我国雷氏按蚊和嗜人按蚊的分子鉴别和分类地位的探讨

[目的 ]论证我国雷氏按蚊与嗜人按蚊的分类地位。 [方法 ]采用分子鉴别法 (鉴别PCR和rDNA ITS2序列 )检测辽宁及山东两省现场按蚊标本 ,并依据ITS2区序列建立分子系统树。 [结果 ]分子鉴别显示 ,辽宁和山东两省均存在雷氏按蚊和嗜人按蚊。我国雷氏按蚊 (辽宁和山东省 ,n =6 )和嗜人按蚊 (辽宁、云南、河南和四川省 ,n =10 )ITS2序列长度和GC含量分别为 45 1bp、 46 2 % ,44 8bp、 46 0 % ;各地雷氏按蚊和嗜人按蚊序列均无差异 ,但各地嗜人按蚊与对照组江苏的嗜人按蚊相比 ,种内序列差异为 0 88% ;雷氏按蚊与嗜人按蚊种间序列差异为 2 5 7%。分子系统树显示雷氏按蚊与中华按蚊、嗜人按蚊与凉山按蚊亲缘关系较近。 [结论 ]根据分子鉴别 ,确认我国雷氏按蚊与嗜人按蚊为同域分布的

中华按蚊和嗜人按蚊rDNA内转录间隔2区序列差异

目的：比较中华按蚊和嗜人按蚊核糖体ＤＮＡ（ｒＤＮＡ）内转录间隔２区（ＩＴＳ２）序列差异。方法：通过对ＰＣＲ扩增的ｒＤＮＡＩＴＳ２片段进行克隆测序，每种蚊测定３个克隆片段序列，比较其差异。结果：中华按蚊和嗜人按蚊的ｒＤＮＡＩＴＳ２序列长度分别为４６８和４５２ｂｐ，ＧＣ含量分别为４４．８７％和４９．１２％，两者序列差异为２８．８％。

用核糖体DNA鉴别PCR区分中华按蚊和嗜人按蚊

目的：建立鉴别中华按蚊和嗜人按蚊的ＰＣＲ检测技术，并对现场标本进行检测。方法：根据中华按蚊和嗜人按蚊的ｒＤＮＡＩＴＳ２序列差异，设计种特异引物，用ＰＣＲ技术扩增种特异ＤＮＡ片段（中华按蚊４２５ｂｐ，嗜人按蚊２５３ｂｐ），根据扩增片段的长度对两种按蚊进行鉴别。结果：应用该法检测中华按蚊和嗜人按蚊的３个实验室品系共７０例，经卵鉴定的嗜人按蚊野外标本２０例，均显示单一的种特异扩增带。凉山按蚊、贵阳按蚊和帕氏按蚊对照共９例全部无扩增。检测采自我国１０省１２个不同地点，根据成蚊形态初步鉴定为中华按蚊的标本共４４０例，具中华按蚊种特异扩增带的标本占６６．１％，具嗜人按蚊种特异扩增带的标本占１２．７％，其余２１．１％的标本无扩增带，表明检测样本中混有其他蚊种，仅根据成蚊形态难以鉴别。结论：本研究提供了一种简便、准确和灵敏的中华按蚊和嗜人按蚊的分子鉴别方法。

我国多斑按蚊复合体成员种的分子鉴别研究

目的 建立我国多斑按蚊复合体5成员种的分子鉴别方法。 方法 测定并分析各成员种的rDNA-ITS2序列,并设计种特异引物,应用PCR法鉴别。结果 多斑按蚊复合体5成员种的ITS2序列长度和GC含量分别为伪威氏按蚊328 bp、58.54％、多斑按蚊330 bp、57.85％、威氏按蚊337 bp、59.05％、达罗毗按蚊334 bp、58.68％和塞沃按蚊338 bp、57.69％,各种内的ITS2序列保守,而种间的差异率范围为9.7％～18.9％。应用5.8S引物和5个种特异引物可以分别扩增出119、186、231、327和406 bp等5条清晰不同的种特异条带,以鉴别各蚊种。 结论 基于ITS2序列差异建立的我国多斑按蚊复合体5成员种的PCR鉴别简便易行、可靠。

我国八代按蚊及其近缘种rDNA-ITS2序列差异和分类地位的探讨

对采用自四川、辽宁、山东及韩国的八代按蚊和四川的筠连按蚊,进行核糖体DNA第2内转录间隔区(rDNA-ITS2)序列差异分析。结果显示:四川、辽宁及对照韩国八代按蚊群体间的ITS2序列同源性达96.7%～99.6%;筠连按蚊与各地(除山东外)八代按蚊间序列同源性达96.2%～99.8%,与四川同域的八代按蚊除一个碱基缺失外,rDNA-ITS2序列完全相同,显然属于种内变异水平,筠连按蚊可能是八代按蚊的同物异名:而山东八代按蚊与各地八代按蚊相比则同源性仅70.4%～71.1%,差异明显增大,提示山东的“八代按蚊”为一存疑蚊种,其分类地位尚需要进一步研究确定。

