Senp1介导蛛网膜下腔出血后神经元焦亡的作用

目的探究SUMO特异性蛋白酶1(SUMO-specific protease 1,Senp1)在蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)中参与神经元焦亡的机制。方法95只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为假手术(sham)组(n=15)、SAH(6、12、24、48、72 h)组(n=8、7、17、6、6)、SAH+AAV9-NC组(n=19)、SAH+AAV9-sh-Senp1组(n=17),左侧颈内动脉血管内穿刺建立SAH动物模型,神经行为学评分评价神经功能,HE染色、FJC染色观察脑皮质神经元损伤情况,RT-PCR检测敲低Senp1的mRNA水平,Western blot检测各组Senp1、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)、焦孔素D(gasdermin D,GSDMD)、含PYD和CARD域蛋白(PYD and CARD domain containing,ASC)及半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)的表达,免疫荧光观察Senp1和NLRP3的定位表达。结果SAH后Senp1表达升高,于24 h达到峰值,并表达于脑皮质神经元。与sham组相比,SAH组Senp1、NLRP3、GSDMD、ASC和Caspase-1的表达明显升高(P<0.01),神经损伤加重,并且有神经功能障碍;与SAH+AAV9-NC组相比,给予AAV9-sh-Senp1后神经损伤及功能明显改善,Senp1及上述焦亡蛋白NLRP3、GSDMD、ASC、Caspase-1表达明显降低(P<0.01),抑制了NLRP3介导的神经元焦亡。结论Senp1在SAH后促进细胞焦亡的发生,介导神经元损伤。

Rasd1促进少突胶质细胞铁死亡加重大鼠蛛网膜下腔出血后白质损伤

目的 探索Rasd1(ras related dexamethasone induced 1)在SD大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage, SAH)后通过神经元-少突胶质细胞间通讯参与白质损伤(white matter injury, WMI)的机制。方法 将90只雄性SD大鼠(体质量180~250 g)采用随机抽签的方法分为假手术组、SAH组、SAH+LV-NC组、SAH+LV-Rasd1组和SAH+sh-Rasd1组,最终每组12只。利用血管内穿刺法构建大鼠在体SAH模型,侧脑室注射Rasd1基因过表达/敲低慢病毒,神经行为学评分检测神经功能变化,透射电镜检测胼胝体区域髓鞘脱失情况和少突胶质细胞铁死亡的发生情况,普鲁士蓝染色检测铁沉积,试剂盒检测丙二醛(malonic dialdehyde, MDA)和谷胱甘肽(glutathione, GSH),PCR检测Rasd1 mRNA的表达情况,Western blot检测核受体辅激活蛋白4(nuclear receptor coactivator 4,NCOA4)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、2’,3’-环腺苷酸-3’-磷酸二酯酶(2’,3’-cyclic-nucleotide 3’-phosphodiesterase, CNPase)和铁蛋白(Ferritin)的表达。结果 SAH后,Rasd1升高(P<0.01)并主要表达于皮层神经元中,出现髓鞘脱失,少突胶质细胞铁死亡;过表达Rasd1后,大鼠神经行为学评分显著降低,髓鞘脱失、少突胶质细胞铁死亡和铁沉积明显加重,MDA升高(P<0.01)、GSH下降(P<0.01)、NCOA4升高(P<0.01)、Ferritin和GPX4下降(P<0.01);敲低Rasd1后,大鼠神经行为学评分明显升高,髓鞘脱失、少突胶质细胞铁死亡和铁沉积显著减轻,MDA下降(P<0.01)、GSH升高(P<0.01)、NCOA4下降(P<0.01)、Ferritin和GPX4升高(P<0.01)。结论 Rasd1在蛛网膜下腔出血后通过铁自噬促进少突胶质细胞铁死亡,从而参与蛛网膜下腔出血后白质损伤。

黄芪多糖(APS)及联合顺铂(DDP)抑制小鼠Lewis肺癌复发瘤生长的机制

目的观察黄芪多糖(APS)及联合顺铂(DDP)对小鼠Lewis肺癌术后复发瘤病理形态及转移相关蛋白CD44、CD62P和骨桥蛋白(OPN)表达的影响。方法选取C57BL/6J小鼠10只作为供瘤组,另外80只随机分为模型组、(50、100、200)μg/mL APS处理组、6 mg/kg DDP处理组、3 mg/kg DDP联合(50、100、200)μg/m L APS处理组,每组10只。取供瘤组小鼠瘤组织制备Lewis瘤单细胞悬液接种于每只小鼠左侧后肢爪垫内侧皮下10 d后,切除爪垫瘤组织,建立肺癌术后复发转移模型;造模次日起给药,第16天脱颈处死。采用HE染色法观察术后复发瘤组织病理形态,免疫组织化学染色法检测复发瘤中CD44、CD62P和OPN的表达。结果与模型组相比,各处理组复发瘤组织坏死加重,尤以DDP联合200μg/mL APS处理组更明显,且各处理组CD44、CD62P和OPN蛋白的表达均有降低,以DDP以及DDP联合(100、200)μg/m L APS处理组最为显著。结论DDP联合APS能抑制Lewis肺癌细胞生长并降低瘤组织CD44、CD62P和OPN蛋白表达。