山核桃树叶中球松素查耳酮的含量测定

目的:建立用高效液相色谱法(HPLC)法测定山核桃树叶中球松素查耳酮(DHMC)含量的方法。方法:采用Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-水(65∶35,V/V)为流动相,柱温为30℃,流速为1.0 ml/min,检测波长为342 nm,对DHMC的含量进行测定。结果:DHMC进样量在0.02～0.10μg范围内线性关系良好(r=0.999 6,n=6),精密度RSD为1.1%(n=6),重复性试验RSD为0.9%(n=6),加样回收率为101.6%(RSD=1.8%,n=6),经测定山核桃叶干品中DHMC的含量较高,达0.79%。结论:所建立的HPLC法专属性强,精密度好,结果准确。

从《神农本草经》看仲景方中半夏用药规律

张仲景所著的《伤寒杂病论》中记载的使用半夏的方剂多达42首,通过对张仲景使用半夏方剂的分析,发现张仲景在治疗伤寒、寒热、痞满、肠鸣以及邪郁少阳、水饮不能外出而上蒸出汗等症时,常使用辛温之性的半夏,辛能宣散,温化寒邪,则伤寒得以宣通,宣散少阳之邪而止头汗,调畅气机则痞满消、肠鸣止;在治疗呕吐、胸胀、咳逆时,用半夏降逆止呕之功,降肺胃之逆气;在治疗头眩和咽喉不适之症时,用半夏燥湿化痰之效,涤痰开结则咽喉得利,风痰上扰之头眩症则消。《神农本草经》记载半夏"主伤寒,寒热,心下坚,下气,喉咽肿痛,头眩胸张,咳逆肠鸣,止汗",张仲景在半夏的运用上与《神农本草经》所载一致。

土牛膝多糖抗炎镇痛作用的研究

目的:研究土牛膝多糖的抗炎镇痛作用。方法:采用热板法、醋酸扭体法研究土牛膝多糖的镇痛作用,采用小鼠耳廓肿胀法、腹腔毛细血管通透性试验研究土牛膝多糖的抗炎作用。结果:土牛膝多糖对热刺激和醋酸所导致的小鼠疼痛具有显著的抑制作用,对二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀法和醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性增加也具有显著的抑制作用,与空白对照组相比均有显著性差异。结论:土牛膝多糖具有显著的抗炎镇痛作用。

三叶青多糖抗肝损伤作用的研究

目的测定三叶青中多糖的含量,并研究三叶青多糖抗四氯化碳(CCl4)致急性肝损伤的作用。方法采用硫酸-苯酚法测定三叶青多糖的含量,然后将ICR小鼠随机分为5组,即空白组、模型对照组、阳性对照组,三叶青多糖高、低剂量组,分别灌胃等容积的生理盐水、联苯双酯和三叶青多糖,给药一段时间后给小鼠腹腔注射四氯化碳致其肝损伤,检测其血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果三叶青中多糖的含量为8.69%;与模型组比较,三叶青多糖治疗组ALT、AST及MDA含量均明显降低(P<0.01),而SOD水平显著提高(P<0.01)。结论三叶青多糖对CCl4造成的小鼠急性肝损伤具有阻抗作用。

乌梢蛇水提物对大鼠佐剂性关节炎作用的实验研究

目的:研究乌梢蛇水提物对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠的治疗作用,并探讨其作用机制。方法:用弗氏完全佐剂诱导大鼠AA模型,实验设正常对照组,模型对照组,乌梢蛇水提物高、中、低剂量组及阳性对照组(塞来昔布),分组给药20天。采用足容积法测量关节肿胀度,并进行关节炎指数评分,用ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)的含量。结果:乌梢蛇水提液能明显减轻AA大鼠的关节肿胀度,明显降低关节炎指数评分,降低AA大鼠血清中炎性因子TNF-α、IL-1、IL-6水平。结论:乌梢蛇水提液对AA大鼠关节炎症有一定的治疗作用,其治疗作用可能是通过抑制炎性细胞因子实现的。