我国昆明按蚊与凉山按蚊rDNA-ITS2序列和形态比较及分类地位的探讨

[目的 ]论证昆明按蚊 (Anopheles kunmingensis)和凉山按蚊 (An. liangshanensis)的分类地位。 [方法 ]比较两种按蚊 r DNA- ITS2序列差异和主要形态特征的变化幅度。 [结果 ]两种按蚊 8个样本 r DNA- ITS2序列同源性为 97.1%～ 99.8%。昆明按蚊雌蚊翅 V5 .2缘缨白斑、后跗 基白环 (斑 )及幼虫头毛 2 - C具叉枝等特征出现率分别为 43% (9/ 2 1)、 89% (17/ 19)及 40 % (4/ 10 ) ,而凉山按蚊则分别为 79% (34 / 43)、 44 % (17/ 39)及 2 0 % (4/ 2 0 ) ;如以不同群体作统计分析 ,各特征出现率波动幅度很大 ,交叉重叠 ;表明两蚊种间缺乏明确与稳定的鉴别特征 ,缺乏实质性的形态差异。 [结论 ]两种按蚊形态特征和分子序列差异极小 ,应属种内变异范围 ,可以确认两者是同一蚊种 ,昆明按蚊为凉山按蚊的同物异名。

基于rDNA-ITS2序列的中国按蚊属塞蚊亚属部分种类的系统发育研究(双翅目:蚊科)

应用rDNA-ITS2序列,采用邻接法(NJ)、最大简约法(MP)和最大似然法(ML),以按蚊亚属Anopheles的中华按蚊An.(An.)sinensis和赫坎按蚊An.(An.)hyrcanus为外群,对采自中国的按蚊属Anopheles塞蚊亚属Cellia21种蚊进行了系统发育分析。结果表明:rDNA-ITS2序列的长度范围为435～838bp,塞蚊亚属蚊种间遗传距离为0.027～0.496,平均值为0.336。各种方法重建的系统发育树均显示新迈蚊系Neomyzomyia为单系,新塞蚊系Neocellia和迈蚊系Myzomyia为并系。21种蚊在系统发育树中均分为4支,伪威氏按蚊An.pseudowillmori和塞沃按蚊An.sawadwongporni未归入多斑按蚊种团(An.maculatus group),其它各种团和复合体成员种的聚类关系与形态分类结果一致。本研究重建的分子系统发育树阐明了中国按蚊属塞蚊亚属各系及蚊种之间的亲缘关系,ITS2序列具有足够的信息贡献量。

应用形态、染色体和分子特征研究我国雷氏按蚊的分类鉴别(双翅目:蚊科)

为确定可靠的雷氏按蚊Anopheleslesteri Baisaset Hu,1936分类鉴别特征,对采自不同地区的雷氏按蚊进行了形态、染色体和分子特征的观察和分析。检视了辽宁、广东现场标本,江苏实验室品系的成蚊、虫卵特征,描述了染色体核型,并测定了采自广东、辽宁、河南和云南4省的现场标本,以及江苏、海南和广西实验室品系的核糖体DNA间隔2区(ITS2)和D3序列。结果显示成蚊、虫卵形态变异较大,不具备稳定、明确的鉴别特征;染色体核型具有多态现象,性染色体X、Y分别有3个和2个类型,可分为染色体型A与B;唯有ITS2分子序列具有客观、稳定的种间差异,系雷氏按蚊可靠、可行的鉴别特征。

我国赫坎按蚊复合体成员种的rDNA-ITS2区序列差异及系统发育分析

测定了我国赫坎按蚊复合体 9成员种的核糖体DNA第二内转录间隔区 (rDNA ITS2 )序列 ,根据序列差异分析各蚊种间的系统发育关系。结果显示 :( 1 )ITS2区序列最长的是中华按蚊 ( 4 6 8bp) ,最短的是克劳按蚊和赫坎按蚊 ( 4 36bp) ;GC含量为 4 4 9%～ 4 6 8% ;( 2 )发现该复合体 4成员种的ITS2区序列存在种内个体间差异 ,幅度为 0～ 3 8% ,明显小于种间差异 ;( 3)将各蚊种的ITS2区序列进行同源排序比较 ,发现其变异大多是简单重复单元的拷贝数不同 ;种间差异性最大的是克劳按蚊与嗜人按蚊( 32 3% ) ,最小的是贵阳按蚊与凉山按蚊 ( 9 0 % )平均差异率为 2 2 3% ;( 4 )根据ITS2区序列特征 ,用 3种方法构建的树状图拟合一致。以上结果表明赫坎按蚊复合体各成员种rDNA ITS2序列在种内非常保守 ,以种间序列差异分析为基础的分子鉴别技术是甄别蚊种分类地位混淆和错误的有效方法。

