2024年监测中心第四季度禽病检测动态

2024年第四季度本实验室共接收家禽临床送检样品2132份。利用PCR或荧光定量PCR方法对家禽主要疫病病原进行检测。结果发现:鸡病原中,以免疫抑制和呼吸道疾病为主,其中位居前三位的是鸡传染性贫血病病毒(CIAV)、鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)和鸡传染性支气管炎病毒(IBV),阳性检出率分别为26.78%、23.21%和19.64%。鸭病原中,鸭新型呼肠孤病毒(D-REOV)占首位,其次是鸭圆环病毒1型(DCV-1)和鸭甲肝病毒1型(DHAV-1),阳性检出率分别为28.07%、19.30%和12.28%。进一步对DHAV-1和鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)毒株的VP1基因分别进行遗传演化分析,结果证实,近年的DHAV-1流行毒株之间高度同源,而与过去的经典毒株具有一定的差异,且处于不同的遗传演化分支。DHAV-3流行株呈现出与DHAV-1相同的规律。鹅病原中,鸭坦布苏病毒(DTMUV)的阳性检出率最高,为25.81%;其余依次为番鸭呼肠孤病毒(MD-REOV)为22.58%、鹅圆环病毒1型(GCV-1)为19.35%。

一例鹦鹉肺炎克雷伯菌感染的诊断报告

山东省某养殖场饲养的12日龄鹦鹉出现呼吸困难、鼻腔内充满干酪样分泌物等症状,采集死亡鹦鹉的鼻腔内分泌物和肺脏组织分离细菌,通过生化试验、16S rDNA测序和系统进化树分析,初步证实该病由肺炎克雷伯菌肺炎亚种所致。药物敏感性试验结果显示,该分离菌对大部分药物耐受,仅对氟苯尼考、氧氟沙星等药物高度敏感,对多粘菌素B、阿米卡星等药物中度敏感。本研究为鹦鹉肺炎克雷伯菌感染的临床诊治提供了理论依据和参考。

2024年监测中心第二季度禽病检测动态

2024年第二季度实验室共接收家禽临床送检样品1924份。利用PCR或荧光定量PCR方法对家禽主要疫病病原进行检测,结果发现:鸡病原中,以免疫抑制和呼吸道疾病为主,其中位居前三位的是鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)和环形病毒属病毒(Gyrovirus),阳性检出率分别为41.12%、19.63%和19.62%。分别对IBDV分离毒株VP2基因和IBV分离毒株S1基因进行遗传进化分析,发现2024年的IBDV流行株以超强毒株和新型变异株为主,GI-19基因型IBV仍是2024年流行的优势流行株。鸭病原中,鸭圆环病毒1型(DCV-1)占首位,阳性检出率为32.31%;其次为鸭新型呼肠孤病毒(D-REOV)和细小病毒(GPV),阳性检出率分别为23.08%和18.46%。鹅病原中,细小病毒(GPV)占居首位,阳性检出率为27.50%;其次为番鸭呼肠孤病毒(MD-REOV)和鹅星状病毒(GastV),阳性检出率分别为25.00%和22.50%。

2019-2023年山东省鸡主要疫病流行动态分析及其防控对策

本文通过临床症状、病理剖检,结合分子病原学检测技术等对2019-2023年送检的鸡疑似病例进行实验室综合诊断发现:近五年来,家禽呼吸道疾病居高不下,种源性疫病不断攀升,免疫抑制性疾病潜在危害突出。其中呼吸道疾病病原仍以传染性支气管炎病毒(IBV)、H9亚型禽流感病毒(AIV-H9)的危害最为严重;种源性疾病病原位居前三位的是鸡传染性贫血病毒(CIAV)、腺病毒I群(Fad V-I)和滑液囊支原体(MS);免疫抑制病病原以传染性法氏囊炎病毒(IBDV)最为突出;肿瘤疾病病原中马立克病病毒(MDV)占居首位。选取上述鸡主要病原IBV、AIV-H9、CIAV、IBDV、MDV的关键基因进行测序,分析其遗传演化动态,以期对未来家禽的健康生产提供服务和指导。

