酶法测定糖化血清白蛋白的多中心临床研究

目的糖化血清白蛋白(GA)是反映近期血糖控制总体水平的血糖对应指标,采用酶法测定上海3所三级甲等医院糖尿病患者的GA水平,观察其在中国上海糖尿病患者群中的临床意义。方法分别在3所医院随机抽取142例2型糖尿病患者,测定空腹血糖(FPG)、餐后2h血糖(2hPG)、糖化血红蛋白(HbA_1c)、GA等。第1个月内每2周强化治疗1次,以后每个月强化治疗1次,至3个月。结果所有患者强化治疗结束后的各项血糖指标较入组前明显改善(P＜0．01)。GA与FPG或2hPG的相关系数(r=0．598和O．585)均高于HbA_1c (0．574和0．555),均呈显著正相关(P＜0．01)。所有受试者中,GA与HbA_1c呈显著正相关(r=0．777,P＜0．01)；而在初诊患者中相关性更好(r=0．835,P＜0．01)。结论GA是一个可反映血糖近期变化的优良且检测方便的指标,采用酶法测定的GA与各项血糖指标及HbA_1c有较好的相关性,在初次诊断的糖尿病患者中更为显著。

肠道菌群与代谢疾病

肠道菌群作为与人体共生的一个重要生态系统,长期以来与宿主共演化、共发育,桥接外界环境,与宿主各脏器发生互作,进而参与宿主代谢稳态调控。十几年来,已有多项研究支持肠道菌群失调通过各种与宿主互作的机制可能参与宿主多种疾病,尤其是肥胖、2型糖尿病等慢性代谢性疾病的发生与发展,并且肠道菌群在代谢性疾病的手术、药物等多种治疗方式中发挥重要作用。目前亦有多种有关开发靶向肠道菌群的代谢性疾病治疗的研究。文章对肠道菌群与代谢性疾病关系及相关机制、代谢疾病治疗中菌群的作用、肠道菌群相关治疗手段等方面的研究进展加以总结,以期为将来开发靶向肠道菌群代谢性疾病新型诊疗策略提供参考和思路。

原发性色素沉着结节性肾上腺皮质病

原发性色素沉着结节性肾上腺皮质病(primary pigmented nodular adrenocortical disease,PPNAD)是一种少见的促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)非依赖性库欣综合征,占所有库欣综合征的0.6%~1.9%。PPNAD由Chute等[1]于1949年首先报道,是儿童、青少年ACTH非依赖的库欣综合征中最常见的确诊病因,其也是卡尼综合征(Carney complex,CNC)[2]较主要的成分之一,大约60%以上PPNAD的患者可诊断为CNC[3]。

刍议现代饭店绿色管理

经济高速发展的背后环境遭受严重破坏,为了人类的生存和发展,饭店必须实行绿色管理,节约资源,保护环境,实现经济、生态、社会的统一。

胰淀素对大鼠胰岛素和胰高血糖素分泌的影响

目的 研究胰淀素对大鼠胰岛素和胰高血糖素分泌的影响。方法 应用胶原酶消化和不连续密度梯度离心技术建立离体大鼠胰岛模型，研究不同浓度胰淀素对胰岛素和胰高血糖素分泌的影响。结果 不同浓度的葡萄糖增加胰岛素的分泌，抑制胰高血糖素的分泌，并都呈线性相关。葡萄糖浓度为0、5．6、11．2mmol／L时，孵育1h，胰淀素（10^-10～10^-5mol／L）显著抑制胰高血糖素的分泌（P〈0．05），且胰高血糖素的分泌与胰淀素浓度呈负相关（P〈0．01）。葡萄糖浓度为5．6mmol／L时，不同浓度的胰淀素增加胰岛素分泌，而且两者呈正相关（P〈0．05）；但葡萄糖浓度为11．2和16．7mmol／L时，10^-5mol／L胰淀素对胰岛素的分泌有明显抑制作用（P〈0．05）。结论 胰淀素对胰高血糖素的分泌有直接抑制作用；在葡萄糖浓度为5．6mmol／L时，胰淀素能增加胰岛素分泌，抑制胰高血糖素分泌；高糖时，高浓度的胰淀素抑制胰岛素分泌。

胰腺发育相关maf基因在胰腺导管和胰岛的表达

为探讨胰岛功能和发育相关maf基因在胰腺导管上皮中的表达情况,对新鲜小鼠胰腺组织切片进行显微切割,分离纯化胰腺组织中的导管和胰岛,以及外分泌腺组织细胞作为对照,利用荧光实时定量PCR的方法完成对目的基因的相对定量.结果显示,mafamRNA,mafbmRNA水平在胰岛及导管中非常接近,无统计学差异.而c-maf在导管的表达高于胰岛(P<0.05),外分泌腺则无上述基因的表达.胰腺导管中mafa,mafb,cmaf均有表达,肯定了导管上皮细胞向内分泌细胞分化的潜能,而c-maf在导管中的表达高于胰岛,提示导管上皮c-maf的下调可能有助于导管上皮细胞向内分泌细胞的分化成熟.

