Sysmex UF5000尿沉渣分析仪鉴别血尿来源的临床应用评估

目的 评估Sysmex UF5000尿沉渣分析仪(UF5000)鉴别血尿来源的准确性。方法 选取241例血尿标本,比较UF5000和人工镜检判断红细胞形态信息的一致性。以临床诊断作为金标准,评估UF5000鉴别血尿来源的准确性和符合率。结果 UF5000和人工镜检在判断红细胞形态信息方面的一致性一般(Kappa值=0.389)。以临床诊断作为金标准,UF5000和临床诊断的一致性(Kappa值=0.474)明显低于人工镜检和临床诊断的一致性(Kappa值=0.71 1),但UF5000判断为混合性和非肾小球源性血尿的符合率高于人工镜检。结论 UF5000可有效排除肾小球源性血尿,但目前鉴别血尿来源的准确性较低,各实验室可根据实际情况调整光源参数以提高仪器鉴别的准确性。

人BAFF cDNA的克隆及原核表达载体的构建

目的 克隆人BAFF(BcellactivatingfactorbelongingtotheTNFfamily)全长及 12 8～ 2 85片段的cDNA并构建其原核表达载体 ,为表达和检测其生物学活性做准备。方法 提取HL 60细胞总RNA ,经RT PCR扩增编码人BAFF全长及12 8～ 2 85氨基酸残基的cDNA序列 ,并将其克隆至载体pUC18和pUC19进行序列测定 ,然后构建于新型原核表达载体pQE 80L中。结果 RT PCR扩增得到了 85 8bp和 477bp的DNA片段 ,序列分析与GenBank中报道的编码BAFF全长及 12 8～2 85氨基酸残基的cDNA序列完全一致。结论 BAFFcDNA的克隆及其原核表达载体的构建 。

人BLyS免疫抑制分子的克隆、表达及纯化

目的用异源性T辅助细胞表位修饰人可溶性BLyS突变体(msBLyS),构建和表达BLyS的新型免疫抑制分子。方法经PCR方法构建msBLyScDNA,然后分别与鸡卵清溶菌酶(HEL)或卵清蛋白(OVA)Th表位DNA序列重组,行序列测定后,构建于高效原核表达载体pQE-80L并转化E.coliDH5α,经IPTG诱导表达,Ni-NTA层析纯化后,通过细胞增殖实验检测融合蛋白的生物学活性。结果DNA测序表明,重组HELmsBLyS和OVAmsBLyS的DNA序列与文献报道的序列完全一致。HELms-BLyS和OVAmsBLyS在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达。经Ni-NTA层析纯化后,目的蛋白的纯度可达90%以上。活性检测发现,重组蛋白均不能促进Raji细胞增殖。结论成功构建了BLyS的免疫抑制分子,并获得了高效表达及纯化,纯化产物已丧失了sBLyS所具有的细胞增殖活性,为进一步探讨其治疗作用打下了基础。

Th表位修饰的BLyS突变体的构建及活性分析

在已克隆可溶性BLyS(sBLyS)cDNA的基础上,经PCR构建了其缺失不同区域的突变体(msBLyS)cDNA,然后将msBLyScDNA与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)Th表位DNA序列重组,测序正确后分别克隆于原核表达载体pQE80L,并转化E.coliDH5α,经IPTG诱导后,融合蛋白以包涵体的形式表达,表达量均在菌体总蛋白的30%以上。包涵体经洗涤、溶解并经Ni-NTA层析纯化后,目的蛋白的纯度均在90%以上。活性检测发现,所获重组蛋白均丧失了sBLyS所具有的生物学功能,这些工作的完成为进一步探讨其治疗作用打下了基础。

