脊椎动物雌雄生长差异的研究进展

综述了有关脊椎动物雌雄生长差异的研究,分别从摄食消化、生长与生殖能量配置、物种遗传、基因型与表现型、类固醇激素水平和生长轴基因表达等几个方面分析了脊椎动物雌雄生长差异的原因。

尼罗罗非鱼生长激素及其受体的cDNA克隆与mRNA表达的雌雄差异

尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)雌雄鱼生长差异明显,为了探讨其原因,本文采用RT-PCR方法克隆了尼罗罗非鱼生长激素(Growthhormone,GH)及其受体(Growth hormone receptor,GHR)的cDNA序列,并应用半定量RT-PCR方法比较了雌、雄尼罗罗非鱼垂体GHmRNA、肝脏GHRmRNA、肌肉GHRmRNA的表达差异。序列分析表明:GH开放阅读框为615bp,共编码204个氨基酸;GHR开放阅读框为1908bp,共编码635个氨基酸。以RT-PCR方法研究了GH、GHR在各组织的分布情况,结果表明:GH仅在垂体中检测到有表达,而GHR在所检测的18种组织中均有表达,其中以肝脏、肌肉、性腺、下丘脑、胸腺表达量较高。以半定量RT-PCR方法进一步比较了雌、雄尼罗罗非鱼垂体GHmRNA、肝脏GHRmRNA、肌肉GHRmRNA的表达量,结果表明:雄鱼垂体GHmRNA和肝脏GHRmRNA的表达量均显著高于雌鱼,肌肉GHRmRNA的表达量则无显著差异,推测垂体GHmRNA和肝脏GHRmRNA表达的雌雄差异是尼罗罗非鱼雌雄生长差异的主要原因之一。

中华乌塘鳢对性外激素嗅电反应的比较

用电生理方法研究中华乌塘鳢嗅上皮对PGE2、PGF2α、17α P和17α,20β P4种人工合成激素和对性成熟中华乌塘鳢贮精囊、精巢、卵巢和性未成熟卵巢4种提取液的嗅电反应(Electro olfactogram,EOG),观察嗅觉对不同刺激物的敏感性以及性成熟度对EOG的影响,以探讨中华乌塘鳢嗅上皮对何种性外激素最为敏感及嗅觉敏感性与性成熟度的关系.结果表明:性成熟鱼嗅上皮对4种人工合成激素的EOG大小顺序为:PGE2>PGF2α>17α P>17α,20β P,雄鱼对PGE2、PGF2α的EOG明显大于雌鱼(P<0.05);性成熟鱼嗅上皮对4种提取液的EOG大小顺序为:性成熟贮精囊液>性成熟精巢液>性成熟卵巢液>性未成熟卵巢液,它们之间的相对刺激有效性(Relativestimuluseffectiveness,RSE)差异在雄鱼为显著(P<0.05),在雌鱼则为极显著(P<0.01);性成熟鱼嗅上皮对性外激素的敏感性明显高于性未成熟鱼(P<0.01).

半胱胺盐酸盐(CSH)对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)生长及生长轴相关基因表达的影响

为了分析半胱胺盐酸盐(CSH)对尼罗罗非鱼生长调节的作用,设计了长期和短期2个实验,采用腹腔注射(剂量100μg/g体重)方法,分析CSH对尼罗罗非鱼绝对生长率、特定生长率、肝体系数和肥满度的影响,并应用荧光实时定量PCR方法检测在注射CSH后不同时段(6h,12h,24h,2周)尼罗罗非鱼垂体GH、肝脏GHR和肝脏IGF-I基因的表达变化。结果表明,CSH组尼罗罗非鱼的绝对生长率、特定生长率、肝体系数、肥满度均显著高于对照组(P<0.05);注射CSH后12h、24h垂体GH和肝脏GHRmRNA表达水平均显著升高(P<0.05),2周后恢复到对照组水平;注射CSH后6h肝脏IGF-ImRNA表达水平显著升高(P<0.05),12h恢复到对照组水平,24h和2周表达水平极显著上升(P<0.01)。以上结果提示,CSH可显著上调尼罗罗非鱼生长轴相关基因的表达,从而促进鱼类的生长。