原代分离的大鼠胰岛细胞对葡萄糖刺激胰岛素分泌的反应性研究

目的:研究原代分离的大鼠胰岛对葡萄糖刺激的胰岛素分泌反应性。方法:胶原酶原位灌注法分离大鼠胰岛,在含0.5%BSA、5.5或11.1mmol/L葡萄糖的培养基中培养不同时间后,用含0.2%BSA、3.3mmol/L葡萄糖的KRB缓冲液预培养胰岛30min,分别换入含不同浓度葡萄糖KRB缓冲液,培养1h,收集上清,RIA法测定胰岛素浓度。结果:大鼠胰岛过夜培养后,在基础(3.3mmol/L)和高浓度(16.7mmol/L)葡萄糖条件下胰岛素分泌量分别为(12.4±3.2)和(45.2±4.2)μU/ml/10islets/h;5.5mmol/L和11.1mmol/L葡萄糖浓度下培养12h和20h后,胰岛对葡萄糖的反应性均明显高于16.7mmol/L和22.5mmol/L葡萄糖组(P<0.05);体外培养5d后,对高糖的反应性为(4.28±0.67)倍。结论:原代分离的大鼠胰岛可在(1～5)d内保持对葡萄糖的反应性。

大鼠BTCe对体外培养胰岛保护作用及对糖尿病大鼠降糖作用的研究

β细胞素(betacellulin,BTC)是目前较受关注的胰岛再生因子,但其促胰腺、胰岛再生的机制不清.BTCe是betacellulin的功能片段,促细胞增殖能力与BTC相同.实验通过原核表达方法获得BTCe蛋白,MTT法证实其促3T3-L1细胞增殖能力.将BTC或BTCe作用于原代培养的大鼠胰岛,观察其对胰岛分泌的急性及长期影响作用,实时定量PCR及免疫荧光检测胰岛内关键基因的表达.将质粒pcDNA3.1-BTCe注射入链脲霉素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肌肉中,观察对大鼠血糖的影响作用.加入BTC或BTCe可明显提高体外培养大鼠胰岛的GSIS水平,但实时定量PCR及免疫荧光显示胰岛内4种关键基因的表达并无明显变化;pcDNA3.1-BTCe转染糖尿病大鼠15～20天后血糖出现下降,糖耐量明显改善;免疫荧光显示:胰腺内有大量PDX-1+的导管细胞及胰岛素阳性细胞出现.推测BTC及BTCe对体外长期培养的大鼠胰岛具有一定的保护作用,可能通过促进胰腺内PDX-1+的导管细胞及胰岛素阳性细胞的增殖、诱导对STZ诱导的糖尿病大鼠的高血糖具有一定缓解作用.

cDNA芯片研发及其在肥胖患者脂肪基因差异表达研究中的应用

为了加快基因功能的研究 ,利用已有的来源于不同组织的cDNA克隆 ,并通过交换和购买补充了低丰度和染色体覆盖不完全的部分cDNA ,研制开发出具有相当代表性、覆盖较完全的高密度cDNA表达型基因芯片 ,每张芯片上含有 384个质控DNA和 12 6 30个cDNA探针 ,其中包括 12 5 0 8个Unigene和 12 2个表达序列标签 (EST) .利用这些芯片 ,对肥胖患者及正常人内脏脂肪组织基因表达谱进行了初步研究 ,并发现在肥胖患者内脏脂肪组织差异表达的基因 ,其中上调的有与凋亡相关的基因、与免疫有关的基因以及与能量代谢有关的基因等 ,而下调的主要是与脂肪酸及胆固醇合成有关的基因 。

单纯餐后高血糖型糖尿病的胰岛素分泌与敏感性

目的评估单纯餐后高血糖型糖尿病(IPH)的胰岛素分泌与敏感性的特征,并进一步探讨进展为IPH的相关因素。方法850例受试者按75 g葡萄糖耐量试验分为:糖耐量正常(NGT)557例;单纯糖耐量异常(iIGT)146例;IPH 147例。比较各组的代谢指标及胰岛素分泌和胰岛素敏感性指数。结果早期相胰岛素分泌和胰岛素敏感性指数从NGT→iIGT→IPH逐渐降低,校正年龄和BM I后差异有统计学意义(P<0.05)。对iIGT和IPH患者作线性回归分析显示早期相胰岛素分泌和胰岛素敏感性指数与2hBG密切相关。结论初发的IPH有显著的早期相胰岛素分泌缺陷和胰岛素敏感性降低。β细胞胰岛素分泌缺陷和胰岛素抵抗均是从NGT→iIGT→IPH的进展过程中的决定因素。

