白藜芦醇抑制基质金属蛋白酶抗酒精性心肌纤维化

目的探索白藜芦醇对酒精诱导的心肌纤维化的作用及其分子机制。方法将雄性SD大鼠随机分为对照组、酒精组和酒精+白藜芦醇组,每组10只大鼠,干预6个月后取心肌行常规石蜡切片和Masson染色评估心肌纤维化,采用冰冻切片和免疫荧光法检测纤连蛋白的表达,采用免疫印迹法检测心肌组织中基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9的表达。结果 6个月酒精摄入可显著增加心肌间质纤维化并明显破坏纤连蛋白的结构,白藜芦醇能显著削弱酒精诱导的心肌纤维化和纤连蛋白破坏。酒精摄入可显著增加心肌组织中基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9的表达水平,而白藜芦醇能显著抑制基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9的表达水平。结论白藜芦醇能通过抑制基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9的表达来抗酒精诱导的心肌纤维化。

跖肌腱移植的应用解剖

目的:为临床进行跖肌腱移植提供解剖学依据。方法:对68例(共120侧,其中男84侧,女36侧)防腐固定标本下肢进行跖肌腱移植的应用解剖及形态学测量。结果:跖肌腱长(30.59±2.49)cm,与下肢长度之比为0.38±0.02。根据外形特点跖肌腱可划分为上、中、下3段,宽度分别为(3.58±0.76)mm,(2.44±0.52)mm,(1.67±0.30)mm;厚度分别为(0.45±0.11)mm,(0.56±0.13)mm,(0.74±0.17)mm。跖肌腱终止方式分为A,B,C,D4型,构成比分别为55.00%,28.33%,13.33%和3.33%;跖肌腱止端横截面积为(11.52±7.45)mm2。结论:提供的跖肌腱解剖学数据,为临床跖肌腱取材提供了形态学依据。

白藜芦醇通过激活腺苷酸活化蛋白激酶预防酒精性心肌病

目的探索白藜芦醇对酒精性心肌病的作用及其分子机制。方法将雄性Wistar大鼠随机分为对照组、酒精组和酒精+白藜芦醇组,每组10只,干预6个月后采用介入生理记录仪检测大鼠的心功能,采用常规石蜡切片和HE染色法评估心脏结构改变,采用免疫印迹法检测心肌组织中腺苷酸活化蛋白激酶和内皮型一氧化氮合酶及其磷酸化蛋白的表达,并运用硝酸还原酶法检测心肌组织中一氧化氮水平。结果 6个月酒精摄入可显著损害大鼠的心功能和心肌显微结构,添加白藜芦醇能显著削弱酒精对心脏功能和结构的损害作用。酒精摄入可显著降低心肌组织中腺苷酸活化蛋白激酶和内皮型一氧化氮合酶的磷酸化水平,并降低一氧化氮水平,而添加白藜芦醇能显著增加腺苷酸活化蛋白激酶和内皮型一氧化氮合酶的磷酸化水平,并增加心肌组织中一氧化氮水平。结论白藜芦醇能通过激活腺苷酸活化蛋白激酶/内皮型一氧化氮合酶系统和增加一氧化氮水平来预防酒精性心肌病。

瞬时受体电位通道家族M8型受体转基因小鼠模型的建立

目的建立瞬时受体电位通道家族M8型受体(TRPM8)转基因小鼠模型。方法通过显微注射法将pcDNA3.1-h Trpm8导入C57BL/6J×CBA F1小鼠的受精卵中,并将其移植到假孕母鼠输卵管中获得子代小鼠。采用PCR方法鉴定子代基因型,通过RT-PCR和免疫印迹法检测Trpm8基因及蛋白在组织中的表达。结果将405枚注射受精卵移植给15只假孕鼠,其中13只顺利妊娠并产下95只子鼠,经PCR鉴定得到5只转基因阳性首建鼠,其中4只小鼠可稳定传代,经与C57BL/6J小鼠回交7代后互交数代建系。子代转基因小鼠经RT-PCR检测发现Trpm8基因在心脏、肝脏、肾脏、脂肪和骨骼肌中均有表达,且TRPM8蛋白表达在转基因小鼠中显著增加。结论通过显微注射法成功建立了Trpm8转基因小鼠模型。