性类固醇激素E_2、MT对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)雌、雄生长差异的影响

性类固醇激素对动物生长有一定的影响,但其对鱼类雌、雄生长差异的影响机理尚不清楚。为进一步了解动物雌雄生长差异的内在原因,本文通过在体注射和荧光定量PCR方法,比较了性类固醇激素(E_2、MT)对尼罗罗非鱼雌鱼和雄鱼的生长及对垂体GH、肝脏GHR1、IGF-I m RNA表达的影响。结果表明:性类固醇激素E2和MT对尼罗罗非鱼的生长及生长轴相关基因的表达均有显著的影响,并且这种影响存在明显的性别二态性。E_2明显促进雌鱼的生长但不显著影响雄鱼的生长,MT显著促进雄鱼和雌鱼的生长;E2可使雌鱼垂体GH和肝脏GHR1、IGF-I的m RNA水平显著升高(P<0.05),但降低雄鱼垂体GH和肝脏GHR1的m RNA表达;MT显著提高雄鱼垂体GH和肝脏GHR1、IGF-I m RNA水平(P<0.05),但降低雌鱼垂体GH的m RNA表达,促进雌鱼肝脏GHR1 m RNA的表达,但对雄鱼肝脏GHR1的促进作用明显大于雌鱼(P<0.05)。上述结果表明,性类固醇激素对不同性别尼罗罗非鱼的生长及生长轴相关基因的m RNA表达有不同的影响,表现出明显的性别二态性,提示不同性别鱼体内性类固醇激素水平的不同可能是导致尼罗罗非鱼雌雄生长二态性的另一内在原因。

黄鳍鲷(Sparus latus)两种生长激素受体的cDNA克隆及组织表达分析

采用RT-PCR方法克隆了黄鳍鲷两种生长激素受体(Growth hormone receptor,GHR)的cDNA序列,序列分析表明:GHR1开放阅读框为1935bp,共编码645个氨基酸,GHR2开放阅读框为1749bp,共编码583个氨基酸,GHR1与GHR2的氨基酸同源性为36.7%。GHR1和GHR2在分子结构上存在显著差异,GHR1胞外域有7个半胱氨酸残基而GHR2只有6个;GHR1胞内域有9个酪氨酸残基而GHR2只有5个,两者的结构差异表明两者可能具有不同的生物学功能。用Real-timeRT-PCR方法研究了GHR1和GHR2在各组织的分布情况,结果表明:GHR1和GHR2在所检测的10种组织中均有表达,其中以肝脏、肌肉、垂体表达量较高,且在大部分组织中GHR2表达量均高于GHR1。

雄尼罗罗非鱼肝脏2种生长激素受体基因表达的发育性变化

选取同一批30日龄的尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)鱼苗置于水泥池中自然饲养,分别于30、60、80、110、140日龄取样测定不同发育阶段雄鱼的特定生长率。用实时荧光定量PCR方法检测雄鱼肝脏中两种生长激素受体(GHR1和GHR2)的mRNA丰度。结果表明,30～110日龄,雄鱼特定生长率呈不断上升趋势,至80～110日龄达到最高,之后开始下降;雄鱼肝脏中2种GHR基因表达的发育性变化趋势不相同,30～110日龄,GHR1mRNA表达逐渐上升,110日龄达到最高,随后开始下降,其发育性变化与特定生长率显著正相关(R=0.96,P<0.01);GHR2mRNA表达在60日龄达到最高,80日龄急剧下降,之后又缓慢上升,其发育性变化与特定生长率无相关性。提示尼罗罗非鱼生长激素可能主要通过与肝脏中GHR1受体的结合启动其促生长机制,肝脏中GHR1mRNA表达具有显著的年龄依赖性,其表达对尼罗罗非鱼的生长有重要影响。

LHRH-A对尼罗罗非鱼生长及生长轴相关基因表达的影响

促性腺激素释放激素(GnRH)的主要作用是刺激脑垂体促性激素(GtH)的释放,亦可促进鱼类生长激素(GH)的释放。促黄体素释放激素类似物(LHRH-A)是哺乳类GnRH的类似物,为了分析LHRH-A对尼罗罗非鱼生长调节的作用,设计了长期和短期2个实验,采用腹腔注射(剂量0.1μg/g体重)方法,分析LHRH-A对尼罗罗非鱼绝对生长率、特定生长率、肝体系数和肥满度的影响,并应用荧光实时定量PCR方法检测在注射LHRH-A后不同时段(6h、12h、24h、2周)尼罗罗非鱼垂体GH、肝脏GHR和肝脏IGF-I基因的表达变化。结果表明,LHRH-A组尼罗罗非鱼的绝对生长率、特定生长率、肝体系数、肥满度均显著高于对照组(P<0.05);注射LHRH-A后12h、24h垂体GH mRNA表达水平均显著升高(P<0.05),2周后恢复到对照组水平;注射LHRH-A后24h和2周肝脏GHR mRNA表达水平显著上升(P<0.05);注射LHRH-A后6h肝脏IGF-I mRNA表达水平显著升高(P<0.05),12h、24h和2周恢复到对照组水平。以上结果提示,LHRH-A可显著上调尼罗罗非鱼生长轴相关基因的表达,从而促进鱼类的生长。