2023年监测中心第四季度禽病检测动态

1鸡病原检测结果统计分析,2023年10~12月共收到鸡疑似病例样品1243份。检测结果显示,以呼吸道疾病病原和免疫抑制性病原相对较高,肝损伤性病原相对减少。其中,在呼吸道疾病病原中,以鸡传染性支气管炎病毒(IBV)居多,IBV的阳性检出率为51.75%;其次是H9亚型禽流感病毒(AIV-H9)和鸡滑液囊支原体(MS)。

2024年监测中心第三季度禽病检测动态

2024年第三季度实验室共接收家禽临床送检样品1442份。利用PCR或荧光定量PCR方法对家禽主要疫病病原进行检测。结果发现:鸡病原中,以免疫抑制和呼吸道疾病为主,其中位居前三位的依次是鸡传染性贫血病毒(CIAV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)和马立克氏病毒(MDV),阳性检出率分别为43.75%、22.5%和8.75%。分别对CIAV毒株VP1基因和MDV毒株Meq基因进行遗传进化分析,发现CIAV在遗传演化过程中相对稳定,免疫压力下仍能检测到MDV强毒,其毒力变化尚待进一步研究。鸭病原中,鸭新型呼肠孤病毒(D-REOV)占首位,阳性检出率为25.0%;其次为鸭圆环病毒1型(DCV-1)和细小病毒(GPV),阳性检出率分别为23.21%和21.43%。鹅病原中,细小病毒(GPV)占居首位,阳性检出率为42.11%;其次为番鸭呼肠孤病毒(MD-REOV)和鹅星状病毒(GastV),阳性检出率分别为26.32%和15.79%。

2024年监测中心第一季度禽病检测动态

2024年第一季度实验室共接收家禽临床送检样品1 480份,利用PCR或荧光定量PCR方法对家禽主要疫病病原进行检测,结果发现鸡病原以呼吸道疾病病原和免疫抑制性病原占绝对优势,其中位居前三位的是传染性法氏囊病毒(IBDV)、H9亚型禽流感病毒(AIV-H9)和鸡传染性支气管炎病毒(IBV),阳性检出率分别为28.13%、22.92%和21.88%。鸭病原中鸭圆环病毒1型(DCV-1)占首位,阳性检出率为21.43%,其次为鸭新型呼肠孤病毒(D-REOV)和鸭肠炎病毒(DPV),阳性检出率分别为19.05%和16.67%。鹅病原中番鸭呼肠孤病毒(MD-REOV)占居首位,阳性检出率为34.62%,其次为鹅星状病毒(GastV)、细小病毒(GPV)和鸭圆环病毒1型(DCV-1),阳性检出率均为15.38%。

王子瑜教授从“血瘀”论治子宫内膜异位性疾病经验

介绍王子瑜教授从“血瘀”论治子宫内膜异位性疾病的经验。王子瑜教授认为此类疾病的病机为离经之瘀血阻滞胞宫冲任。根本治则是活血化瘀消癥,并研制院内制剂乌丹丸、妇科痛经丸、桂苓消癥丸,临床使用30余年,效果显著。总结瘀血之气滞、寒凝、热郁、痰凝、湿热、气虚、阳虚、肾虚八大成因并提出化瘀八法。王子瑜教授的治疗特色:化瘀为主,标本、虚实、寒热兼顾;按周期规律分期论治;汤剂与丸剂相结合并善于运用粉剂;药性平和、寒温适宜,药味精简、善用小方药对。附病案1则,以资佐证。

