不同品牌ELISA试剂盒检测细胞培养上清液中IL-8对比研究

目的 对比研究2种不同品牌ELISA试剂盒检测细胞培养上清液中人白细胞介素-8(IL-8)水平情况。方法 不同浓度聚肌胞苷酸(Poly I:C)刺激A549细胞10、24 h,收集细胞上清液,共获得40份样本,分为1~10组,每组4份。采用2种ELISA试剂盒(试剂盒A、试剂盒B)检测细胞培养上清液中IL-8水平,对比2个试剂盒检测得到的组间数据或同组数据的一致性或差异性。结果 2种试剂盒拟合曲线中相关系数值分别为:0.999 600、0.999 602,检测标准品结果相关性良好。试剂盒B检测样品1、2组中IL-8水平比较,差异有统计学意义(P<0.01),但试剂盒A检测样品1、2组中IL-8水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);2种试剂盒检测样品8、9组及样品9、10组中IL-8水平比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。仅试剂盒B检测样品1、5组中IL-8水平明显低于试剂盒A,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 不同品牌ELISA试剂盒均可用于检测IL-8水平,但检测结果仍在一定程度上存在差异。为避免实验误差,研究中应尽量选择同一个厂家生产的同品牌试剂盒。

丹参酮ⅡA磺酸钠体外对呼吸道合胞病毒复制的影响及机制

目的研究丹参酮ⅡA磺酸钠(sodium tanshinoneⅡA sulfonate,STS)体外对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)复制的影响及其机制。方法用CCK8法筛选对A549细胞不具细胞毒性的STS质量浓度,将RSV接种于A549细胞,2 h后加入STS,观察感染48 h后细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),比较细胞培养上清中的病毒滴度。采用Vero细胞建立RSV感染模型,选取最佳效应质量浓度的STS处理后,观察CPE及测定上清中的病毒滴度。进一步在RSV感染A549细胞后的不同时间点给予STS处理及STS作用不同时间后去除STS,培养48 h后测定上清中病毒滴度。结果STS质量浓度<50.0μg/mL时,细胞生长不受影响,但当STS质量浓度升至100.0μg/mL时,A549细胞存活率明显下降。在RSV感染的A549细胞模型中,加入12.5、25.0、50.0μg/mL的STS处理48 h后均明显增加CPE的形成,以25.0 g/mL组效应最明显。加入12.5、25.0、50.0μg/mL的STS处理后,感染48 h时上清中病毒滴度均明显高于对照组,其中以25.0μg/mL的STS处理组病毒滴度最高,达4.88×10^(8) PFU/mL。在RSV感染的Vero细胞模型中,加入25.0μg/mL STS处理后,感染60 h时形成的CPE更大,范围更广泛,且病毒滴度明显高于对照组,达3.63×10^(8) PFU/mL,而RSV组上清中病毒滴度为5.88×106 PFU/mL。于感染RSV 0~24 h加入STS处理均明显增加病毒滴度,STS作用不同时间(6~24 h)后去除STS均不能增加病毒滴度。结论STS体外可促进RSV复制,不影响RSV入胞,在RSV感染的后期阶段促进病毒复制。本研究为进一步研究STS的药理学作用及为临床合理使用STS治疗RSV感染相关疾病提供一定的理论依据。