山东省肉鸭鸭疫里默氏杆菌流行病学调查及耐药性分析

针对目前肉鸭养殖中细菌传染病发病率高、防治困难的现状,分离鸭疫里默氏杆菌,检测其抗药性程度,筛选合适的抗生素适宜剂量。从山东省内12个地区/市、河北省4个地区及河南省4个市区养殖场或养殖小区采集到447份疑似鸭疫里默氏杆菌病病鸭肝脏及脑部组织病料中分离菌株。利用鸭疫里默氏杆菌的omp A基因为目的基因,建立PCR快速检测方法。结果:PCR快速鉴定该菌的方法,共分离到65株鸭疫里默氏杆菌,分离率为13.62%,其抗药性程度均较高。根据CLSI琼脂稀释法药敏试验原理,建立了96点阵接种药敏检测盒,检测分离菌株的MIC,筛选适用于临床的敏感药物和剂量。试验表明:鸭里默氏杆菌抗药性较高,可根据药敏检测结果筛选抗生素,并轮换使用。

牛病毒性腹泻病毒长春分离株P125基因的克隆与序列测定

以MDBK细胞培养致细胞病变型牛病毒性腹泻病毒 (BVDV)NCD毒株 ,采用异硫氰酸胍一步法提取总RNA ,并根据BVDVNADL参考株序列设计合成的 1对引物 (W 1与W 2 ) ,进行反转录PCR (RT PCR) ,扩增出P12 5基因区约40 0bp的片段。经 pGEM T载体连接后克隆、测序 ,并与已发表的NADL、Osloss、SD 1、184、D、H、Yak等BVDV毒株序列进行比较。结果表明 :NCD株P12 5基因区无插入或缺失变异 ,但存在着核苷酸的替换 ;经聚类分析初步认为NCD株属于Ⅰa型。NCD株与长春 184、H株核苷酸序列差异较大 ,而亲缘关系较近 。

博落回提取物对商品猪场细菌抗药性的影响

为了解博落回提取物(含血根碱1.50%,白屈菜红碱0.75%)对仔猪细菌抗药性的影响,本试验通过在30日龄仔猪的饮水中分别添加博落回提取物和阿莫西林,并用96点阵二倍稀释法测定9种常用抗生素对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC),评价其防止仔猪腹泻、促进仔猪生长以及对细菌抗药性的影响。结果表明,添加博落回提取物的试验组对细菌抗药性以及仔猪腹泻率、成活率、出栏重等生产性能指标的影响与添加阿莫西林的对照组之间差异不显著,基于上述结果,博落回提取物可替代阿莫西林用于预防仔猪腹泻,提高仔猪成活率和促生长。

发酵饲料对枫叶鸭生产性能的影响

为探讨发酵饲料对枫叶鸭的生长速度、饲料转化率、死亡率等的影响,本试验选用2008只3日龄枫叶鸭商品代,随机分成试验组和对照组2组,试验组日粮是在对照组日粮基础上添加0.1%发酵菌种。结果表明,平均体重和日增重试验组比对照组分别提高3.93%和7.8%,料肉比降低7.77%,经t检验试验组与对照组差异显著(P<0.05)。试验结果表明,添加0.1%菌种的发酵饲料能促进肉鸭增重,提高饲料报酬,降低死亡率。

山东省及周边地区肉鸭源大肠杆菌流行病学调查及耐药性分析

为建立鸭大肠杆菌快速鉴定及药敏检测方法,筛选合适的抗生素,本试验从山东省12个、河北4个及河南4个地区养殖场或养殖小区采集到447份疑似感染鸭大肠杆菌的肉鸭肝脏和脑部组织病料,共分离到300株大肠杆菌,分离率为67.11%。利用大肠杆菌phoA基因为目的基因,建立了PCR快速鉴定鸭源大肠杆菌的方法。该PCR检测方法可快速鉴定鸭源大肠杆菌,鉴定效率显著提高。根据美国临床和实验室标准协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)标准及琼脂稀释法药敏试验原理,建立了96点接种药敏检测盒快速检测方法,结果表明:硫酸多粘菌素、甲磺酸培氟沙星抑菌率相对较高;卡那霉素、氨苄西林、氟苯尼考抑菌率相对较低。根据药敏检测结果可快速筛选适用的敏感药物和剂量,并交替轮流使用抗生素。

