不同类型香蕉的细菌性鞘腐病病原分子鉴定及致病性分析

[目的]香蕉Musa spp.是我国南方重要的经济作物,香蕉细菌性鞘腐病是近年来发现的一种细菌性病害,给香蕉生产带来严重影响。本研究旨在明确侵染不同类型香蕉的病原种类和致病性分化。[方法]对多种不同类型香蕉的细菌性鞘腐病病株进行分离,并利用Dickeya属特异引物对这些病原进行PCR鉴定;通过分析16S rDNA核苷酸序列相似性、构建6个管家基因(fusA、gyrA、recA、gyrB、dnaJ和dnaX)的系统进化树并分析共线性关系进一步确定病原。采用离体和活体接种香蕉假茎及幼苗,对所分离病原进行致病性分析。[结果]从不同类型香蕉病株中共分离、获得15株菌株,PCR鉴定表明这些病原属于Dickeya spp.。16S rDNA核苷酸序列分析、基于6个管家基因的系统进化分析以及共线性分析的结果表明,所分离的菌株属于D. dadantii。致病性测定结果表明,这15株菌株致病性分为3类:1) XJ1、XJ8、XJ12和对照XJ5-1属于强致病力菌株;2) XJ2、XJ3、XJ4、XJ7和XJ11是较强致病力菌株;3) XJ5、XJ6、XJ9、XJ10和XJ13为中等致病力菌株。[结论]来源于不同类型香蕉的细菌性鞘腐病病原均为D. dadantii,不同菌株间存在明显的致病性分化,为进一步研究D.dadantii的致病机理以及香蕉细菌性鞘腐病的防控奠定了理论基础。

香蕉枯萎病菌1号和4号生理小种在‘巴西蕉’植株及根际土壤中的时空分布

【目的】香蕉Musa spp.是我国重要的经济作物之一,由尖孢镰刀菌古巴专化型Fusarium oxysporum f.sp.cubense(Foc)引起的香蕉枯萎病蔓延快、根治难,严重阻碍了我国香蕉产业发展。由于Foc菌量和空间分布与其侵染和致病作用直接相关,探索Foc在‘巴西蕉’Musa acuminate L.AAA group,cv.Brazilian植株和土壤中的时空分布具有重要意义。【方法】采用伤根接种法对‘巴西蕉’苗分别接种香蕉枯萎病菌1号生理小种(Foc1)和4号生理小种(Foc4),通过实时荧光定量PCR技术检测接种后不同时间、不同香蕉组织及根际土壤中的菌量,分析了香蕉枯萎病菌在植株和土壤中的时空分布。【结果】温室中接种Foc后2~21 d内,‘巴西蕉’根部和球茎中Foc1和Foc4菌量随时间延长而逐渐增加,但Foc4菌量始终大于Foc1;在‘巴西蕉’球茎中,Foc1和Foc4分别在接种后21和14 d菌量达到最大。田间接种Foc后30 d,离‘巴西蕉’植株地面半径(r)5 cm、地下深度25~30 cm土壤中的Foc1和Foc4菌量最大;而r为15和30 cm时,地下深度10~15 cm土壤中的Foc菌量大于0~5和25~30 cm的菌量;在相同r和地下深度的‘巴西蕉’根际土壤中,一般Foc4菌量大于Foc1。【结论】Foc1和Foc4菌量在‘巴西蕉’植株和根际土壤中具有明显不同的时空分布,同一空间中Foc4菌量大于Foc1菌量,研究结果可为香蕉枯萎病的发生流行、预测预报和防控提供一定的理论指导。

工厂化组培香蕉分化芽中病毒的检测

采用间接ELISA法和PCR方法对组织培养的香蕉分化芽中黄瓜花叶病毒(CMV)、香蕉线条病毒(BSV)和香蕉束顶病毒(BBTV)分别进行了检测,用间接ELISA法抽检香蕉分化芽中的CMV,带毒率为2 5%左右;PCR法检测香蕉分化芽中BSV和BBTV,40个送检样品中带BSV的为12 5%,22个送检样品中未检测到带BBTV的香蕉分化芽.