人全长TALL-1在大肠杆菌中的表达

目的 在克隆人TALL 1(TNF andapoptosisligand relatedleukocyteexpressedligand 1)全长cDNA的基础上 ,用大肠杆菌进行表达并鉴定其生物学活性。方法 采用RT PCR技术 ,从HL 60细胞中扩增编码人TALL 1的cDNA ,克隆于高效原核表达载体pQE 80L中 ,以IPTG诱导表达 ,Ni NTA层析纯化后 ,进行生物学活性检测。结果 RT PCR扩增得到了85 8bp的DNA片段 ,测序结果与GenBank中报道的编码TALL 1的cDNA序列一致 ,并在大肠杆菌中获得了高效表达 ,活性检测发现它能抑制U93 7细胞的生长。结论 成功克隆了人TALL 1全长cDNA ,并获得了高效表达及纯化 ,纯化产物具有生物学活性 。

免疫增强剂B淋巴细胞刺激因子的研制

目的克隆人B淋巴细胞刺激因子 (BLyS)胞外区 12 8 2 85氨基酸cDNA ,并行高效表达、纯化及功能鉴定。方法提取HL 6 0细胞总RNA ,经RT PCR扩增编码人BLyS胞外区 12 8 2 85氨基酸的cDNA ,行序列测定后 ,构建于高效原核表达载体pQE 80L ,经IPTG诱导表达 ,Ni NTA色谱纯化 ,进而行免疫学活性检测。结果RT PCR扩增得到了 4 77bp的DNA片段 ,序列分析与GenBank中报道的编码BLyS 12 8 2 85的cDNA序列一致 ,并在大肠杆菌中获得了高效表达 ,Ni NTA色谱纯化后 ,活性检测发现它能刺激小鼠脾淋巴细胞增殖。结论成功克隆了人BLyS胞外区cDNA ,并获得了高效表达及纯化 。

B淋巴细胞刺激因子研究进展

B淋巴细胞刺激因子(BlyS)是1999年发现的肿瘤坏死因子家族的一个新成员。它不仅可诱导肿瘤细胞调亡,更重要的是可调节B淋巴细胞的活化、增殖及成熟,并且参与了T淋巴细胞的活化,在自身免疫性疾病及免疫缺陷病中起着重要的作用,因此,BlyS有望成为治疗这些疾病的有效靶目标。

血小板相关参数与急性脑梗死发生、病情程度的相关性

目的:研究血小板相关参数PLT、MPV、PDW,以及RDW/PLT(RPR)与急性脑梗死(acutecerebral infarction,ACI)发生、及初发时面积、NIHSS评分的相关性。方法:回顾性分析97例ACI患者初诊时的血小板相关参数,包括PLT、MPV、PDW、RDW/PLT(RPR)等的水平、梗死面积大小、NIHSS评分等临床资料。比较不同梗死面积、不同NIHSS评分亚组PLT、MPV、PDW、RPR的水平差异。二元Logistic回归危险因素分析研究血小板相关参数中是否存在ACI发生的危险因素,Pearson/Spearman相关性分析评估血小板相关参数与ACI面积、NIHSS评分是否存在相关性。结果:ACI组RPR水平0.052(0.047~0.064)明显高于健康对照组(P=0.016),而MPV水平9.7(9.1~10.4)、PDW水平10.6(9.5~11.6)明显低于健康对照组(P值均为0.000)。危险因素分析显示RPR是ACI发生的危险因素[P=0.010,95%CI=3.057E+20(75471.999~1.239E+36)]。腔隙性梗死组PLT水平明显低于大梗死组和小梗死组(P=0.025),RPR水平明显高于大梗死组和小梗死组(P=0.028)。不同NIHSS评分亚组间仅中度卒中组PDW水平和轻度卒中组差异具有统计学意义(P=0.048)。相关性分析显示PLT与ACI面积存在相关性(r=0.202,P=0.047),PDW与ACI的NIHSS评分存在相关性(r=-0.208,P=0.041)。结论:血小板相关参数与ACI的发生,梗死面积和NIHSS评分均存在相关性,但仍需进一步验证以更好地为临床诊疗提供参考。