高效液相色谱-蒸发光散射法检测雪胆溶液中雪胆甲素的研究

采用 HPLC －ELS 法，C18柱（4．6 mm ×250 mm），流动相为乙腈－水（40∶60）；流速0．8 mL／min；柱温为室温；检测器为 Alltech 2000蒸发光散射检测器；检测温度100℃；ELSD 载气为高纯氮气；载气压力为0．35 MPa，对雪胆溶液中雪胆甲素含量进行测定。结果表明：在该方法下，雪胆甲素进样量在3．34～16．70μg之间，进样量的自然对数与峰面积积分值的自然对数呈良好的线性关系，其平均回收率为98．81％，RSD 为0．92％（n ＝6）。所建方法简便易行、准确可靠，可用于雪胆溶液中雪胆甲素含量的测定。

雪胆口服液治疗鸡大肠杆菌病的研究

为验证雪胆口服液对鸡大肠杆菌病的防治效果,本试验选择临床某养殖场42日龄海兰白壳蛋鸡大肠杆菌自然病例作为研究对象,应用雪胆口服液按4mL/L饮水添加,连续饮用5d,同时以硫酸新霉素可溶性粉(0.5g/L饮水)作为对照药物,观察两种药物对大肠杆菌病的防治效果。结果表明:雪胆口服液对鸡大肠杆菌自然病例的保护率为86.71%,但效果不及新霉素(95.57%)。

扶正解毒颗粒对小鼠血液指标影响的研究

为考察长期使用扶正解毒颗粒的毒性,选取体重(18±2)g昆明小鼠160只,雌雄各半,随机分为4组(对照组及高、中、低3个剂量药物组),每组雌雄小鼠各20只,分笼饲养。根据毒理学评价标准及相关参考文献,其中高剂量为推荐临床用药量(即4 g/L饮水)的20倍,中剂量为推荐临床用药量的10倍,低剂量为推荐临床用药量的5倍。给药周期为90 d,将药物混于饮水中自由饮用,采食不限。主要从一般指标、增重及饲料利用、血液学常规、血液生化检查等方面研究该制剂对昆明小鼠的慢性毒性反应。结果显示:无论30 d末还是90 d末,受试药物的3个剂量组的上述各项指标测定结果均与对照组无显著差异(P>0.05),表明该新制剂无明显毒性,在临床上长期应用是安全的。

扶正解毒颗粒对鸡安全性和影响大肠杆菌抗药性的研究

将1日龄健康雏鸡80只,随机分为四组,每组20只。其中1~3组为试验组,分别在饮水中全程添加推荐剂量1倍(4g/L)、3倍(12g/L)和5倍(20g/L)的扶正解毒颗粒;4组为不用药对照组。试验期8周,每天观察并记录各组鸡的临床体征,每周末称重1次,8周末试验结束时心脏采血测定各组鸡的血液生理生化指标,剖检鸡只,通过组织切片观察各脏器有无变化。从试验组2(即3倍推荐用药剂量组)和不用药对照组鸡只肠道中采集内容物分离大肠杆菌,进行抗药性分析。结果显示,各组试验鸡的行为、采食、粪便性状与空白对照组相比,均未见异常变化。1倍剂量组和3倍剂量组试验鸡的体重均显著高于不用药对照组(P<0.05或P<0.01)和5倍剂量组(P<0.05或P<0.01);而1倍剂量组和3倍剂量组间在各日龄段均无显著差异(P>0.05)。试验各组和不用药对照组鸡只血液生理生化指标红细胞数、血红蛋白、白细胞数、淋巴细胞比例均无显著性差异(P>0.05)。试验各组脏器颜色、形状、大小、位置等均未见异常变化。显微镜观察组织切片,细胞符合正常组织形态和结构特点。大肠杆菌对8种药物的MIC值均未有显著差异(P>0.05)。以上结果表明,扶正解毒颗粒对靶动物鸡无明显不良影响,对大肠杆菌抗药性水平影响不显著。