番木瓜快繁研究进展

综述了番木瓜快繁中外植体取材、灭菌（消毒）、增殖和诱根等环节的影响因素，并对快繁中存在的问题进行了探讨。

转基因番木瓜研究进展

番木瓜环斑病毒 (PRSV)使热带亚热带的重要水果番木瓜的生产受到严重影响 ,在众多方法防效不佳的情况下 ,利用病原获得抗性防治PRSV给番木瓜的生产带来了光明。综述了近年来转PRSVCP基因番木瓜中影响番木瓜转化因素和转基因番木瓜的抗性因素。转PRSV外壳蛋白 (CP)基因的番木瓜中多以胚性组织为转化材料 ,被转化材料的生理状态和基因型 ,是影响转化效率和转基因植株质量的主要因素。所获得的转基因番木瓜对PRSV的抗性在很大程度上依赖于接种PRSV与所转化PRSVCP基因的序列同源性、转基因拷贝数和所转基因的位置等。

广州市郊及其邻近地区辣椒CMV和TMV的鉴定

根据对广州市郊及其邻近地区辣椒病毒病的田间调查、寄主范围和症状特点、血清学反应以及RT -PCR的试验结果 ,证实了黄瓜花叶病毒 (CMV)是广州市郊及其邻近地区辣椒病毒病的主要毒原之一 ;通过生物学和血清学方法 ,鉴定了烟草花叶病毒 (TMV)是另一主要毒原。在采集的病样中 ,根据鉴别在寄主上的症状特点 ,主要存在两种类型的分离物 ,分别称为分离物Ⅰ和分离物Ⅱ。分离物Ⅰ在辣椒、西葫芦、三生烟、普通烟、心叶烟、曼陀罗等寄主植物上引起花叶等症状 ,在苋色藜、昆诺阿藜上产生局部枯斑 ,不侵染千日红 ,由此可初步鉴定为CMV ;从间接ELISA和RT -PCR的检测结果也可判断分离物Ⅰ是CMV ,其检出率为 3 6.67%。分离物Ⅱ在辣椒、普通烟上产生花叶症状 ,在心叶烟、曼陀罗、千日红、三生烟、苋色藜和昆诺阿藜等寄主植物上产生局部枯斑 ,而不侵染西葫芦 ,由此可初步鉴定其为TMV ;间接ELISA检测结果表明 ,分离物Ⅱ是TMV ,其检出率为 43 .3 3 %。另外 ,TMV在田间发生率明显高于CMV。

番木瓜环斑病毒融合基因植物表达载体的构建

利用PCR重叠延伸技术(genesplicingbyoverlapextension,SOE)将番木瓜环斑病毒(Papayaring-spotvirus,PRSV)Vb株系的外壳蛋白(coatprotein,CP)基因和Ys株系的复制酶(replicaseprotein,RP)基因构建成融合基因VY。同时对常规的SOE法进行了改进,并对改进的SOE的反应体系进行了优化,其中以Py-robestDNA聚合酶和60℃的退火温度为最佳。将融合基因VY构建在植物表达载体pCAMBIA2300上,测序结果表明,该融合基因的序列与设计相符。融合基因VY植物表达载体的构建,可为进一步获得对PRSV广谱抗性的转基因番木瓜奠定基础。

番木瓜耐环斑病毒病检测方法的研究

用汁液磨擦接种法、局部枯斑法、间接ＥＬＩＳＡ法和过氧化物酶检测法研究了组培和杂交一代番木瓜对番木瓜环斑病毒（ＰＲＶ）的耐病性。结果表明：前３种方法可以确定组培番木瓜的耐病性，第４种方法暂未能作出结论。