基线脂代谢谱特征对降糖药物干预再发心血管事件影响的预测研究

目的·探讨基线脂代谢谱与降糖药物格列吡嗪和二甲双胍干预后心血管结局的关系,寻找能够预测格列吡嗪和二甲双胍长期心血管效应的脂质组分。方法·选取116例分别接受格列吡嗪(56例)和二甲双胍(60例)治疗3年的2型糖尿病(T2DM)合并冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)患者,运用液相色谱-四级杆飞行时间质谱联用技术(LC-QTOF/MS)测定基线血清中的119种脂质组分。随访所有患者心血管复合终点(包括心血管死亡、全因死亡、非致命性心肌梗死、非致命性脑卒中及冠脉血运重建)的发生情况。通过Logistic回归分析脂质组分与患者心血管复合终点的关系。采用连续净重新分类指数(cf NRI)和整体鉴别指数(IDI)评价基线脂质组分是否有助于提高对再发心血管事件的预测能力。结果·除利尿剂使用率和PC(O-34:2)及SM(d18:0-24:0)水平外,2组间基线药物分布及临床特征和生化指标的差异均无统计学意义。Logistic回归分析结果显示:基线ChE(20:4)是格列吡嗪组患者再发心血管事件的保护性因素(OR=0.87,P=0.039);ChE(20:4)显著提高了心血管复合终点的cf NRI和IDI,分别为69%和0.07(P=0.011,P=0.028)。基线SM(d18:1-22:0)是二甲双胍组患者和全部受试者再发心血管事件的危险因素(OR=1.65,P=0.039;OR=1.64,P=0.014);SM(d18:1-22:0)显著提高了二甲双胍组和全部受试者的心血管复合终点的cf NRI,分别为74%和55%(P=0.012,P=0.005)。结论·在由LC-QTOF/MS方法测得的119种脂质组分中,基线ChE(20:4)和SM(d18:1-22:0)可分别为T2DM合并CHD患者接受格列吡嗪和二甲双胍长期治疗后出现心血管复合终点的保护性和危险因素,且均有助于提高预测再发心血管事件风险的准确性。

大鼠BTCe蛋白原核表达及功能鉴定

目的原核表达获得大量具有生物活性的大鼠BTCe蛋白。方法RT-PCR法从大鼠肾脏中扩增出150bp BTCe片段,插入原核表达载体pGEX-4T-2,构建质粒pGEX-BTCe。转化BL-21菌,IPTG低温诱导表达融合蛋白,亲和层析法纯化获得融合蛋白,凝血酶酶切后获得目的蛋白,经SDS-PAGE、Western blot及质谱鉴定。以0.5nmol/L BTCe作用于3T3-L1细胞连续培养4d,MTT法检测其促增殖能力。结果融合蛋白以水溶性形式分泌于大肠杆菌BL-21胞浆中。酶切后的目的蛋白经质谱证实其与BTCe蛋白氨基酸序列相符;作用于3T3-L1细胞可明显促进其增殖。结论大鼠BTCe蛋白在pGEX-4T-2原核表达载体可获得高效表达,所纯化蛋白具有促进3T3-L1细胞体外增殖的作用。

长期体外培养大鼠胰岛的动态研究

目的观察长期体外培养大鼠胰岛在分泌功能、基因表达及免疫荧光组织化学染色法的动态变化。方法采用胶原酶灌注消化和nextran密度梯度离心分离、纯化获得大鼠胰岛,连续培养20 d,定期检测葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS);实时聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光组织化学染色法检测胰高糖素(Glu)、胰岛素、胰腺十二指肠同源盒基因(PDX)-1、葡萄糖转运蛋白(Glut)-2基因mRNA及蛋白水平的表达。结果连续培养胰岛的GSIS水平持续下降;但RT-PCR及免疫荧光显示随培养时间延长,胰岛内关键基因表达并未见明显减弱。结论长期体外培养大鼠胰岛的胰岛素分泌功能持续下降,并非由胰岛素含量减少所致,可能存在更深层次的原因。