牛病毒性腹泻病毒免疫机理研究进展

本文综述了牛病毒性腹泻病毒的生物学特性、生理生化特性及其诱导的细胞免疫、体液免疫研究进展情况 ,并对牛病毒性腹泻病毒免疫机理做了一定的探讨 。

发酵床养殖对仔猪胃肠道大肠杆菌和乳酸菌增殖的影响

为阐明发酵床养殖对断奶仔猪消化道菌群的影响,对发酵床和水泥地养殖仔猪消化道大肠杆菌和乳酸菌的动态变化进行比较分析。试验期为42d。15头30日龄断奶仔猪分别在试验开始第1天(断奶当天)、第21天和第42天进行扑杀,每次每组扑杀3头,取胃、回肠、盲肠、结肠粘膜层及各段内容物进行2类细菌的分离计数,同时检测相同时间点发酵床表层与深层垫料中的细菌数量。结果发现:随着养殖时间的延长(1～42d),消化道大肠杆菌呈下降趋势,如发酵床仔猪结肠段大肠杆菌由开始的6.4×107降低到2.2×105,而乳酸菌先下降后上升,如发酵床仔猪回肠段内容物乳酸菌数量由4.6×109降到2.6×108后再增加到1.4×1010。发酵床养殖未改变仔猪胃肠道细菌变化规律,同时发酵床垫料中的乳酸菌数量不影响断奶仔猪消化道内的乳酸菌数量;此外,随着发酵床使用时间延长,发酵床垫料中致病菌的数量和种类增加,发酵床垫料底层大肠杆菌在试验开始未检测到,在试验42d时增加到6.1×107。

山东某地散养猪源大肠杆菌抗药性研究

为调查养猪户各个生产环境中存在的多黏菌素抗药性情况。从山东某地规模较小的商品猪场及其周边散养猪户分别采集饲料、饮水、粪便、污水、猪鼻拭子等样品200个,分别制作含有药物(环丙沙星2μg/mL,黏杆菌素4μg/mL)的琼脂培养基,分离纯化细菌,并筛选抗药性菌株。将每户或商品猪场的样品合并为一个样品,用mcr-1基因和ndm-1基因扩增引物,进行PCR扩增。参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)药敏试验标准,采用琼脂平板法和微量肉汤稀释法,测定分离菌株对强力霉素等8种抗生素的抗药性水平。结果显示,200个样本中分离到大肠杆菌50株,分离率为25%。从62个混合样品中检测到38个样品含有mcr-1基因(阳性率61.29%),6个样品含有ndm-1基因(阳性率9.68%)。细菌药敏试验结果显示,含有mcr-1基因和ndm-1基因的菌株对这8种抗生素的抗药率均较高。结果表明在猪体及其养殖环境中存在mcr-1和ndm-1这2种基因,散养猪模式和规模化模式导致的细菌抗药类型和水平存在差异。

高通量药敏试验接种仪的初步应用

为验证研发出的高通量药敏试验接种仪的细菌药敏检测性能。根据美国临床实验室标准化协会(CLSI)药敏试验琼脂稀释法和微量肉汤稀释法标准,对药敏试验接种仪的结构和操作稳定性、重复性等性能进行研究,以头孢噻呋抑制大肠杆菌ATCC25922为例与CLSI药敏试验标准方法进行比对;同时,使用该药敏试验接种仪与CLSI药敏试验标准中的微量肉汤稀释法分别检测了8种抗生素对48株禽源大肠杆菌临床分离株的最低抑菌浓度。结果显示:该药敏试验接种仪在琼脂平板上接种细菌量稳定性好,与CLSI微量肉汤稀释法检测结果符合率达95%,批量检测结果符合率88.54%以上,且使用该药敏试验接种仪比微量肉汤稀释法检测效率高5倍以上。研究表明药敏试验接种仪适用于实验室药物敏感性研究以及实验室的常规检测。

96点阵琼脂稀释法与微量肉汤稀释法药敏试验结果的对比

目的为了验证96点阵琼脂稀释法进行药敏试验的可靠性和有效性,与国际通用的微量肉汤稀释法进行对比。方法用微量肉汤稀释法和96点阵琼脂稀释法分别对质控菌株E.coli ATCC25922、临床分离E.coli进行4种不同药物(头孢噻呋、庆大霉素、氟苯尼考和多西环素)的药敏试验,并经过多次重复和对比。结果这两种检测方法所测定的菌株的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)完全相同者占30%~50%,相差1个梯度占80%,3个梯度以内的吻合率高达96%以上,96点阵琼脂稀释法具有很好的重复性和稳定性。结论 96点阵琼脂稀释法与微量肉汤稀释法两种方法测定的MIC没有显著差异,可共用一个质控标准。96点阵琼脂稀释法的标准化和规范化,有利于高通量药敏检测的进行,推动建立完善的抗药性监测技术体系。

中药雪胆及其制剂研究进展

雪胆具有广泛的药用及经济价值,为综合开发利用雪胆资源,文章对雪胆的化学成分、药理作用、临床应用、制剂研制及质量控制等进行了综述,并对雪胆的研究及实际应用提出了某些建议。