红肉小果型番木瓜品种‘美中红’体胚的诱导

用红肉小果型番木瓜品种‘美中红’为外植体，探讨不同成熟度的幼胚、不同浓度2,4-D和培养条件对其体胚的诱导以及体胚形成过程的结果表明：以子叶和内外种皮都为白色且个体较大的番木瓜幼胚（90～120d）在含10mg·L^-1 2,4-D的培养基中和黑暗条件下诱导愈伤组织的效果最佳，愈伤组织的诱导率随着2冉D浓度的增加而增加．番木瓜愈伤组织最先发生于形态学上的胚根下端，体胚多发生于形态学上的胚芽上端。

番木瓜美中红品种体胚转化体系的建立

利用已构建的番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)基因,通过农杆菌介导法,建立美中红番木瓜(Carica papaya L.)体胚的转化体系。结果表明:共培养时,当农杆菌EHA105携带pCAMBIA2300质粒时,农杆菌的浓度(OD600 nm)应小于或等于0.1,其共培养后抑制农杆菌的羧苄青霉素浓度应以750 mg/L为宜;当农杆菌EHA105携带pBI121质粒时,则农杆菌的浓度(OD600 nm)应小于或等于0.8,其共培养后抑制农杆菌的羧苄青霉素的浓度则为500 mg/L;加上滤纸处理,抗生素洗涤以及洗涤后的干燥处理,可完全抑制体胚表面的农杆菌生长。对再生的番木瓜体胚进行PCR检测,结果表明PRSV基因已转入体胚中,但还需要成苗后的进一步检测。

番木瓜体胚间接发生方式的研究

为了建立小果型番木瓜(Caricapapaya L.)高效外源基因遗传转化体系,以小果型番木瓜‘美中红’的幼胚(授粉受精后90～120d)为材料,通过组织切片和电镜观察体胚发生方式。结果表明,培养8～12d,愈伤组织首先发生于幼胚的胚根端;培养26d,整个幼胚的胚轴愈伤化,愈伤组织分为粘性透明和干性两大类,组织切片分为明显的两层,外层疏松易脱落,内层结构紧密;培养38d,淡黄色的体胚前体发生于幼胚的胚芽端。番木瓜体胚的形态各异,大多数是形态正常的体胚,少数体胚的形态发生变异。

应用RT-PCR检测香蕉分化芽中黄瓜花叶病毒

通过改进的异硫氰酸胍法提取香蕉分化芽中的总RNA,既经济又满足了RT-PCR的要求。运用RT-PCR两步法和一步法都可从带毒的香蕉分化芽提取的RNA中扩增出739 bp的特异性条带,而阴性对照未扩增出任何条带,并对RT-PCR一步法进行了优化及应用。本研究建立了经济简便的检测香蕉分化芽中黄瓜花叶病毒(cucum-ber m osa ic v irus,CM V)的RT-PCR方法,为灵敏高效的RT-PCR方法在香蕉分化芽检测中的应用奠定了基础。

香蕉病毒病发生和防控

【导读】香蕉是我国南方重要农业支柱产业之一，产量居世界第二位，是我国第四大水果，在海南、广东、云南、广西、福建和台湾等地大面积种植。我国香蕉病毒病害主要有香蕉束顶病、香蕉花叶心腐病和香蕉线条病，这3种病毒病在我国香蕉产区普遍发生，对香蕉病毒病害的防控有利于我国香蕉产业发展。