中华乌塘鳢嗅觉器官的形态结构

中华乌塘鳢(Bostrichthys sinensis Lacepede)样品体长17.0～19.8 cm,性成熟鱼性腺为Ⅳ～Ⅴ期,性未成熟鱼性腺为Ⅱ期.取嗅囊切片、染色、固定.分别以扫描电镜和透射电镜拍照.结果显示,中华乌塘鳢具一对纺锤形嗅囊,由前、后鼻孔与外界相通,嗅上皮向嗅囊腔内突起形成10～16个初级嗅板,初级嗅板上有次级嗅板,可增大嗅上皮的表面积.嗅板由嗅上皮和中央髓两部分构成,中央髓主要由疏松结缔组织和毛细血管构成;嗅上皮排列于中央髓的两侧,由多层细胞组成.扫描和透射电镜观察表明:嗅上皮分为非感觉区和感觉区两部分,非感觉区位于嗅板边缘,较薄且平滑,外缘高倍放大呈指纹状或块状结构;感觉区位于中央部位,呈连续分布,细胞种类多样,表层为纤毛非感觉细胞,中上层为纤毛感受细胞和柱状细胞,中下层为支持细胞,底层为基细胞.纤毛感受细胞为一种双极神经元,树突在上皮表面形成嗅结;轴突则穿过基膜,在固有层内集合成束,形成嗅神经纤维,终止于嗅叶.

不同饥饿时段对黑鲷(Acanthopagrus schlegeli)ghrelin基因表达的影响

设计了黑鲷ghrelin基因的特异性引物,提取胃组织总RNA并扩增出目的片段,将PCR产物克隆到pGEM-T Easy载体,经质粒PCR扩增、酶切和测序鉴定重组质粒,构建标准曲线等,成功建立了ghrelin基因荧光实时定量PCR检测方法,以准确分析ghrelin基因在黑鲷摄食调节中的作用。运用建立的荧光实时定量PCR方法检测了不同饥饿时段(2天、7天)黑鲷胃、肠、下丘脑组织中ghrelin mRNA的表达变化。结果表明,饥饿2天(短期饥饿),黑鲷胃、肠组织中ghrelin mRNA表达显著上升(P<0.05),下丘脑ghrelin mRNA表达无显著变化(P>0.05);饥饿7天(长期饥饿),黑鲷胃、肠组织ghrelin mRNA表达比饥饿2天显著下降,但仍显著高于对照组,下丘脑ghrelin mRNA表达逐渐升高(P<0.05);在同一饥饿时间内不同组织ghrelin mRNA表达存在显著差异(P<0.05)。黑鲷不同组织ghrelin基因的表达随不同饥饿时段呈现出不同的变化趋势,推测ghrelin基因参与了黑鲷摄食调节的生物学过程。

荧光实时定量PCR检测尼罗罗非鱼GH、GHR、IGF-Ⅰ基因方法的建立及初步应用

为了准确分析尼罗罗非鱼生长激素(growth hormone,GH)、生长激素受体(growth hormone receptors,GHRs)和胰岛素样生长因子I(Insulin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)在早期发育阶段的作用,实验设计了尼罗罗非鱼GH、GHR、IGF-Ⅰ基因的特异性引物,提取垂体或肝脏总RNA并扩增出目的片段,将PCR产物克隆到pGEM-TEasy载体,经质粒PCR扩增、酶切和测序鉴定重组质粒,构建标准曲线等,成功建立了GH、GHR、IGF-Ⅰ基因荧光实时定量PCR检测方法。运用建立的荧光实时定量PCR检测了尼罗罗非鱼GH、GHR和IGF-Ⅰ基因表达的发育性变化。结果表明在早期发育阶段,尼罗罗非鱼GH与IGF-Ⅰ,GHR1与GHR2的mRNA表达存在一定的互补关系;GH的表达与GHR1的表达呈显著正相关,提示GH与IGF-Ⅰ,GHR1与GHR2在尼罗罗非鱼早期发育的不同阶段起主导作用,且GH可能主要通过与GHR1的结合起作用。

生物技术大实验教学模式改革

从教学方法、实验内容、实验室管理和教学评价四个方面积极开展生物技术大实验教学课程的改革探索,以建立综合性、设计性和开放性的教学模式,提高学生的积极性,培养学生自主设计实验、独立完成实验的能力,增强学生提出问题、分析问题和解决问题的综合能力。

九孔鲍无公害健康养殖技术

鲍是世界重要的增养殖经济贝类,鲍肉质细嫩,味道鲜美,营养价值高,其贝壳＂石决明＂是名贵的中药材。随着人民生活质量的提高,国内外市场对鲍的需求量巨大,市场前景广阔。由中国台湾省引进的九孔鲍生长速度比大陆产的杂色鲍快,目前九孔鲍已成为中国南方海域贝类养殖的重要种类。