补肾增液汤加减联合左卡尼汀对弱精子症患者精液参数及IVF-ET相关指标的影响

目的:探究补肾增液汤辩证加减联合左卡尼汀对弱精子症患者精液参数、体外受精-胚胎移植(IVF-ET)指标的影响。方法:收集2020年1月-2022年1月在本院中心行IVF周期治疗弱精子症94例临床资料,按治疗方式分为对照组(n=41例,左卡尼汀治疗)与联合组(n=53例,补肾增液汤辩证加减联合左卡尼汀治疗),疗程12周,比较两组治疗效果、治疗前后精液质量分析、性功能及IVF周期相关指标。结果:治疗后,联合组精液量(3.71±0.75ml)、精子浓度(30.05±5.75)10^(6)个/ml、精子存活率(58.63±10.14)%、a+b级精子率(66.65±10.45)%均高于对照组[(3.08±0.89ml)、(27.63±5.07)10^(6)个/ml、(53.17±8.45)%、(60.74±8.71)%];勃起信心(3.65±0.46分)、勃起时间(3.89±0.35分)、勃起维持时间(3.63±0.45分)、性交困难(4.35±0.25分)、性满足(4.05±0.21分)及总分(19.57±1.72分)均高于对照组(3.37±0.31分、3.41±0.29分、3.23±0.23分、4.11±0.16分、3.33±0.15分、17.45±1.14分);受精率(82.8±5.1)%、优质胚胎率(56.9±10.3)%、可移植胚胎数目(2.4±0.5个)及临床妊娠率(60.0%)均高于对照组[(81.0±3.7)%、(48.5±8.0)%、1.5±0.5个、37.5%];治疗总有效率(90.6%)高于对照组(73.2%)(均P<0.05)。结论:补肾增液汤辩证加减联合左卡尼汀可提高弱精子症患者精液质量,改善患者性功能,有利于改善IVF-ET周期指标,提高IVF-ET成功率。

基于数据挖掘探讨王子瑜教授治疗子宫内膜异位性疾病用药规律

目的 探讨王子瑜教授治疗子宫内膜异位性疾病(EMD)的用药规律。方法 收集2005年1月至2015年12月北京中医药大学东直门医院王子瑜教授治疗EMD的处方信息,采用SPSS 20.0、SPSS Modeler 18.0软件分析药物的使用频次、四气、五味与归经,根据系统聚类与关联规则方法分析中药的常用组合。结果 收集中药处方502首,涉及中药132味,排名前10位中药均有活血作用。中药药性以温、平、微寒为主,药味以苦、辛、甘常见,多归肝、脾经。聚类分析将高频中药聚为8类,关联规则分析显示已知药对的关联性较强,并挖掘出数对未知药对,当归-赤芍-丹参可能是核心药物组合。院内制剂乌丹丸的使用远多于其他中成药。结论 王子瑜教授治疗EMD以活血消癥为核心治法,寒温并用、攻补兼施,临床处方精简,用药灵活,擅长配伍活血药。

A型塞内卡谷病毒SDMY-CH-2021的分离鉴定及全基因组序列分析

为了查明山东省某养猪场水疱性传染病的病原体,试验采集了该养猪场猪只的水疱皮病料,并采用RT-PCR、病毒分离纯化、基因测序及分子生物学分析等方法对样品进行了病毒分离、鉴定和全基因组序列测定。结果表明:确诊该养猪场猪只发生水疱性传染病的病因为A型塞内卡谷病毒(SVA)感染,同时排除了猪口蹄疫病毒和猪水疱病病毒混合感染的情况,并成功分离到一株SVA,命名为SDMY-CH-2021株。该分离株在BHK-21细胞中盲传3次可引起明显的致细胞病变效应,噬斑纯化3代测定其TCID_(50)为1×10^(-8.2)/100μL;基因全长为7388 bp,开放阅读框大小为6546 bp,编码2181个氨基酸。与参考毒株相比,该分离株与广州分离株CH-01-2015和武汉分离株HB-CH-2016亲缘关系较近;VP1蛋白氨基酸序列与美国首个分离株SVV-001的VP1蛋白氨基酸序列相似性最低,为92.5%;VP1蛋白存在9个B细胞线性抗原表位,相较于参考毒株VP1蛋白的氨基酸序列存在多处突变及缺失。说明分离株SDMY-CH-2021发生了部分基因变异。

全麻术后患者手术室转至麻醉恢复室交接核查单的优化及应用

目的优化全麻术后患者手术室转至麻醉恢复室交接核查单并探讨其应用效果。方法采用便利抽样法,选取麻醉科140例全麻术后患者为研究对象,对照组采用科室传统交接单对患者进行交接;试验组优化全麻术后患者手术室转至麻醉恢复室交接核查单并应用于患者交接,采用边核查边打钩形式记录,交接时间控制在5 min内。比较2组交接中各类不良事件发生率。结果试验组交接不良事件总发生率较对照组明显下降(P<0.001)。结论该核查单的应用能够规范交接流程,降低交接中各类不良事件的发生率,提高患者交接完整性和安全性。