雷氏按蚊多态微卫星DNA位点的筛选和特征

本研究对雷氏按蚊的微卫星DNA序列进行了分离，并筛选了其中具有多态性的微卫星位点。应用雷氏按蚊基因组DNA的酶切片段与生物素标记的寡核苷酸探针杂交，亲合素富集和超滤离心浓缩目的片段，扩增放大后克隆并测序，获得雷氏按蚊微卫星DNA序列。在其中挑选合适的微卫星位点，建立扩增体系。应用雷氏按蚊现场样本对不同的微卫星DNA进行扩增，聚丙烯酰胺凝胶电泳筛选具有多态性的位点。本研究结果获得了雷氏按蚊微卫星DNA序列58条，GenBank注册登记号为EF620299～EF620356。其中，完整序列41条，占70．7％；非完整序列7条，占12．1％，复合序列9条，占15．7％；仅1条为非典型序列。电泳结果显示其中14个微卫星位点中有11个具有多态性。

辽宁省东港市按蚊多样性和蚊虫种群动态变化研究

目的掌握辽宁省东港市按蚊多样性的本底资料以及蚊虫种群密度动态变化和季节消长的情况。方法对1997年至2005年在东港7个地点采集的按蚊进行形态和PCR分子鉴别,分析1998年至2005年间该地的蚊虫密度和季节消长情况。结果东港市的按蚊有4种,为雷氏按蚊、八代按蚊、Anophelesbelenrae和朝鲜按蚊;其中雷氏按蚊占经分子鉴别的173个样本中的93.6%;An.be-lenrae在中国是首次记录,朝鲜按蚊是辽宁省的新记录种。东港市蚊虫种群密度最高的年份为2001年,最低为1998年;绝大多数年份蚊虫的季节消长基本属单峰型,调查期间每年的7月和8月其密度维持在较高水平。结论辽宁省东港市的蚊虫资料得到了更新和充实。

蚊虫种群遗传多态的研究进展

蚊虫系统学上的种群（ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）与遗传学上使用的群体相似。种群遗传多态一般是指：在物种的分布区域内，存在２个以上完全不同的种群，且在同一个种群内也存在２种以上不同遗传类型的个体［１］。研究蚊虫的种群遗传多态现象，可从蚊虫群体水平看出遗传结构...

我国辽宁省嗜人按蚊群体与其它分布地群体的遗传分化研究

目的 研究我国辽宁省嗜人按蚊群体与其他分布地群体的遗传分化现象。 方法 应用 RAPD- PCR技术研究我国辽宁、四川和河南 3省 5个代表点的嗜人按蚊自然群体和江苏省实验室群体共 5 2个样本的遗传多态现象 ,依据 5 9个 RAPD等位基因座进行分析。 结果 嗜人按蚊群体的多态位点比例为 4 5 .8%～ 71.2 % ,平均 6 1.5 8% ,期望杂合度为 0 .16 3～ 0 .2 5 6 ,平均 0 .2 2 4 ;分别用 Wright(Fst)、L ynch和 Milligan(Fst)、Weir和 Cockerham (θ)的方法计算固定指数 ,平均值分别为 0 .2 2 4、0 .198和 0 .2 81,其相应的 N m分别为 0 .9、1.0和 0 .6 ,可见嗜人按蚊的基因流水平极低 ,致使群体产生了分化 ;嗜人按蚊各群体间的遗传差异性为 0 .0 2 87～ 0 .1397,属种内变异 ;聚类图显示 ,辽宁省的 3个群体与其他群体分为两枝。

中国赫坎按蚊种团四种按蚊的幼虫唾腺染色体比较研究

对赫坎按蚊种团内中华按蚊、嗜人按蚊、贵阳按蚊、昆明按蚊的幼虫唾腺染色体游离端特征作了比较研究．结果显示，嗜人按蚊与其它３种按蚊亲缘关系较远，为独立种；昆明按蚊、贵阳按蚊与中华按蚊亲缘关系较近，但仍为独立种．贵阳按蚊、昆明按蚊的幼虫唾腺染色体图系首次报道．

赫坎按蚊种团中5种4株的数值分类

本文报告应用系统聚类分析和主成分分析法对赫坎按蚊种团中的中华按蚊4个地理株以及嗜人按蚊、贵阳按蚊、昆明按蚊和凉山按蚊进行分析的结果。并对分析的具体步骤作了简单介绍。

分子生物学技术在蚊虫近缘种鉴别中的研究进展

长期以来，蚊虫的分类鉴定工作主要是以蚊成虫、幼虫、卵及蛹等外部形态为依据进行的，已形成其传统分类体系。但随着研究工作的深入，现用形态分类方法已不能适应蚊虫复合体近缘种等鉴别的需要。近年来，遗传杂交技术、酶谱技术、化学仪器分析技术以及分子生物学技术的不...