人跖肌腱的力学性质测试与组织学观察

目的探讨跖肌腱不同部分的力学性能差异,为临床选用跖肌腱作为自体移植材料提供生物力学依据。方法新鲜意外死亡成人尸体8具共计15侧跖肌腱,分别截成长约6cm的试件共56例,分为上段、中段、下段3组,对其中50例进行拉伸试验,其余6例在预定应力分别为30、40、50Mpa的拉伸作用后进行组织学观测。结果跖肌腱的平均最大载荷、拉伸强度、弹性模量分别为(83.19±42.52)N,(60.32±21.80)、(714.83±285.44)MPa,其中下段的拉伸强度显著大于上、中段。结论跖肌腱的生物力学性能适应于自体移植材料的需要。

高原及高寒地区野战兵站常见病防治体会

笔者曾在海拔约4300米,年平均气温-7℃,最低气温-45℃的川藏兵站部某野战兵站任代职医生,为过往汽车官兵提供卫勤保障服务。目前对野战兵站和医疗所常见病防治的报道不多[1-3],现结合工作体会将高原及高寒地区野战兵站常见病的防治,总结如下。

替米沙坦对高血压伴不稳定性心绞痛患者单核细胞中PPARs表达的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对高血压伴不稳定性心绞痛患者单核细胞过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)表达的影响。方法 170例高血压伴不稳定性心绞痛患者随机分为替米沙坦组(n=85)和氯沙坦组(n=85),治疗6 mon,应用蛋白免疫印迹法检测治疗前后外周血单核细胞PPAR-δ及PPAR-γ的表达,测定治疗前后血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、高敏C-反应蛋白(hs-CRP)及白细胞介素-6(IL-6)的水平。常规方法测定空腹血糖、血脂,放免法检测肾素活性、血管紧张素Ⅱ及醛固酮水平。结果干预6 mon后,两组患者血压、MMP-9、hs-CRP及IL-6均明显下降(P<0.01);替米沙坦组患者单核细胞PPAR-δ的表达明显高于氯沙坦组(P<0.01),而PPAR-γ的表达无变化(P>0.05);与氯沙坦组比较,替米沙坦组患者血清MMP-9、hs-CRP及IL-6的水平均降低(P<0.05)。两组间空腹血糖、血脂、肾素活性、血管紧张素II及醛固酮水平差异无显著性(P>0.05)。结论替米沙坦可能通过增加高血压伴不稳定性心绞痛患者单核细胞中PPAR-δ的表达,抑制炎症介质的分泌,改善动脉粥样硬化。

肾交感神经去除术对心肌肥厚和心肌纤维化的影响

目的:观察肾交感神经去除术(renal sympathetic denervation,RDN)对心肌肥厚和心肌纤维化的影响,并探讨其可能机制。方法:选用12周龄的健康SD雄性大鼠60只,随机分为假手术组、假手术+RDN组、主动脉缩窄组、主动脉缩窄+RDN组,8周后用介入生理记录仪检测血流动力学和心功能指标,HE染色、苦味酸-天狼星红染色分别观察心肌肥厚和心肌纤维化情况,放射免疫分析法测量血浆肾上腺素浓度、肾素活性、血管紧张素II浓度及心脏血管紧张素II含量。结果:与主动脉缩窄组相比,RDN可显著改善主动脉缩窄大鼠心脏舒张功能[左室舒张末期压力(LVEDP):(8.03±1.66)mm Hg vs(15.77±2.14)mm Hg;等容舒张期左室压力下降最大速率(-dp/dt):(7 793±587)mm Hg/s vs(6 353±475)mm Hg/s;P<0.01]、防止其心肌肥厚和纤维化[左心室重量指数:3.340±0.121 vs 4.244±0.102;心肌细胞面积:(332.9±28.9)μm2vs(401.6±33.2)μm2;胶原容积分数:7.76%±0.85%vs 12.48%±1.82%;P<0.01]。然而,RDN不能降低主动脉缩窄大鼠的血压(P>0.05)。RDN导致主动脉缩窄大鼠的血浆肾上腺素浓度、肾素活性、血管紧张素II浓度及心脏血管紧张素II含量均明显减少(P<0.01)。结论:RDN可以通过降低交感和肾素-血管紧张素系统活性直接抑制心肌肥厚和心肌纤维化,从而改善心脏功能。