一例肉鸡传染性支气管炎与H9亚型禽流感混合感染的病例分析

2023年山东某鸡场部分肉鸡发生不同程度的呼吸困难,并伴有零星死亡,死鸡剖检可见气管出血、支气管栓塞、部分鸡有尿酸盐沉积。为探究其发病原因,采集病料进行了常见呼吸道病原的PCR检测。结果显示,此鸡场呼吸道传染病是由禽传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis virus,IBV)与H9亚型禽流感病毒(Avian Influenza virus,AIV)混合感染引起。病料经分离纯化后分别获得一株IBV分离株(SDDZ/202301简称DZ01)和一株H9亚型AIV分离株(SDDZ/202302简称DZ02)。分别对DZ01的S1基因和DZ02的HA基因扩增,测序结果发现,DZ01与参考株核苷酸和氨基酸同源性分别为60.2%~96.7%和50.3%~95.6%,确定为GI-19基因型,与同型参考株相比有13个氨基酸发生点突变,裂解位点为HRRRR,并发现15个N-糖基化位点。AIV H9同源性分析显示DZ02与参考株核苷酸和氨基酸同源性为78.1%~95.1%和79.4%~94.2%,为H9.4.2.5分支,属于山东省内优势毒株。本研究明确了该养殖场中出现了IBV和H9亚型AIV的混合感染,这表明该养殖场仍需加强生物安全管理等方面的工作。

鸭病毒性肝炎病毒VP1基因表达及其抗体检测ELISA方法的建立

【目的】研究DHV VP1基因在大肠杆菌中的表达,并以纯化的重组蛋白为抗原建立鸭病毒性肝炎抗体检测ELISA方法。【方法】采用RT-PCR技术,扩增VP1基因,与pMD18-T载体进行连接,构建DHV VP1基因克隆重组质粒。然后定向插入到pET-32a(+)表达载体,筛选原核表达载体pET-32a-VP1,进行ITPG诱导表达分析。以纯化的重组蛋白为抗原建立间接ELISA方法并初步应用于临床。【结果】DHV VP1基因可在大肠杆菌中稳定、高效地表达。Western blot检测表明,表达的重组蛋白能与鸭肝炎阳性血清发生特异性反应。确定间接ELISA方法的抗原最佳包被浓度为5μg/孔,血清最佳稀释度为1∶100,临界值为OD450值≥0.302,建立的ELISA方法具有较好的敏感性、特异性和重复性。通过对80份血清样品的检测表明,该方法与中和试验的符合率为97.5%,初步临床应用结果表明该方法可用于雏鸭母源抗体和免疫后抗体的消长变化的检测。【结论】以大肠杆菌表达的DHV VP1重组蛋白为抗原建立的间接ELISA方法可用于鸭病毒性肝炎抗体的检测。

宫颈高危型HPV感染的症状体征特点和中医证型分布

目的:探讨宫颈高危型HPV感染的症状体征特点和中医证型规律,为中医药防治提供依据。方法:回顾整理122例病例并总结上述规律。结果:主要临床症状为白带异常(57.38%)、性交出血(21.32%)、异常流血及腰痛(各19.67%)等,无症状者占18.85%。主要异常体征为柱状上皮异位。中医证候以脾系证候为主,证型以湿热下注为最多(占40.40%)。结论:宫颈高危型HPV感染早期多数无症状和异常体征,病情进展主要出现白带异常、性交出血、阴道异常流血、柱状上皮异位等,中医证型以湿热下注为主。

鸡传染性法氏囊病间接ELISA诊断试剂盒的研制及初步应用

采用 vero细胞增殖的 IBDV抗原建立了间接 EL ISA,用于定量检测 IBDV抗体。对该方法进行了标准化研究 ,确立了该方法的最佳工作条件。在此基础上研制了相应的诊断试剂盒 ,并对盒内各组分的性状、保存、质量控制以及诊断试剂盒的特异性、敏感性、可重复性、符合率、与国外同类产品的比较、保存期等进行了全面、详细的研究。结果表明 ,研制的试剂盒在 - 2 0℃保存至 6个月时各项性能都很好。该试剂盒与进口试剂盒对同样血清样品检测 ,符合率为86 .7%。间接 EL ISA试剂盒与琼扩试验的符合率为 92 .5 %。该试剂盒可对大量血清样品进行检测 ,操作简单方便、结果特异性强、敏感性高、快速 ,更适合于大型鸡场 IBD免疫抗体水平的监测及现地疫病诊断等需要。