美国有机食品认证及启示

通过对美国有机农业发展、有机食品认证和监督管理的分析,针对我国有机食品认证和管理体制存在的问题提出了对策。

中华乌塘鳢嗅觉器官的形态结构研究

形态解剖、光镜观察表明:中华乌塘鳢(Bostrichthys sinensisLacepede)具一对纺缍形嗅囊,由前、后鼻孔与外界相通,嗅上皮向嗅囊腔内突起形成10-16个初级嗅板,初级嗅板上有次级嗅板,可增大嗅上皮的表面积。嗅板由嗅上皮和中央髓两部分构成,中央髓主要由疏松结缔组织和毛细血管构成;嗅上皮排列于中央髓的两侧,由多层细胞组成。扫描和透射电镜观察表明:嗅上皮分为非感觉区和感觉区两部份,非感觉区位于嗅板边缘,较薄、较平滑,外缘高倍放大呈指纹状或块状结构;感觉区位于中央部位,呈连续分布,细胞种类多样,表层为纤毛非感觉细胞,中上层为纤毛感受细胞和柱状细胞,中下层为支持细胞,底层为基细胞。纤毛感受细胞为一种双极神经元,树突在上皮表面形成嗅结;轴突则穿过基膜,在固有层内集合成束,形成嗅神经纤维,终止于嗅叶。

广州市观赏鱼健康养殖技术调查及分析

观赏鱼因其色泽明艳瑰丽、仪态万千、身形多样、习性有趣动人而广受大众的喜爱,成为时下流行的宠物之选.观赏鱼可分为温带淡水观赏鱼（如中国金鱼、红鲫鱼、日本锦鲤）、热带淡水观赏鱼（如红绿灯、七彩神仙鱼、龙鱼）和热带海水观赏鱼（如红小丑、海马、月光蝶）三大类.目前,人们对观赏鱼健康养殖技术的研究广泛涉及养殖生态环境的保护与修复、养殖系统内部水质调控、病害生物防治技术、绿色兽药研发、优质饲料技术、健康种质资源与育种技术等多个领域,较为广泛使用的有日本最先研究和投入使用的有益微生物群EM （EffectiveMicroorganisms）技术、澳大利亚微生物生态防病技术、美国封闭式养殖系统水质调控技术等[1].

鲍健康养殖新模式

分析了我国鲍养殖业的发展现状和进展,并根据水产健康养殖的科学含义,提出了鲍健康养殖的新模式,即树立健康养殖理念,实施健康养殖;转换养殖模式,实施生态养殖;因地制宜,选择合适的养殖方式;加快饲料研制,实现质优价廉。

推广绿色食品荔枝生产技术的经验与建议

介绍了绿色食品荔枝生产技术推广的主要措施,分析了推广该技术的经济、社会、生态效益,并对进一步推广绿色食品荔枝生产技术提出几点建议。

饲料中锌对花鲈(Lateolabrax japonicus)幼鱼生长、免疫和组织积累的影响

采用单因子实验设计方法,进行饲料中添加锌对花鲈幼鱼生长(增重率、存活率、特定生长率和饲料效率)、免疫反应(血清溶菌酶活性和总补体活性)和组织中锌积累量影响的研究。通过在基础饲料中添加ZnSO4使饲料中锌含量分别达到83.3、95.2、101.6、120.3、159.9mg/kg,对花鲈幼鱼进行为期8周的生长实验,每个水平3个重复,每个养殖单元放养初始体重为(10.0±0.58)g左右的花鲈幼鱼20尾。饲养实验在海水网箱(1.5×1.0×1.0m3)中进行,实验期间水温为26.5—32.5℃,盐度为28—29,溶解氧含量在6mg/L左右。结果表明,各饲料组成活率(95.00%—100.00%)无显著性差异(P>0.05)。随着饲料中锌含量从83.3mg/kg增加到101.6mg/kg,花鲈幼鱼的增重率和特定生长率显著升高(P<0.05),而饲料中锌含量达到101.6mg/kg之后,其增重率和特定生长率变化不显著(P>0.05);以增重率和特定生长率为指标,花鲈幼鱼最佳生长性能的饲料锌含量为103.4mg/kg左右。各饲料组肌肉中锌积累量无显著性差异;随着饲料中锌含量从83.3mg/kg增加到101.6mg/kg,花鲈幼鱼肝脏中锌积累量显著增加(P<0.05),而饲料中锌含量达到101.6mg/kg之后,其肝脏中锌积累量变化不显著(P>0.05);花鲈幼鱼获得肝脏中最大锌积累量时饲料中锌最低含量为105.1mg/kg。随着饲料中锌含量从83.3mg/kg增加到101.6mg/kg,花鲈幼鱼血清溶菌酶和总补体活性显著升高(P<0.05),饲料中锌含量达到101.6mg/kg之后,血清溶菌酶和总补体活性变化不显著(P>0.05)。综上所述,花鲈幼鱼生长和免疫的锌适宜添加量为105.1mg/kg左右。