人食管鳞状细胞癌标本中乳头状瘤病毒DNA的检测

目的食管鳞状细胞癌有明显的地域性差异,它的发生与遗传、环境、饮食和某些微生物的感染有密切的关系,本研究通过检测食管鳞状细胞癌和相应正常食管组织中 HPV-11型和HPV-16型的 DNA,阐明 HPV 与食管鳞状细胞癌的关系.方法用 PCR 的方法检测22位食管鳞状细胞癌患者手术切除的癌组织和相应癌旁正常食管粘膜(共44例标本)中的HPV-11型和 HPV-16型 DNA 的存在情况,并对其中一例 HPV阳性肿瘤标本的 HPV 序列进行测定.结果在本组所涉及的22位患者共计44例标本中,对于HPV-11型,12例癌组织为阳性;有7例癌旁组织为阳性;癌组织和癌旁组织均为阳性的有6例.对于 HPV-16型,6例癌组织为阳性;6例癌旁组织为阳性;癌组织和癌旁组织均为阳性的有3例.序列分析结果表明所测定的序列与 GeneBank 登录的NC001525.1(HPV-11)、M14119.1(HPV-11)和 AF217526.1(HPV-11)的同源性极高,均为99%.结论通过实验结果分析,我们认为食管鳞状细胞癌与 HPV-11型和 HPV-16型主要衣壳蛋白 L1基因密切相关,HPV 可能在一定的地域环境中与食管鳞状细胞癌的发生具有相关性.

兔抗MDA-7/IL-24多克隆抗体的制备和特异性鉴定

目的制备兔抗MDA-7/IL-24抗体,并鉴定其特异性。方法从经PHA刺激培养的人外周血淋巴细胞中用RT-PCR扩增mda-7/IL-24基因,构建带His6-tag的原核表达载体pET-28a(+)-mda-7/IL-24,并在大肠杆菌中表达。将表达产物进行SDS-PAGE后,切下含有目的蛋白的胶条,免疫新西兰纯种大白兔,收集免疫兔血清,用Westernblot检测抗血清与大肠杆菌表达的重组蛋白His6-MDA-7/IL-24和肺癌细胞A549中重组腺病毒Ad.mda-7/IL-24表达产物的反应性。结果经IPTG诱导表达的His6-MDA-7/IL-24融合蛋白的相对分子质量(Mr)约为28000,主要为包涵体形式。Westernblot证实,表达产物可与抗His6单克隆抗体(mAb)特异性结合。1∶5000的抗血清仍能结合His6-MDA-7/IL-24融合蛋白;稀释为1∶1000时,能与重组腺病毒Ad.mda-7/IL-24在A549细胞中的表达产物结合。结论成功地制备兔抗MDA-7/IL-24抗体,该抗体能够识别体外过表达的MDA-7/IL-24蛋白。

黑素瘤分化相关基因-7/白细胞介素-24抑制肺癌细胞增殖

目的:探讨黑素瘤分化相关基因-7/白细胞介素-24(mda-7/IL-24)对非小细胞肺癌细胞系H460增殖的影响。方法:将mda-7/IL-24插入真核表达载体pcDNA3中,构建重组表达载体pcDNA 3-mda-7/IL-24。按照DNA和脂质体(L ipofectam ine)的不同比例,将重组表达载体瞬时转染H460细胞,用RT-PCR检测mda-7/IL-24在不同转染条件下的表达,用MTT法检测转染重组表达载体后对H460细胞增殖的影响。结果:成功构建了mda-7/IL-24的重组表达载体,用SP6引物和mda-7/IL-24上游引物进行RT-PCR分析,在DNA和L ipofectam ine的比例为1μg∶2μl^1μg∶4μl时有目的基因表达。按照1μg∶2μl的比例瞬时转染重组表达质粒72 h后进行MTT分析,结果表明,与未转染细胞和转染空质粒细胞相比,重组质粒pcDNA3-mda-7/IL-24对肺癌细胞H460的增殖有明显抑制作用,抑制率为18.4%。结论:mda-7/IL-24对非小细胞肺癌细胞系H460增殖具有明显的抑制作用。

创伤性膈肌破裂23例诊治体会

我科自１９７８年９月～１９９８年３月收治创伤性膈肌破裂（ｔｒａｕｍａｔｉｃｄｉａｐｈｒａｇｍａｔｉｃｒｕｐｔｕｒｅ，ＴＤＲ）患者２３例，现将诊治体会报告如下。１临床资料与方法本组共２３例，男２０例，女３例。年龄８～６２岁，平均３２．１７岁。刀刺伤８例...