紫柏凝胶治疗宫颈高危型人乳头瘤病毒感染临床研究

目的观察中药复方紫柏凝胶治疗宫颈高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染的疗效,为中药治疗HR-HPV提供临床依据。方法收集中医诊断为湿热下注型带下病的宫颈HR-HPV感染者62例,治疗组32例用紫柏凝胶治疗,对照组30例不用药随诊观察,2个疗程后比较疗效。结果治疗组和对照组症状、体征评分和痊愈率分别为28.12%(9/32)、3.33%(1/30),有效率分别为90.63%(29/32)和30.00%(9/30),治疗组明显优于对照组(P<0.01);病毒载量治愈率分别为37.5%(12/32)和10.00%(3/30),有效率分别为81.25%(28/32)和53.33%(16/30),治疗组明显优于对照组(P<0.05)。治疗组阴道镜Reid评分较对照组明显降低(P<0.01);治疗组宫颈液基薄层细胞学检测和病理特征均有明显改善,优于对照组。结论紫柏凝胶能有效改善宫颈HR-HPV感染者的临床症状、体征,显著降低病毒载量,改善宫颈细胞学检测及组织病理学指标,是治疗宫颈HR-HPV感染的有效药物。

7株鸭肝炎病毒分离株及疫苗株的全基因组序列测定与变异分析

为了分析中国鸭肝炎病毒(DHV)的遗传变异和进化关系,作者测定了中国不同地区分离的7株DHV及1株疫苗株的全基因组序列,并与公布的40株DHV序列进行比较分析。结果发现VP1变异程度较大,高变区主要集中在180-194位和213-219位;不同毒株的潜在N-糖基化位点存在较大差异。多数基因的进化分析均表现出一致的结果,测序的8个毒株均分布在同一个遗传谱系,属基因A型,与基因B型和基因C型遗传距离较远,不在同一分支上。而JYZ02株与R85952株的遗传距离最近,属同一个亚支,提示JYZ02株可能由毒株R85952演化而来。结合氨基酸序列相似性分析和代表毒株的血清交叉中和试验结果,表明近年分离并测序的上述7个毒株未发生抗原变异。从多毒株进化分析结果可以看出,血清1型DHV仍是我国流行的优势血清型。

一株韩国新型DHV的分离及RT-PCR鉴定

从山东省某疑似鸭肝炎发病区分离到1株病毒JFX08,血清中和试验结果表明该分离毒与传统的Ⅰ型鸭肝炎病毒无交叉保护,分离毒回归3日龄雏鸭,可复制出鸭肝炎的典型症状和病理变化。根据已公布的韩国新型（基因C型）DHV的序列设计合成一对引物,进行RT-PCR扩增,得到大小约414 bp的目的条带;测序分析发现,分离毒与传统Ⅰ型DHV之间的相似性较低,而与韩国新型DHV之间的相似性高达93.2%~94.0%;进化分析结果表明,该分离毒与韩国新型DHV的遗传距离最近,属基因C型DHV。

PCR用于鸭瘟病毒诊断的研究

根据鸭瘟病毒UL6和UL7基因序列,设计合成了一对引物,以2株疫苗株1、株强毒株和1株山东分离株DNA为模板,进行PCR扩增,得到预期690 bp的目的片段。将扩增的目的片段克隆到pMD18_T载体,经Amp平板筛选,HindIII、BamHI双酶切鉴定,获得阳性重组质粒。对重组质粒进行序列测定,与参考序列比较,山东分离株与参考序列的同源性为99.7%,其余3株DPV与参考序列的同源性均为100%。应用PCR可检测人工感染和自然感染鸭瘟的组织中的鸭瘟病毒,表明PCR检测鸭瘟病毒具有很高的特异性、敏感性,该法能够用于鸭瘟急性及亚临床感染的检测与诊断。