番木瓜抗环斑病毒突变体抗性遗传及RAPD标记

:60 Coγ-射线处理番木瓜种子 ,从诱变一代中筛选到 1株耐环斑病毒 ( PRSV)的变异植株 ( M1) ,其侧芽组培后代 ( VM1)部分植株也表现出了耐病性 ,以 VM1为母本进行回交 ,人工接种病毒鉴定回交后代 ( BM2 )的抗病性 ,结果为 :在出自部分回交果实的 BM2 群体中 ,包含有对 PRSV Ys和 Vb株系具抗性的植株 ,抗感分离比为 1∶ 1,但未发现抗 Sm株系的植株 ;BM2 抗病两性株自交或以其为母本进行回交 ,分别获得诱变第三代 ( M3)及回交诱变第三代 ( BM3) ,人工接种 PRSV Ys株系 ,结果表明 ,BM3抗感分离比也为 1∶ 1,因而认为辐射处理突变产生了具 PRSV株系专化性的显性抗病基因 ,命名为 Rys;但 M3抗感分离比不符合显性单基因 3∶ 1理论值 ,认为是单倍体选择的结果。运用 BSA法 ,在 BM2 中寻找到一个与抗病性密切相关的 RAPD标记 ,经在 BM2 、M3及 BM3抗感群体中检验 ,可作为抗病育种的辅助选择标记。Rys是番木瓜栽培种中发现的第一个抗

广东兰花两种主要病毒的检测

采用双抗夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)对44个兰花病样分别检测建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CyMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV),结果显示,有59.1%的兰花检出CyMV,36.4%的兰花检出ORSV,22.7%的兰花复合感染了CyMV和ORSV。采用一步逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)对24个兰花病样进行检测,结果有83.3%的兰花检出CyMV,75%的兰花检出ORSV,66.7%的兰花复合感染了CyMV和ORSV,可见RT-PCR检测灵敏度高于ELISA。

黄瓜花叶病毒荧光定量PCR检测方法的建立

【目的】建立检测香蕉中黄瓜花叶病毒Cucumber mosaic virus(CMV)的实时荧光定量方法.【方法】根据CMV外壳蛋白(CP)保守序列设计了TaqMan实时荧光定量PCR特异性探针及引物,优化反应体系检测TaqMan探针实时荧光定量方法的灵敏度、特异性和重复性.【结果和结论】该方法检测灵敏度为4.2×102μL-1,比普通PCR高100倍,且与香蕉束顶病毒Banana bunchy top virus(BBTV)、香蕉线条病毒Banana streak virus(BSV)无交叉反应,特异性和重复性都较好.用实时荧光定量PCR检测14份田间香蕉样品有5份样品为阳性,进一步证明建立的实时荧光定量方法可用于香蕉CMV的检测.

斑即脱防治荸荠杆枯病药效试验

斑即脱防治荸荠杆枯病药效试验结果表明 ,斑即脱 1 0 0 0倍液对荸荠杆枯病菌孢子萌发抑制率在 95%以上 ,1 50 0倍液的抑制率在 90 %以上 ,田间防治效果在 85%以上 ,对荸荠生长和环境无任何不良影响。

2种兰花主要病毒双重一步法RT-PCR检测的影响因素

兰花是花卉产业最重要的观赏植物之一[1],一旦感染上病毒,其观赏价值和经济价值将受到严重影响。近年来,随着兰花产业的迅速发展,兰花国际国内贸易和种质交流十分频繁,建兰花叶病毒（Cymbidium mosaic virus,CyMV）和齿兰环斑病毒（Odontoglossum ringspot virus,ORSV）是严重影响兰花生产的2种主要病毒[2-3],有必要建立这两种病毒的高效检测方法。一些研究者对这2种病毒建立了双重RT-PCR检测方法[4-6],但对其检测体系的影响因素研究不多[5]。本试验对此进行了研究,旨在为兰花进出口贸易和安全生产奠定基础。

“植物保护学”教学优化与实践

"植物保护学"是植物生产类非植保专业本科生的专业基础课程,理论性和实践性很强。为了适应专业培养和社会人才的需求,课程组基于多年教学积累,进行了"植物保护学"教学改革。从优化教学内容,重视学科前沿融合;病虫害相结合开展实践,增加综合性探索实验,注重创新能力培养;有效利用新媒体技术,完善教学方法;改进考核评价体系等方面进行探索和实践,激发了学生的学习热情,提高了教学质量,获得了较好的教学效果,为高等院校"植物保护学"的课程建设提供思路。