mda-7/IL-24腺病毒对小细胞肺癌NCI-H446细胞增殖的抑制作用研究

目的构建mda-7/IL-24腺病毒,检测其对小细胞肺癌NCI-H446细胞增殖的影响。方法将mda-7/IL-24cDNA亚克隆至腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack-CMV中,在大肠杆菌BJ5183中将重组病毒穿梭质粒和骨架质粒重组。在HEK293细胞中进行病毒包装和扩增,用PCR方法鉴定后,通过TCID50法测定病毒滴度。用滴度为50pfu/细胞的重组腺病毒Ad·mda-7/IL-24感染NCI-H446细胞72h后,经MTT实验检测其对细胞增殖的影响,并用Westernblot方法检测mda-7/IL-24在NCI-446中的表达。结果核酸序列测定和PCR鉴定表明成功构建Ad·mda-7/IL-24;TCID50法测定扩增的腺病毒滴度为2×1010pfu/ml。Ad·mda-7/IL-24在NCI-H446细胞中表达MDA-7/IL-24,MTT检测表明Ad·mda-7/IL-24明显抑制NCI-H446细胞生长,抑制率为21·37%。结论重组腺病毒Ad·mda-7/IL-24能显著抑制NCI-H446细胞增殖,为研究mda-7/IL-24的作用机制及将其用于小细胞肺癌的基因治疗提供了条件。

结肠间置术治疗良性食管疾病40例(英文)

目的 评估结肠间置术用于良性食管疾病治疗的有效性 .方法 回顾总结 1979- 11/ 2 0 0 0 - 0 3我科用结肠间置术治疗 40例良性食管疾病的临床治疗 ,包括食管化学烧伤 36例、先天性食管狭窄 3例和食管失弛缓症术后食管胃吻合口狭窄 1例 .结果 术后死亡 1例 ,死亡率 2 .5 % ;术后并发症率 5 7.5 % (2 3/ 40 ) ,最常见并发症为颈部吻合口瘘 ,发生率为30 % (12 / 40 ) ;患者术后生活质量满意 .结论 本组术后死亡率低 ,疗效满意 ,我们认为结肠间置术是治疗良性食管疾病的有效方法 .

食管癌术后胸胃出血伴近端胃坏死1例

1 病例报告男,47岁,因进行性吞咽困难6mo入院。体格检查未发现阳性体征;上消化道造影及纤维食管镜检查诊断中段食管癌,查无手术禁忌症。1999-06-16经右前外侧开胸和上腹旁正中切口及左颈部切口行食管次全切除、食管胃颈部端侧吻合术,术中发现贲门旁胃后壁上有直径1.0cm大小结节样病灶,随贲门一并切除;术中意外损伤脾门处包膜,创面活动性出血,行脾切除术。术中输血2400mL,未出现低血压状态,术后病理报告为食管鳞状上皮癌和胃贲门旁平滑肌瘤。术后患者生命体征平稳,胃肠减压通畅,引流胃内容物逐日减少,胸透见肺膨胀好,

纤维支气管镜检查的带教体会

0引言 纤维支气管镜检查是普通胸外科医生必须掌握的基本技术．虽然纤维支气管镜仍属较贵重的仪器设备，但对其的各种需求和使用方便，凡一定规模的医院都配备纤维支气管镜，但多归属特设的内镜室，基层医院的胸科医生多不能直接使用它．我科设有内窥镜检查室，长期以来满足了工作需要，为本科年轻医生掌握和进修医生学习纤维支气管镜的使用提供了极好条件．纤维支气管镜检查作为一项非常实用的技术，对胸外科大多数年轻医生和进修医生而言，在接受基础阶段的医学教育时对这项技术有所了解，但不可能真正掌握其使用，在他们初入胸外科工作或学习时，都非常渴望学会使用它，从而能够更好地为患者服务．从培养年轻医生和进修医生进行胸外科工作的角度出发，我们体会到进行有组织的专项学习，注意下述几个方面的问题，能帮助年轻医生迅速掌握纤维支气管镜的使用方法．