谷氨酰胺抑制MIN6细胞AMPK活性并促进其胰岛素分泌

目的：观察谷氨酰胺对MIN6细胞胰岛素分泌和AMPK磷酸化水平的影响,以探讨谷氨酰胺影响胰岛素分泌的可能机理.方法：将MIN6细胞接种于24孔或6孔细胞培养板,实验前用含0.2%BSA和2.8mmol/L葡萄糖KRB预培养30min,分别换入含不同浓度葡萄糖和谷氨酰胺的KRB缓冲液,培养1h,收集上清,待测胰岛素;抽提蛋白,检测蛋白磷酸化水平.结果：葡萄糖在（2.8～22.5）mmol/L浓度下能剂量依赖性地降低AMPK蛋白磷酸化,抑制其活性,胰岛素分泌和AMPK活性呈负相关.10mmol/L谷氨酰胺孵育MIN6细胞1h可降低AMPK蛋白磷酸化,胰岛素分泌增加35%.结论：抑制AMPK活性可以促进胰岛素分泌,谷氨酰胺可能通过抑制AMPK活性促进胰岛素分泌.

胆汁酸的代谢稳态调控作用综述

胆汁酸是肝脏中胆固醇降解的主要产物,主要功能是促进肠道脂质吸收和运输。人体各组织器官中广泛分布着不同的胆汁酸受体,主要包括法尼醇X受体和G蛋白偶联受体。这2种受体因特异表达的脏器所感应胆汁酸成分及细胞内激发下游信号的不同,各自介导了胆汁酸的多种生物学功能,包括胆汁酸自身的合成和运输、免疫调控以及糖脂代谢。研究发现,胆汁酸池的组分及容量受宿主和肠道菌群的双重影响。因此,胆汁酸信号可能是宿主和肠道共生菌群相互"对话"的重要途径,协调机体代谢稳态和肠道菌群生态平衡。文章对胆汁酸调节领域的研究进展和胆汁酸信号通路维持代谢稳态的相关机制进行综述。

益生菌改善2型糖尿病的相关机制

肠道内存在着数以万计的微生物群,这些微生物的平衡对维持宿主稳定的肠道内环境和正常的机体代谢至关重要。一旦肠道菌群结构失调,各种代谢类疾病便随之而来。近年来,肠道菌群与代谢性疾病特别是2型糖尿病的相关性研究,已成为国际科学研究的热点。益生菌作为一类调节宿主肠道微生态平衡的活性微生物,可通过改变肠道菌群及其代谢产物进而改善机体能量代谢、减轻低水平慢性炎症和氧化应激反应。益生菌的应用已逐渐成为预防和控制2型糖尿病的常用方法。该文概述了益生菌的摄入对宿主肠道菌群的影响和改善2型糖尿病的相关机制的研究进展,以期为益生菌的临床应用提供理论参考。

5-杂氮-2’-脱氧胞苷对人胃癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用

目的研究5-氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-CdR)对人正常上皮特异-1基因(NES1)及人胃癌裸鼠移植瘤的作用,探讨其抗肿瘤效应及可能机制,寻求胃癌治疗的新途径。方法建立人胃癌移植瘤裸鼠模型,用5-aza-CdR处理裸鼠,观察移植瘤生长情况,并用MSP及免疫组织化学技术检测NES1基因的甲基化状态及蛋白表达情况。结果5-aza-CdR对人胃癌裸鼠移植瘤的生长有明显的抑制作用,用药组与对照组相比,其抑瘤率为57.44%,移植瘤体积有显著差异(P<0.01);5-aza-CdR作用后,可使NES1基因exon3去甲基化,且能使NES1蛋白表达增加。结论5-aza-CdR对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制作用可能是因为它能使因甲基化而失活的抑癌基因NES1再转录,并诱导该基因的表达,从而抑制肿瘤细胞的生长和增殖。

一例家族性Carney综合征临床及分子生物学研究

目的 对原发性色素性结节样肾上腺病 (primarypigmentednodularadernaldisease,PPNAD)所致的库欣综合征患者进行家系调查及分子生物学研究。方法 患者入院后例行病史询问及各项相关检查。采集患者及其家系成员共 8份全血DNA样本。对PRKAR1A基因各外显子PCR扩增 ,ABI 370 0测序。手术切除患者右侧肾上腺 ,部分液氮保存以备抽提RNA/DNA ,部分送病理。结果 患者临床表现为不典型库欣综合征 ,其父有心脏黏液瘤病史。患者地塞米松抑制试验结果显示皮质醇不受抑制 ,影像学检查发现肾上腺结节样增生。手术切除肾上腺组织呈现色素结节样病变 ,结合病理所见为PPNAD。测序发现患者及其父亲的PRKAR1A基因有一个新的杂合突变———S14 7N。结论 先证者及其父因分别患有PPNAD及心房黏液瘤并共同携带PRKAR1A的基因突变 ,最终共同确诊为家族性Carney综合征。