新疆6种蚊虫的rDNA-ITS2区序列分析

测定并分析了新疆 ４种伊蚊和 ２种按蚊的 ｒＤＮＡ—ＩＴＳ２区序列，新疆伊蚊、刺扰伊蚊ＩＴＳ２区长度分别为 ２３１ｂｐ～２５６ ｂｐ、２５０ｂｐ或 ２５３ｂｐ，其克隆间、种内序列差异分别为 ０．３％～４．３％、０．８％～１．４％；里梅伊蚊与长刀伊蚊的长度为３３０ ｂｐ、２５１ ｂｐ，种内序列无差异；４种伊蚊种间序列差异明显大于种内差异水平，为１２．３％～３３．５％；赫坎按蚊和米赛按蚊的 ＩＴＳ２区序列长度分别为 ４６３ｂｐ、３１１ｂｐ，种内个体间无差异，而种间的差异为 ３０．８％．结果显示 ｒＤＮＡ－ＩＴＳ２区序列差异，为形态上易混淆蚊种提供了有意义的分子鉴别特征。

秦巴山系部分地区蚊虫种类及密度调查

对秦岭和巴山部分地区的蚊虫种类及密度进行了初步调查，共记录了７属２５种，其中陕西新记录１２种；利用人工小时法对畜舍和人房两种生境进行了成蚊密度测定，发现畜舍成蚊密度高于人房．

海口市白纹伊蚊对菊酯类杀虫剂的抗药性及击倒抗性基因突变分析

目的了解海口市白纹伊蚊对溴氰菊酯和氯菊酯的抗药性,并检测其击倒抗性(kdr)基因突变型,阐明抗性表型与kdr基因突变的关系。方法在海口新埠岛、龙塘镇、石山镇、白沙门和花卉市场采集白纹伊蚊幼虫,应用浸渍法测定其对溴氰菊酯和氯菊酯杀虫剂的敏感性,以抗性倍数确定抗性级别。对应生物测定的样品扩增和分析白纹伊蚊的kdr基因部分片段,采用χ2检验比较抗性表型与kdr突变基因型的差异性。结果海口白纹伊蚊花卉市场和白沙门群体对溴氰菊酯和氯菊酯均产生抗性,花卉市场群体对溴氰菊酯的抗性倍数高达436.36,为高度抗性。龙塘镇和石山镇群体对氯菊酯均为敏感,对溴氰菊酯的抗性为低度(9.09)或中度(18.18)。新埠岛群体对溴氰菊酯和氯菊酯均为敏感。在对应检测的317只白纹伊蚊的kdr基因中,发现1 534位点存在点突变,检测到2种突变等位基因(TGC/C、TCC/S)。5种基因型和频率分别为野生型TTC/TTC(62.15%)、野生/突变型杂合子TTC/TGC(0.63%)和TTC/TCC(16.09%)、突变型纯合子TCC/TCC(20.82%)以及突变型杂合子TGC/TCC(0.32%)。χ2检验结果显示,接触菊酯类杀虫剂后敏感表型与抗性表型个体中,kdr基因型间的差异有统计学意义(P<0.05),在抗性表型群体中的kdr突变型基因型的频率(42.94%)大于敏感表型个体(31.97%)。结论海口市白纹伊蚊多个群体对溴氰菊酯和氯菊酯同时存在抗性,抗性表型与kdr突变基因型密切相关。本研究首次记录了kdr新的等位基因TCC/S。

中药葛根及其近缘种的rDNA-ITS序列分析

目的 探讨中药葛根及其近缘种的分类地位及系统发育关系 ,同时为葛根的指纹图谱鉴别提供分子标记。方法 测定并分析葛属 3种植物的内转录间隔区 (ITS)序列及 5 .8SrRNA基因序列。结果 测得该属 3种植物的片段包括ITS1,5 .8S和ITS2全长序列以及 18S ,2 6S部分序列。野葛与粉葛的ITS1,ITS2的差异性分别在 2 .10 %和 2 .0 9%以内 ,而山葛与野葛、粉葛在ITS1,ITS2的差异性则分别达到 8.14%和 12 .82 %以上。根据ITS序列特征构建的系统树 ,不同产地的野葛首先聚类 ,然后与粉葛聚在一起 ,山葛最后聚类。结论 根据分子性状特征 ,粉葛作为野葛的变种 ,山葛独立成种较为合理。