胸外科进修医生的教学与实践经验

0引言 基层医院的医生学习医学新知识和掌握医疗新技术的重要途径是进修学习．普通胸外科是专业性非常强的学科，要求医生必须具有一定的理论知识和手术操作技术．作为全军普通胸外科中心，我科每年收治大量的各种胸部疾病患者，日常工作繁忙而紧张，常需面临复杂而紧急的医疗处置，大量基础工作由进修医生完成，如何培训和指导进修医生进行理论学习和临床实践就成为工作的重要组成部分，我们体会到，通过进行有效的适应性培训、促使进修医生加强理论学习和重视基本技能训练，能使进修医生在专业理论、诊疗水平和业务素质等方面获得明显提高．

食管鳞状上皮细胞癌及癌旁组织中HPV11 L1基因克隆及序列比较

目的克隆食管癌组织和癌旁组织中HPV11型主要衣壳蛋白L1基因,并比较两个序列间的同源性。方法以食管癌组织和癌旁组织纯化的总DNA为模板,根据HPV11型L1基因的保守区分段设计引物。分两段扩增HPVL1基因,克隆入质粒载体中,pGEM-3Zf(-)以双脱氧法双向测定目的片段的序列,并拼接出该片段的全序列,比较两个序列间的同源性,以及与已知基因序列的差异性。结果从1例食管癌患者食管癌组织和癌旁组织中,分别克隆到1株HPV11型L1的编码序列M1和M2,两序列间的同源性极高,仅在个别位点存在差异。与GenBank中登录的HPV序列NC001525.1(HPV-11)、M14119.1(HPV-11)和AF217526.1(HPV-11)相比较大部分相同。结论成功地构建了HPV11型L1基因上游片段pGEM-3Zf(-)和下游片段pGEM-3Zf(-)的重组克隆,为深入研究HPV的感染与食管癌发病机制的关系奠定了基础。

食管重建术后胃肠道梗阻的诊断与治疗

食管重建术后胃肠道梗阻是一种少见的手术并发症,文献仅见少数病例报道[1-10].我科1978-01/2000-07在1964例各类疾病行食管重建术后发生胃肠道梗阻16例,现将诊疗体会报告如下.

过表达MDA-7/IL-24蛋白的亚细胞定位

目的了解标签蛋白GFP的位置对过表达的MDA-7/IL-24融合蛋白亚细胞定位的影响。方法分别构建在MDA-7/IL-24 cDNA的5'端和3'端带有GFP-tag的重组表达质粒pEGFP-C1-mda-7/IL-24和pEGFP-N3-mda-7/IL-24,瞬时转染猴胚肾Cos7细胞,48h后用Hoechst 33258染核,在荧光显微镜下观察GFP-MDA-7/IL-24融合蛋白在Cos7细胞的亚细胞分布。结果测序表明重组质粒pEGFP-C1-mda-7/IL-24和pEGFP-N3-mda-7/IL-24构建正确;分别转染Cos7细胞后,在氨基端带有GFP-tag的MDA-7/IL-24融合蛋白表达阳性细胞中,绿色荧光均匀分布于胞浆和胞核,但在羧基端带有GFP-tag的MDA-7/IL-24融合蛋白表达阳性细胞中,绿色荧光则分布于核膜外侧和胞浆。结论GFP-tag位置的不同对过表达融合蛋白MDA-7/IL-24的亚细胞定位有显著的影响。

手术为主的综合疗法治疗小细胞肺癌

目的:探索以手术为主的综合疗法对小细胞肺癌的适应症,方法及临床效果。方法:回顾性总结分析845例小细胞肺癌治疗的临床资料:其中573例广泛期病变采用化疗或(和)放疗;局限期病变272例:单纯化(放)疗50例;先手术后化疗48例;先化疗后手术再化或(和)放疗174例;比较分析、评价不同方法的疗效。结果:广泛期病变1、2、3年生存率分别为13.0%、6.8%、0;局限期病变:化疗组和手术后化疗组1、3、5年生存率分别为74.2%、31.2%、4.3%和75%、46.6%、31.9%,二组间1年生存率无显著性差异(P>0.05),3、5年的生存率差异显著(P<0.05);而先化疗、后手术、术后化(放)疗组1、3、5、10年生存率分别为88.4%、58.9%、46.5%、11.5%,明显优于前两组(P<0.05);术前所用化疗方案与周期对生存时间无明显影响。术式包括肺叶切除、全肺切除、支气管(肺动脉)袖式切除重建,肺叶和全肺切除的5、10年生存率明显优于袖式切除,肺叶切除优于全肺及袖式切除。颅内、肝脏或骨髓转移仍为影响本组小细胞肺癌长期生存的主要原因。结论:小细胞肺癌对化疗、放疗均敏感,广泛期病变无手术适应症,应采用以化(放)疗为主的保守治疗。而局限期小细胞肺癌则应积极选用以手术为主、辅助术前、术后化(放)疗的综合方法,可获得较为满意、甚至长期生存的临床效果。