山东省肉鸭沙门氏菌的分离鉴定及敏感抗菌药物的筛选

从山东省各个地区的病死肉鸭采集317份组织样品进行细菌分离,并进行染色镜检和生化鉴定,共分离鉴定出105株沙门氏菌,分离率为33.1%。将临床推荐用药浓度的0.1倍作为抗药性检测浓度L,设置不同药物浓度梯度(1/4L、1/2L、L、2L和4L),进行17种抗生素的药敏试验,根据L药物浓度梯度对分离菌株的抑菌率大于80%的原则进行敏感抗菌药物的筛选。结果表明,沙门氏菌是危害山东省肉鸭养殖的主要病原菌之一,且多重耐药现象较严重,其中氨苄西林、诺氟沙星、卡那霉素、氟苯尼考和培氟沙星等敏感药物可作为临床推荐药物对沙门氏菌进行防控。

Sangrovit对临床多抗菌株的抑制作用及对肉鸡生长促进的饲养试验

为了考察Sangrovit(含血根碱1.5%,白屈菜红碱0.75%)对242株临床高抗多抗菌株的抑制作用以及对肉鸡的促生长作用。用琼脂扩散法测定临床菌株对各种抗生素的抑菌圈和抗药性分离率;用96点阵二倍稀释法测定血根碱和小檗碱对各菌株的MIC值。通过饮水添加Sangrovit进行14.6万只AA肉鸡的大规模饲养试验,评价其促生长作用。药敏检测结果表明临床分离菌株存在普遍的多重抗药性,其中包括MRSA、ESBL阳性的大肠杆菌和肺炎克雷伯菌、泛抗药性的鲍曼不动杆菌以及NDM-1鲁氏不动杆菌。血根碱、小檗碱对临床高抗菌株均有显著的抑制作用,血根碱对金黄色葡萄球菌、肠球菌的抑制作用最强,MIC值最小可达到2μg/ml,最大不超过128μg/ml;优于小檗碱,达到抗生素的抑菌浓度,且血根碱与现有抗生素不存在交叉抗药性。基于上述结果 Sangrovit可代替饲料中抗生素,作为饲料添加剂进行肉鸡的饲养试验,21日龄前按日粮中添加50 mg/kg,21日龄后添加25 mg/kg的Sangrovit,能改善消化性能,持续提高采食量和日增重,出栏重平均提高60 g,料肉比降低0.03,欧洲效率指数提高13.74。Sangrovit对临床各种抗性机制的多抗菌株有较强的体外杀菌力,是代替抗生素,减少病原菌抗药性和药残,促进肉鸡生长的良好添加剂。

乙酰甲喹和喹烯酮药动学研究进展

乙酰甲喹和喹烯酮是中国农业科学院和兰州畜牧与兽药研究所研制合成的两种喹噁啉类药物,由于保留了传统喹噁啉类药物的抗菌活性,同时大大降低了毒性作用,因此在畜牧业生产中得到应用。迄今为止,已经开展了乙酰甲喹和喹烯酮在不同动物中的药物动力学研究,并且使用不同的分析方法确证了这两种药物的代谢产物。研究证明这两种药物在动物体内分布广泛,吸收和消除较快。

细胞破壁中兽药健鸡散超微粉治疗鸡大肠杆菌病的临床效果

试验分别以 10g/kg、5g/kg、2 5g/kg饲料高、中、低剂量添加细胞破壁中兽药健鸡散超微粉 ,以15g/kg饲料的剂量拌料添加健鸡散散剂为药物对照 ,治疗AA公雏大肠杆菌病。结果表明 ,细胞破壁中兽药健鸡散超微粉高、中剂量组、对照药物组临床治疗效果优于低剂量组 ,根据临床治疗原则 ,本品临床推荐治疗量为 5g/kg饲料 ,预防量减半 ,自由采食 ,连续用药 5天为

CLSI药物敏感性试验标准VET01-A4概述及更新要点

抗生素药物敏感性试验是进行细菌抗药性研究的基础。美国临床和实验室标准协会(CLSI)制定了药物敏感性试验方法和试验结果的判定标准,并授权笔者译为中文,供中国兽医药理学界参考。文章概述了2013年CLSI药物敏感性试验标准VET01-A4及其附表VET01-S2的主要内容,并对更新的要点进行了介绍。