扶正解毒方对病毒性心肌炎大鼠氧化应激及Sirt1/FoxO3a通路的影响

目的 基于沉默信息调节因子2相关酶1(Sirt1)/叉头蛋白O3a(FoxO3a)通路探究扶正解毒方对病毒性心肌炎(VMC)大鼠的影响。方法 大鼠腹腔注射柯萨奇B3病毒(CVB3)法建立VMC模型,随机分为模型组、扶正解毒方低剂量组(28 g/kg)、扶正解毒方高剂量组(112 g/kg)、EX527组(Sirt1抑制剂,1μg/kg)、扶正解毒方(28 g/kg)+EX527(1μg/kg)组,每组15只,另取未造模的正常大鼠15只为正常组,连续给药10 d。检测大鼠超声心动图Tie指数,HE染色观察心肌组织病理损伤情况,ELISA法检测血清心肌损伤标志物、氧化应激水平,TUNEL法检测心肌组织细胞凋亡率,免疫组化法检测心肌组织Sirt1表达,Western blot法检测心肌组织FoxO3a、磷酸化FoxO3a(p-FoxO3a)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、过氧化氢酶(CAT)、细胞周期抑制蛋白p27、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase3)表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠心肌细胞坏死加重,大鼠出现死亡,Tie指数、血清心肌损伤标志物、氧化应激指标水平均升高(P<0.05),Sirt1/FoxO3通路蛋白及其介导的抗氧化应激、抗凋亡相关蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,扶正解毒方各剂量组大鼠无死亡,心肌组织损伤得以缓解,Tie指数、血清心肌损伤标志物、氧化应激指标水平均降低(P<0.05),Sirt1/FoxO3通路蛋白及其介导的抗氧化应激、抗凋亡相关蛋白表达升高(P<0.05);EX527可加重VMC大鼠的死亡及心肌细胞氧化损伤等症状,并逆转扶正解毒方对抗病毒性心肌炎的作用(P<0.05)。结论 扶正解毒方可通过激活Sirt1/FoxO3a通路缓解VMC大鼠心肌氧化应激损伤。

下调miR-106a-5p对过氧化氢诱导的心肌细胞损伤及JAK1/STAT3通路的影响

目的 探讨下调miR-106a-5p对过氧化氢(H2O2)诱导的心肌细胞损伤及Janus激酶1(JAK1)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路的影响。方法 不同浓度梯度H2O2(0、50、100、200、400μmol/L)处理大鼠心肌细胞H9c2。H9c2细胞分为对照组、H2O2组(100μmol/L H_(2)O_(2))、miR-106a-5p NC组(100μmol/L H_(2)O_(2)+转染miR-106a-5p NC)和miR-106a-5p siRNA组(100μmol/L H_(2)O_(2)+转染miR-106a-5p siRNA)。实时荧光定量PCR(qPCR)法检测miR-106a-5p表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及细胞中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性;蛋白免疫印迹法检测细胞中JAK1/STAT3通路相关蛋白表达。结果 根据H_(2)O_(2)浓度梯度实验,选择100μmol/L H_(2)O_(2)用于后续实验。与对照组相比,H2O2组H9c2细胞增殖抑制率、凋亡率、细胞中miR-106a-5p水平、MDA含量、p-JAK1/JAK1、p-STAT3/STAT3及细胞培养液中LDH含量显著升高(P<0.05),细胞培养液GSH-Px活性及细胞中SOD活性显著降低(P<0.05);上述指标在H2O2组与miR-106a-5p NC组间的差异无统计学意义(P>0.05);与miR-106a-5p NC组相比,miR-106a-5p siRNA组H9c2细胞增殖抑制率、凋亡率、细胞中miR-106a-5p水平、MDA含量、p-JAK1/JAK1、p-STAT3/STAT3及细胞培养液中LDH含量显著降低(P<0.05),细胞培养液GSH-Px活性及细胞中SOD活性显著升高(P<0.05)。结论 下调miR-106a-5p可抑制JAK1/STAT3通路激活,提高抗氧化应激水平,减轻H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞损伤。