食管癌中DCC基因VNTR位点多态性研究

目的探讨 DCC 基因 VNTR 位点多态性在陕西人群中的分布规律及与食管癌的遗传易感性关系.方法利用 PCR 方法对陕西正常人群个体(56例),食管癌组织(鳞癌49例).食管癌癌旁组织(34例)的 DCC 基因 VNTR位点多态性进行群体遗传学研究,并就该位点与食管癌的关系进行了关联分析.结果在陕西正常人群中 DCC 基因 VNTR 位点存在11种等位基因(A_1～A_(11)),扩增长度为167 bp～210 bp,其等位基因频率介于0.009～0.188,其中以扩增长度为205 bp(A_3),201 bp(A_4),185 bp(A_7),177 bp(A_9)较为常见,分布符合 Hardy-Weinberg 遗传平衡定律;DCC 基因 VNTR 位点在陕西正常人群中的多态信息量(PIC)为0.879,杂合度(H)为73.2%.在食管癌人群 DCC 基因 VNTR 位点中共检出10种等位基因,比正常人群少等位基因 A_2,其等位基因频率分布在0.01～0.25.癌组织与癌旁组织等位基因频率分布经比较无显著差异(x^2=3.16,P>0.05).食管癌人群 ECC 基因 VNTR 位点多态分布与正常人群有显著差异(P<0.01).其中 A_5在食管癌人群中等位基因频率明显高于正常人群,而 A_7等位基因频率则明显低于正常人群,提示 A_5和 A_7可能是食管癌易感因素.结论推测 DCC 基因 VNTR 位点多态性的改变可能在食管癌的形成中起重要作用,该位点多态性与食管癌的遗传易感性相关.

2771例肺肿瘤临床病理特征分析

目的：根据WHO（2015版）肺肿瘤组织学分类标准,探讨军事医学科学院附属医院肺肿瘤的病理类型及分布特点。方法：收集2010年11月1日至2015年3月31日病理诊断2 771例肺肿瘤,复习其临床资料、HE切片及免疫组织化学切片。按WHO（2015版）分类标准进行病理诊断及分类。结果：2 771例肺肿瘤中多数为男性1 671例（60.30%）,少数为女性1 100例（39.70%）;左肺1 286例（46.41%）、右肺1 456例（52.54%）、双肺29例（1.05%）;年龄16~91岁。腺癌1 622例（58.53%）、鳞癌424例（15.30%）、腺鳞癌32例（1.15%）、神经内分泌肿瘤465例（16.78%）、大细胞癌19例（0.69%）、梭形细胞癌1例（0.04%）、巨细胞癌1例（0.04%）、癌肉瘤17例（0.61%）、淋巴上皮样癌1例（0.04%）、唾液腺型肿瘤4例（0.14%）、腺瘤11例（0.40%）、间叶性肿瘤55例（1.98%）、淋巴瘤7例（0.25%）、异位起源性肿瘤13例（0.47%）、转移性肿瘤99例（3.57%）。非小细胞肺癌-非特指型,倾向于腺癌小活检中TTF-1抗体阳性率为92.60%（1 263/1 364）、Napsin A抗体阳性率为97.07%（1 324/1 364）;非小细胞肺癌-非特指型,倾向于鳞癌小活检中CK5/6阳性率为96.99%（290/299）、P40阳性率为98.51%（66/67）、P63阳性率为93.72%（343/366）。非小细胞肺癌分子亚型首次活检中EGFR基因突变率34.77%（378/1 087）,KRAS基因突变率2.92%（24/823）,BRAF基因突变率0.87%（5/572）,ALK融合基因阳性率11.99%（41/342）,ALK-D5F3抗体阳性率22.23%（66/296）,ROS1融合基因阳性率2.56%（7/273）,c-Met基因扩增率4.40%（12/273）,c-Met基因突变率6.67%（1/15）,Her-2基因突变率0.73%（2/273）,PIK3CA基因突变率13.33%（2/15）,PTEN基因突变率6.67%（1/15）,RET融合基因阳性率0（0/15）和NTRK1融合基因阳性率0（0/15）。二次活检率EGFR基因4.76%（18/378）,ALK融合基因2.44%（1/41）。结论：肺肿瘤在男性患者中高发,病变部位最常见于右肺,腺癌已经成为最常见的病理类型。首次活检中非小细胞肺癌驱动基因中EGFR基因、ALK融合基因存在较高的突变率,其他基因突变率虽低但不容忽视。二次活检率较低,需引起重视。