红景天甙对间歇性低压低氧诱导的ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响

目的观察红景天甙对间歇性低压低氧诱导的载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响及其可能机制。方法 30只8周龄健康雄性ApoE-/-小鼠随机分为常压常氧组、间歇性低压低氧组、低压低氧+红景天甙组,其中间歇性低压低氧组和低压低氧+红景天甙组被放置在模拟海拔5000 m低压低氧舱内每天8h,每组给予相同的普通饮食喂养,低压低氧+红景天甙组灌服红景天甙30 mg/(kg·d),而常压常氧组和间歇性低压低氧组灌服等量蒸馏水,连续灌胃12周后取小鼠血样测空腹血糖和血脂,取小鼠主动脉根部,HE染色观察动脉粥样硬化斑块的大小,Masson染色观察斑块内胶原含量,Western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和组织型基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)蛋白的表达。结果三组空腹血糖和血脂水平无统计学差异(P>0.05);与常压常氧组比较,间歇性低压低氧组动脉粥样硬化斑块面积明显增加(P<0.01),胶原含量明显减少(P<0.01);与间歇性低压低氧组比较,低压低氧+红景天甙组斑块面积、MMP-2和MMP-9蛋白水平明显降低(P<0.01),而斑块内胶原含量、TIMP-2蛋白水平明显增加(P<0.01)。结论红景天甙能抑制间歇性低压低氧诱导的动脉粥样硬化斑块形成,并提高斑块的稳定性,其机制可能与红景天甙增加斑块内胶原含量有关。

激活PPARδ对梗死心肌MMP-9及纤连蛋白表达的影响

目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)激动剂GW610742X对梗死心肌重塑过程中基质金属蛋白酶9(MMP-9)及细胞间基质纤连蛋白(FN)表达的影响。方法:雄性Wistar大鼠,分为对照组、假手术组、心肌梗死(MI)组和MI+GW610742X(GW)组。结扎大鼠左冠状动脉建立MI模型,GW组予以GW610742X(100mg.kg-1.d-1)喂养。术后3个月检测各组大鼠左心室游离壁(LVFW)中PPARδ、MMP-9及FN的mRNA及蛋白表达;免疫荧光法检测LVFW中FN的分布。结果:MI组术后3个月LVFW心肌有不同程度的坏死及纤维化。MI组PPARδ表达高于对照组、假手术组及GW组(P<0.01),GW组PPARδ表达低于对照组及假手术组(P<0.05);MI组及GW组MMP-9表达高于对照组及假手术组,FN表达低于对照组及假手术组(P<0.01或P<0.05)。GW组MMP-9表达低于MI组(P<0.05),FN表达高于MI组(P<0.01)。假手术组与对照组MMP-9及FN的表达无显著差异(P>0.05)。结论:梗死心肌重构过程中,MMP-9表达上调,FN被降解;激活PPARδ可能通过抑制MMP-9的表达,减轻FN的降解,从而改善心肌重塑。

Ⅱ型胶原酶加压灌流提高成年大鼠心肌细胞分离效率

目的探讨效率更高的成熟心肌细胞分离方法。方法采用Ⅱ型胶原酶升主动脉逆行灌流法分离成年大鼠心肌细胞。对照组采用Langendorff装置灌流;实验组在Langendorff装置基础上加压匀速灌流。在倒置显微镜下观察细胞形态,并计算杆状细胞比率及产量;通过台盼蓝染色和局部场剌激评价心肌细胞活性。结果分离即刻,实验组杆状细胞比率显著高于对照组【(90.3±4.4)%νs.(53.4±5.2)%,P<0.01】;实验组活细胞产量也显著高于对照组[(3.6±0.7)×107νs.(1.9±0.6)×107,P<0.01]。复钙过程中,实验组发生自发性收缩的细胞比率及变圆细胞比率均明显低于对照组【(10.4±2.1)%νs.(18.9±4.5)%,P<0.01;(5.3±1.3)%νs.(8.6±1.7)%,P<0.05】。实验组台盼蓝染色阴性的杆状细胞比率和局部场剌激条件下收缩细胞比率明显高于对照组【(95.3±8.2)%νs.(90.6±9.8)%,P<0.05;(92.2±7.6)%νs.(85±6.4)%,P<0.01】。结论Ⅱ型胶原酶加压灌流可获得高产量、高活性的心肌细胞,提高了成熟心肌细胞的分离效率。

丙泊酚与氯胺酮在小型猪血管介入手术麻醉中的应用

目的探讨小型猪在血管介入手术中的理想麻醉方法。方法将经皮肾交感神经射频消融术的贵州小型猪16只随机分为丙泊酚麻醉组和氯胺酮麻醉组,每组8只,在麻醉过程中记录诱导时间、麻醉维持时间和苏醒时间,并对动物的心率、血压、呼吸、体温进行监测。结果丙泊酚麻醉组诱导时间(2.83±0.59)min,麻醉维持时间(89.13±6.20)min,苏醒时间(29.88±4.82)min;氯胺酮麻醉组诱导时间(4.84±0.72)min,麻醉维持时间(76.50±6.12)min,苏醒时间(43.38±4.21)min。丙泊酚麻醉组对小型猪各项生理指标的影响小于氯胺酮麻醉组(均P<0.05)。结论丙泊酚和氯胺酮均可在小型猪血管介入手术中达到满意的麻醉效果,而丙泊酚略优于氯胺酮。