蕲蛇提取物抗炎镇痛药理作用的研究

目的研究蕲蛇提取物的抗炎及镇痛作用,为蕲蛇的临床应用提供科学依据。方法采用热板法、冰醋酸刺激致痛法研究蕲蛇提取物对小鼠痛阈的影响,利用二甲苯致小鼠耳廓炎症模型和腹腔染料渗出法测定蕲蛇提取物的抗炎作用。结果蕲蛇提取物醇溶性和水溶性部位对小鼠热板及冰醋酸致痛反应有明显镇痛作用,对二甲苯致小鼠耳廓肿胀、冰醋酸致腹腔毛细血管通透性增高均有明显的抑制作用。结论蕲蛇提取物醇溶性和水溶性部位有一定的抗炎及镇痛作用,并且水溶性部位较醇溶性部位的药效好,可为蕲蛇的临床应用提供指导作用。

新型姜黄素纳米粒制备、表征及其体外抗肿瘤活性评价

目的制备高载药量姜黄素纳米粒,并考察其体外稳定性和抗肿瘤活性。方法用油酸(OA)对姜黄素(Cur)进行化学修饰。采用改良的溶剂挥发法制备聚乙二醇聚乳酸乙酸酯(mPEG-PLGA)载Cur-OA2纳米粒(mPEG-PLGA-Cur-OA2,PPCO)。并以纳米粒载药量(drug loading,DL)、包封率(entrapment efficiency,EN)为指标,通过3因素3水平正交试验对工艺进行优化。采用正交确定工艺制备3批载药纳米粒,应用动态光散射粒度仪和透射电镜测定载药纳米粒的zeta电位、粒径与形态。采用体外37℃水浴降解特性来评价其稳定性。最后利用MTT法对纳米粒体外抗肿瘤活性进行初步评价。结果正交实验,包封率影响因素为:有机相与水相的量(B)>超声时间(C)>药物与材料比(A)。载药量影响因素为:有机相与水相的量(B)>药物与材料比(A)>超声时间(C)。利用正交设计筛选出的方法制备纳米粒,其载药量达(24.870±0.029)%,包封率为(81.250±0.101)%,zeta电位-23.9±1.6mV,平均粒径235.0±25.8nm,粒度分布均匀,呈单峰分布。载药纳米粒在37℃,前4h降解了20%,而其后的70h里,只降解了5%左右,相比姜黄素稳定性得到了极大提高。纳米粒体外抗肿瘤活性研究表明,所制备的纳米粒对HepG2细胞仍然具有较好的抑制作用,经48h处理后,其IC50为40.61μmol/L,但相比姜黄素15.76μmol/L有所下降,表现为减毒效应。结论 PPCO纳米粒呈均匀球形、载药量高,稳定性好,并有较好的体外抗肿瘤活性。

槲皮苷衍生物的合成及药理作用研究

目的：初步探讨槲皮苷衍生物3＇,4＇,5,7-四-（O-甲氧羰甲基）槲皮苷的合成及对心肌缺血的作用。方法：以槲皮苷为原料,N,N-二甲基甲酰胺（DMF）为溶剂,在无水碳酸钾存在下,缓慢滴加氯乙酸甲酯,在3＇、4＇、5、7位引入醚键,预得到目标产物3＇,4＇,5,7-四-（O-甲氧羰甲基）槲皮苷。化合物结构经LC-MS、1H-NMR进行了表征。利用薄膜分散法将产物3＇,4＇,5,7-四-（O-甲氧羰甲基）槲皮苷制成纳米乳,通过腹腔注射给药,观察其对垂体后叶素诱导的心肌缺血大鼠心血管系统的作用。结果：合成了3＇,4＇,5,7-四-（O-甲氧羰甲基）槲皮苷,体外代谢试验证明该产物大部分被代谢为末端游离羧基的去甲基产物,极性明显增大。心电图及动物试验结果显示产物对垂体后叶素致心肌缺血大鼠有一定的抗心肌缺血作用。结论：3＇,4＇,5,7-四-（O-甲氧羰甲基）槲皮苷制成纳米乳腹腔注射对静脉注射垂体后叶素的心肌缺血模型大鼠有明显的对抗作用。

山核桃叶提取物体外对HepG2细胞增殖抑制作用研究

目的研究山核桃叶提取物体外对人肝癌细胞株HepG2的抑制作用及其可能机理,为进一步开发利用山核桃奠定基础。方法采用系统溶剂法将山核桃叶70%乙醇浸膏分成五个部位,然后通过MTT法观察其对人肝癌细胞株HepG2的抑制作用,并通过吖啶橙染色法和流式细胞术观察其诱导凋亡作用。结果山核桃叶氯仿层和石油醚层对HepG2细胞均具有较强的增殖抑制作用,氯仿层相对较强,IC50为(49.70±4.42)mg.L-1,并可剂量依赖性诱导HepG2发生细胞凋亡,其中100mg.L-1处理组凋亡率达28.0%。结论山核桃叶氯仿层中和石油醚层含有抗肿瘤活性成分,其中诱导细胞凋亡是氯仿层提取物发挥抗肿瘤活性的作用机理之一,值得进一步深入研究。