p16^(INK4α)重表达对人食管癌细胞系EC109生长的抑制作用

目的探讨用腺病毒介导野生型的 p16基因在食管癌细胞系表达,研究重表达野生型 p16基凶对食管癌细胞系 EC109生长的抑制作用,为寻找食管癌致癌机制的研究及其基因治疗提供理论基础.方法用基因重组技术,将 pcDNA3-p16中的野生型 p16基因用 Kpn I/Bam H (?)进行双酶切,克隆入腺病毒表达载体pAdCMV 中,将重组质粒 pad-CMV-p16与腺病毒质粒 JM17用Lipofectamime 2000共转染293细胞,产生重组腺病毒.用重组腺病毒感染人食管癌细胞系 EC109,在感染后的不同时段,用免疫荧光、打点杂交方法检测 p16基因在细胞中的表达.用MTT 法及流式细胞仪观察 p16基因的表达对食管癌细胞株生长的影响.结果经酶切鉴定野生型 p16基因克隆入腺病毒表达载体中,与 JM17共转染293细胞后,可产生具有感染活性的重组腺病毒,用重组腺病毒感染食管癌细胞株 EC109细胞后,可抑制食管癌细胞的生长,同对照组相比其最大抑制率可达52.7%.Multipcycle 分析软件分析对细胞周期影响表明,处于 G_0～G_1期的细胞为41%～63%.感染后的细胞经 Dot blot 和 Westernblot 杂交证实,有外源的 p16mRNA 及蛋白的表达.结论重组腺病毒可将野生型 p16基因导入人食管癌细胞系EC109中,野生型 p16基因在 p16基因功能缺失的细胞中重表达能抑制癌细胞恶性生长.p16基因功能缺失是食管癌致癌因素之一.

新旧国际肺癌TNM分期的分析与比较

目的:分析、评价新的非小细胞肺癌TNM分期方法的优缺点(UICC1997)。方法:对照UICC1987制订的非小细胞肺癌TNM分期方法,复习有关文献,结合临床实际将新、旧分期方法作对比分析。结果:对1997年新修订的非小细胞肺癌TNM分期方法,目前国际上仍存在一些争议,1987的肺癌分期法临床应用效果良好,1997年所做小范围修订,其中有些并不十分恰当。结论:新的非小细胞肺癌分期方法虽不尽完美,但仍不啻为国际统一的权威分期标准。我国肺癌发病率及临床病例数量均居世界前列,理应在临床工作根据不同T、N、M以及影响预后的各种因素,包括新的生物学指标,为在下次修订中能与各国肺癌工作者共同参与、制定出对各期肺癌治疗方案的确定、预后的估计更为准确而合理的分期标准以及能被普遍接受的淋巴引流图。

共聚焦定量分析WAF_1-S基因表达对人食管癌细胞系EC109生长的作用

目的:探讨抑癌基因WAF_1-S基因在食管癌细胞中的表达以及对食管癌细胞生长的抑制作用,为食管癌发病机制的研究提供一种新的思路,为食管癌基因治疗提供理论基础。 方法:采用亚克隆技术,将野生型WAF_1-S基因全长,通过双粘端克隆入真核表达载体pcDNA3中,用lipofectamine2000介导的方法转染EC109细胞(人食管癌细胞系)。通过打点杂交观察WAP_1-S基因mRNA在细胞中的表达,用Westem blot及激光共聚焦方法定量分析WAF_1-S基因的蛋白表达产物,MTT及流式细胞仪检测EC109的生长状态,分析WAF_1基因对食管癌细胞株生长的影响。 结果:用内切酶酶切分析证实外源野生型WAF_1_S基因克隆入真核表达载体中,经打点杂交证实外源野生型WAF_1-S基因可以在EC109细胞中表达,通过激光共聚焦分析证实,转染后的食管癌细胞EC109中WAF_1-S的蛋白的表达明显高于对照组(32±15 vs 11±7,P<0.05),对细胞进行周期分析表明,处于G_0～G_1期细胞为0.47～0.65。 结论:通过转染外源野生型WAF_1基因可提高WAF_1基因表达,增加食管癌细胞中P^(21)蛋白的表达量,从而提高WAF_1基因表达,抑制细胞的生长。