糖尿病合并动脉粥样硬化小鼠模型的建立

目的探讨糖尿病合并动脉粥样硬化小鼠模型建立的方法。方法 8周龄雄性载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠46只,随机分为对照组、高脂饮食组、链脲佐菌素低剂量组和高剂量组,链脲佐菌素低剂量组和高剂量组分别腹腔注射链脲佐菌素55 mg/kg(连续注射5天)、200 mg/kg(单次注射)。2月后测定空腹血糖、血脂、主动脉根部斑块面积。结果链脲佐菌素高剂量组出现高死亡率,链脲佐菌素低剂量组血糖、血脂、粥样斑块面积均高于对照组和高脂组(P<0.01),高脂组空腹血糖呈轻度升高(7.78±0.67 mmol/L)。结论以ApoE-/-小鼠为基础小剂量多次腹腔注射链脲佐菌素是制备糖尿病合并动脉粥样硬化小鼠模型的理想方法,单纯高脂喂养ApoE-/-小鼠可以导致空腹血糖升高,大剂量单次腹腔内注射链脲佐菌素不宜用于该模型的建立。

二甲双胍通过基质金属蛋白酶抑制血管内皮损伤后的内膜增生

目的观察二甲双胍对血管内皮损伤后内膜增生的影响,并探讨其可能机制。方法选用300~350 g的健康雄性SD大鼠45只,随机分为对照组、颈动脉球囊损伤组、颈动脉球囊损伤＋二甲双胍组,3周后HE染色观察内膜增生情况,real-time PCR、Western blot和免疫组织化学染色检测颈动脉组织中基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达情况。结果球囊损伤后,颈动脉出现明显的内膜增生,颈动脉组织中MMP-2、MMP-9的mRNA和蛋白表达显著上调（P〈0.01）;二甲双胍削弱血管内皮损伤所致MMP-2和MMP-9的表达上调（P〈0.05）,并抑制血管内皮损伤后的内膜增生（P〈0.01）。结论二甲双胍可能通过抑制MMP-2和MMP-9的表达防止血管损伤后内膜增生。

激活过氧化物酶体增殖物激活受体-δ对梗死心肌腱糖蛋白表达的影响

目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体-δ(PPARδ)激动剂GW610742X对梗死心肌腱糖蛋白表达的影响。方法 60只Wistar大鼠,随机分为对照组,假手术组,心肌梗死(MI)组,心肌梗死+GW610742X(GW)组;结扎大鼠左冠状动脉建立心肌梗死模型,GW组给予PPARδ激动剂GW610742X喂养。3个月后检测各组大鼠左心室游离壁的腱糖蛋白表达;用免疫荧光法检测左心室游离壁心肌腱糖蛋白的分布。结果心肌梗死(MI)组术后3个月左心室游离壁心肌有不同程度的坏死及纤维化。MI及GW组基质腱糖蛋白的表达高于对照组及假手术组(P<0.01),GW组基质腱糖蛋白的表达低于MI组(P<0.05),假手术组与对照组基质腱糖蛋白的表达无显著差异(P>0.05)。结论梗死心肌的重构病程中,基质腱糖蛋白显著上调,激活PPARδ能抑制腱糖蛋白的表达。

急性冠状动脉综合征患者单核细胞过氧化体增殖物激活型受体δ的表达与转化生长因子β1和白细胞介素1β的相关性

目的探讨急性冠状动脉综合征患者单核细胞中过氧化体增殖物激活型受体δ的表达水平与血清转化生长因子β1和白细胞介素1β水平的相关性。方法纳入55例急性冠状动脉综合征患者和47例健康对照者,分离其周围血单核细胞,应用逆转录聚合酶链反应法检测过氧化体增殖物激活型受体δmRNA的表达;应用酶联免疫吸附试验检测血清转化生长因子β1和白细胞介素1β的水平。结果急性冠状动脉综合征患者血单核细胞中过氧化体增殖物激活型受体δmRNA的表达水平显著低于健康对照组(0.13±0.09比0.34±0.08,P<0.01);血清白细胞介素1β水平高于健康对照组(142.7±39.3 ng/L比81.5±23.9 ng/L,P<0.01),而转化生长因子β1低于健康对照组(11.4±4.6μg/L比26.3±10.5μg/L,P<0.01);过氧化体增殖物激活型受体δmRNA表达水平与白细胞介素1β呈负相关(r=-0.437,P<0.05),与转化生长因子β1呈正相关(r=0.598,P<0.05)。结论过氧化体增殖物激活型受体δ可能在急性冠状动脉综合征的发病中具有重要作用。