浙江塘栖产不同品种枇杷叶的最佳采收期研究

目的:研究不同采收期的浙江塘栖产各品种枇杷叶的药材品质,确定塘栖产枇杷叶的最佳采收时间。方法:采用反相高效液相色谱法测定不同采收时间的各品种枇杷叶中的齐墩果酸、熊果酸和总黄酮含量。结果:浙江塘栖产各品种枇杷叶中,齐墩果酸含量在4～5月份最高,其次是9～10月份;熊果酸的含量在一年中的变化较小;黄酮类成分槲皮素和山柰酚的含量随采摘时间的变化明显,且变化趋势基本相同,其中4～5月份含量最高,7～8月份含量最低,9月份开始黄酮含量逐渐升高。结论:考虑到浙江塘栖枇杷果实的生长,塘栖各品种枇杷叶的最佳采摘时间为9～10月份。

塘栖产枇杷叶的药材品质分析

目的评估塘栖产不同品种枇杷叶的药材品质。方法参照2015版《中国药典》,采用烘干法、灼烧法、热浸法分析测定塘栖产不同品种枇杷叶的水分、总灰分和浸出物含量;采用Kromasil C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-甲醇-0.5%醋酸铵(67∶12∶21,v/v/v)为流动相,柱温25℃,流速为1.0 m L/min,检测波长为210 nm,对齐墩果酸和熊果酸的含量进行测定。采用Kromasil C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.4%磷酸水溶液(50∶50,v/v)为流动相,柱温30℃,流速为1.0 mL/min,检测波长为360 nm,对槲皮素和山奈酚的含量进行测定。结果塘栖产各品种枇杷叶水分、总灰分、浸出物含量范围分别为7.87%～9.45%、5.14%～6.22%、25.41%～29.68%;齐墩果酸和熊果酸的含量总和范围为1.04%～1.25%,均符合2015版《中国药典》的标准;此外,枇杷叶中的槲皮素和山奈酚的总含量范围为0.17%～0.29%。结论塘栖产地的不同品种枇杷叶均具有较好的品质,值得进一步开发利用。

吴晋兰运用经方治疗内科杂症验案举隅

吴晋兰主任中医师系第二批全国优秀中医临床人才、浙江省基层名中医、杭州市名中医，长期从事中医临床与科研工作，善于运用经方辨证诊治内科杂症。笔者有幸随师学习，受益匪浅，现将其运用经方治疗内科杂症验案三则介绍如下。

虎刺提取物抗炎作用的初步研究

目的:探讨虎刺水提物和醇提物的抗炎作用。方法:(1)采用二甲苯诱导小鼠耳肿胀,实验分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组(地塞米松5 mg/kg)、虎刺水提物低(0. 6 g/kg)、中(1. 2 g/kg)、高(2. 4 g/kg)剂量组和醇提物低(0. 6 g/kg)、中(1. 2 g/kg)、高(2. 4 g/kg)剂量组,每组10只,给药7 d,检测各组大鼠耳肿胀度和肿胀抑制率;(2)采用角叉菜胶诱导大鼠足肿胀,实验分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组(地塞米松5 mg/kg)、虎刺水提物低(0. 4 g/kg)、中(0. 8 g/kg)、高(1. 6 g/kg)剂量组和醇提物低(0. 4 g/kg)、中(0. 8 g/kg)、高(1. 6 g/kg)剂量组,每组10只,给药7 d,检测各组大鼠足肿胀度和血清TNF-α、IL-1β。结果:(1)虎刺水提物中(1. 2 g/kg)、高(2. 4 g/kg)剂量组和醇提物中(1. 2 g/kg)、高(2. 4 g/kg)剂量组能有效抑制小鼠耳肿胀;(2)虎刺水提物各剂量组能显著抑制大鼠足肿胀;虎刺水提物各剂量和醇提物中(0. 8 g/kg)、高(1. 6 g/kg)剂量组能抑制TNF-α、IL-1β水平。结论:虎刺水提物和醇提物具有一定的抗炎作用,可抑制炎症因子水平。

