧 陈漪涛 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2015年第4期96-99,共4页
为探究感染累枝虫(Epistylis sp.)的黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)病愈过程中血液生化指标的变化规律,测定了患病鱼和经药物治疗痊愈及健康的黄颡鱼的血清皮质醇、葡萄糖、乳酸(LD)含量以及碱性磷酸酶(AKP)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷草... 为探究感染累枝虫(Epistylis sp.)的黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)病愈过程中血液生化指标的变化规律,测定了患病鱼和经药物治疗痊愈及健康的黄颡鱼的血清皮质醇、葡萄糖、乳酸(LD)含量以及碱性磷酸酶(AKP)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)的活性。结果显示,患病组黄颡鱼血清皮质醇、血糖含量和AST活性均显著高于痊愈组(P<0.05),血清ALT活性与痊愈组无显著差异(P>0.05)。与患病组相比,痊愈组黄颡鱼血清LD含量,LDH和ALP活性均显著升高(P<0.05)。与健康组相比,痊愈黄颡鱼血清皮质醇含量和ALT活性无显著差异(P>0.05),而葡萄糖、LD含量,LDH、AKP和AST活性则差异显著(P<0.05)。结果表明,累枝虫的寄生引起了黄颡鱼显著的应激反应,使鱼体非特异性免疫能力下降;经治疗痊愈后的黄颡鱼的非特异性免疫力可恢复正常,鱼体应激反应消失并表现出正常的游泳行为。 展开更多
关键词 黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco) 寄生虫 应激 非特异性免疫
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