急性冠脉综合征单核细胞中PPARδ的表达及与血清IL-6、IL-10水平的相关性

目的:探讨急性冠脉综合征(ACS)患者单核细胞中过氧化物酶体增殖激活受体δ(PPARδ)的表达水平与血清IL-6和IL-10水平的相关性。方法:分离55例ACS患者和47例健康对照者的外周血单核细胞,应用RT-PCR法检测PPARδ的表达;应用ELISA法检测白血清IL-6和IL-10的水平。结果:ACS患者外周血单核细胞中PPARδ的表达水平显著低于健康对照组(P<0.01);血清IL-6水平显著高于健康对照组(P<0.01);而血清IL-10的水平显著低于健康对照组(P<0.01)。PPARδ的表达水平与血清IL-6的水平呈负相关(r=-0.413,P<0.05),与血清IL-10的水平呈正相关(r=0.601,P<0.05)。结论:PPARδ可能在ACS的发病中具有重要作用。

替米沙坦阻断血管紧张素Ⅱ作用促进骨骼肌细胞糖摄取

目的研究替米沙坦和血管紧张素Ⅱ对小鼠骨骼肌成肌细胞C2C12的葡萄糖摄取和胰岛素信号传导途径的影响,探讨替米沙坦影响糖代谢的可能机制。方法诱导成熟的C2C12细胞分为对照组(C组)、胰岛素组(Ins组)、胰岛素+血管紧张素Ⅱ组(Ins+AngⅡ组)、胰岛素+血管紧张素Ⅱ+替米沙坦组(Ins+AngⅡ+Tel组)。经相应药物干预后测定细胞2-脱氧葡萄糖摄入率,并用Western印迹法检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3-K)p85α、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)1、P38、胞外信号调节激酶(ERK)1蛋白表达。结果Ins组胰岛素信号转导通路的信号分子PI3-Kp85α、AKT1、P38、胞外信号调节激酶(ERK1)的蛋白表达均较C组显著升高(P值均<0.05);Ins+AngⅡ组PI3-Kp85α和AKT1的蛋白表达较Ins组显著下降(P值均<0.05),而两组间P38和ERK1蛋白表达的差异则无统计学意义(P值均>0.05);Ins+AngⅡ+Tel组PI3-Kp85α和AKT1的蛋白表达较Ins+AngⅡ组显著增加(P值均<0.05),两组P38和ERK1蛋白表达的差异则无统计学意义(P值均>0.05)。结论替米沙坦逆转血管紧张素Ⅱ对骨骼肌细胞葡萄糖吸收和抑制胰岛素信号转导PI3-K途径的作用,可能是其影响糖代谢的机制之一。

低强度脉冲电磁场对兔动脉粥样硬化斑块中MMP-9及TIMP-1表达的影响

目的探索低强度脉冲电磁场对大白兔动脉粥样硬化(AS)斑块中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及组织金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)表达的影响。方法将大白兔随机分成常规饮食(ND)组、高脂饮食(HD)组及高脂饮食+磁场(HM)组,ND及HD组分别给予常规饮食及高脂饮食,HM组动物在给予高脂饮食的同时,加用低强度脉冲电磁场进行干预。干预7 w后,取主动脉根部行常规石蜡切片及HE染色后,计算AS斑块的面积,采用免疫组化及蛋白免疫印迹法检测AS斑块中MMP-9和TIMP-1的表达。结果高脂饮食可显著增加主动脉根部AS斑块的面积(P<0.05),低强度脉冲电磁场干预能显著削弱高脂饮食诱导的AS斑块形成(P<0.05);高脂饮食能显著增加AS斑块中MMP-9和TIMP-1的表达(P<0.05),而低强度脉冲电磁场干预能显著抑制高脂饮食诱导的MMP-9和TIMP-1表达水平的增加(P<0.05),且可显著降低MMP-9与TIMP-1的比值。结论低强度脉冲电磁场抗AS的作用机制可能与降低MMP-9与TIMP-1的比值有关。