虎刺提取物对佐剂性关节炎大鼠治疗作用及机制探讨

目的:通过佐剂性关节炎大鼠(AA大鼠)模型探究虎刺水提取和醇提物对类风湿性关节炎(RA)的治疗作用及其机制。方法:采用弗氏完全佐剂诱导大鼠关节炎,大鼠随机分成9组:正常对照组、模型对照组、阳性药对照组(甲氨蝶呤3 mg/kg)、虎刺水提物低剂量(0.4 g/kg)、中剂量(0.8 g/kg)、高剂量(1.6 g/kg)组和虎刺醇提物低剂量(0.4 g/kg)、中剂量(0.8 g/kg)、高剂量(1.6 g/kg)组,每组10只。观察大鼠体质量、足肿胀度、关节炎评分指数、免疫器官(胸腺、脾脏)指数及血清中细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10)的变化。结果:在给药第14 d后,虎刺水提物低剂量、中剂量、高剂量组和醇提物中剂量、高剂量组能抑制AA大鼠足肿胀;虎刺水提物低剂量、中剂量、高剂量组和醇提物高剂量组关节炎指数低于模型对照组;虎刺水提物和醇提物各组别的胸腺指数均高于模型对照组;虎刺水提物中剂量、高剂量)组和醇提物高剂量组均能改善降低炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平,升高IL-10水平。结论:虎刺水提物和醇提物能有效改善AA大鼠关节炎症,提示虎刺具有一定抗类风湿性关节炎(RA)作用。该抗RA作用可能与调节细胞因子水平和免疫保护作用相关。

乌梢蛇的抗炎镇痛作用

目的:研究乌梢蛇提取液各部位的抗炎及镇痛作用,为乌梢蛇临床应用提供科学依据。方法:采用热板法、冰醋酸刺激致痛法研究乌梢蛇提取液各部位对小鼠痛阈的影响,利用二甲苯致小鼠耳廓炎症模型和腹腔染料渗出法测定乌梢蛇提取物的抗炎作用。结果:乌梢蛇提取物水溶性部位250mg/kg、375mg/kg能明显延长小鼠热板痛阈时间,减少醋酸致小鼠扭体次数,对二甲苯致小鼠耳廓肿胀、冰醋酸致腹腔毛细血管通透性增高均有明显的抑制作用。结论:乌梢蛇提取物水溶性部位有一定的抗炎及镇痛作用。

蕲蛇水提液对佐剂性关节炎大鼠的免疫调节作用

目的:研究蕲蛇水提液对佐剂性关节炎(AA)模型大鼠的治疗作用,并探讨其作用机制。方法:制备完全弗氏佐剂诱导的Wistar大鼠AA模型并进行随机性分组,分为空白组、模型组、阳性组(塞来昔布给药组)、蕲蛇低剂量组、蕲蛇中剂量组、蕲蛇高剂量组,每组10只。连续给药20d,采用容积法测量关节肿胀程度,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)的表达水平。结果:与模型组比较,不同剂量的蕲蛇水提液均能显著降低大鼠右后足跖肿胀度(P<0.01),使炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平均显著降低(P<0.01),且对不同炎性细胞因子的抑制强度与阳性组相比有所不同。结论:蕲蛇提取液对AA大鼠关节炎症有一定的治疗作用,其治疗机制可能是通过口服免疫耐受机制产生免疫调节作用抑制炎性细胞因子实现的。

碱水解转化-紫外分光光度法测定聚乙二醇负载葛根素前药的载药量研究

目的:建立聚乙二醇负载葛根素前药的载药量测定方法。方法:将葛根素溶于不同浓度的氢氧化钠溶液中在60℃水浴中进行水解,HPLC跟踪筛选出较适宜的水解方法,并将水解产物用NMR进行表征。将葛根素前药通过相应方法水解后,紫外分光光度法测定其水解产物吸光度从而确定葛根素前药载药量。结果:实验发现,葛根素在1 mol.L-1氢氧化钠溶液60℃水浴孵育30 min后水解完全,水解后葛根素转化形成的产物经结构鉴定为二氢葛根素,该物质在碱性溶液中在336 nm处有稳定吸收峰,并且在1.378～28.947μg.mL-1范围内浓度与吸光度呈良好的线性关系,回归方程为:Y=0.0432X+0.077,r=0.9996;平均回收率为99.1%。结论:本方法简便、快速、准确且成本低,可用于葛根素前药的质量控制。