人β防御素3融合蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化与活性分析

近年来由于抗生素的不规范使用等多种原因 ,细菌耐药问题日益严重 ,人们正努力从各个方面来解决 ,其中机体天然产生的肽抗生素 (peptideantibiotics)由于其对耐药菌的强大抗菌作用而受到人们的关注。肽抗生素是一种阳离子小分子多肽 ,在天然免疫和获得性免疫中都发挥着重要作用。防御素 (defensin)是肽抗生素中较为重要的一种 ,主要来源于皮肤、呼吸道等的上皮组织 ,是正常机体抵抗外界病原微生物入侵的重要防线。人 β 防御素 3(humanbeta defensin 3,hβD 3)参与人体免疫屏障 ,并因具有广谱抗菌和抗菌活性不被盐离子浓度抑制等特点而具特别的研究开发价值。提取中国人扁桃体组织总RNA ,以RT PCR技术扩增编码hβD 3成熟肽的cDNA并构建于原核表达载体pQE 80L ,IPTG诱导表达后利用SDS PAGE、免疫印记等方法对重组蛋白进行分析。重组蛋白表达量达到细菌表达总量的 4 0 %。重组蛋白自表达菌包涵体中提取后 ,经亲和层析法纯化目的蛋白达到电泳纯 ,经多步透析法复性 ,在体外抗菌实验中表现出了对金黄色葡萄球菌、多重耐药金黄色葡萄球菌等的抗菌活性 。

重组人BAFF_(112-285)的制备及活性分析

目的 制备具有功能活性的重组人TNF家族的B细胞激活因子 (BcellactivatingfactorbelongingtotheTNFfa mily ,BAFF)胞外区 1 1 2～ 2 85氨基酸残基段 (rhBAFF1 1 2 -2 85) ,为BAFF的深入研究奠定基础。方法 提取人HL 6 0细胞总RNA ,经RT PCR扩增编码人BAFF胞外区 1 1 2～ 2 85氨基酸残基 (BAFF1 1 2 -2 85)的cDNA ,行序列测定后 ,构建于原核表达载体pQE 80L并转化大肠杆菌DH5α ,经IPTG诱导表达rhBAFF1 1 2 -2 85,Ni2 + NTA层析纯化 ,进而经3 H TdR掺入实验检测其免疫学活性。结果 RT PCR扩增得到了 5 2 5bp的DNA片段 ,序列分析与GenBank中报道的编码人BAFF1 1 2 -2 85的cDNA序列一致 ,该胞外区片段在大肠杆菌中获得了高效表达 ,表达水平达细菌总蛋白的 4 5 .7% ,经纯化后纯度可达 98.4 % ,活性检测证实其能明显刺激外周血淋巴细胞活化。结论 利用大肠杆菌可高效表达rhBAFF1 1 2 -2 85,所获纯化产物具有生物学活性 。

人HMGB1 B Box的表达及其生物活性

经RTPCR从人新鲜扁桃体组织中扩增人高迁移率族蛋白B1(HMGB1)中的Bbox(88～162残基)的cDNA,构建于载体pUC19,经测序后与GenBank中报道的已知序列完全一致,再构建于原核表达载体pQE80LDHFR中,表达并鉴定目的蛋白.经Ni2+亲和层析柱、多粘菌素B层析柱纯化获得高纯度的DHFRHMGB1Bbox蛋白,然后将此重组HMGB1Bbox加入到人外周血单核细胞(PBMCs)中,37℃,5%CO2下,刺激PBMCs6h,用ELISA检测PBMCs释放TNFα、IL6的量,经检测后证明纯化后的重组HMGB1Bbox能显著地刺激PBMCs释放致炎因子TNFα、IL6.HMGB1Bbox的表达及其生物活性的初步研究,为进一步研究HMGB1Bbox的作用机制以及新型抗炎制剂的研发奠定基础.

外周血T淋巴细胞亚群检测用于恶性肿瘤患者中的临床效果

目的 探讨对恶性肿瘤患者检测外周血T淋巴细胞亚群的临床效果.方法 本次研究对象来源于本院2015年7月至2016年7月收治的恶性肿瘤患者134例,包括肺癌（n=49）、乳腺癌（n=17）、恶性淋巴瘤（n=18）、肝癌（n=20）及结直肠癌（n=30）;另选取同期于本院体检的健康者50例设为对照组,检测并比较6组外周血T淋巴细胞亚群水平,包括CD3＋、CD4＋、CD8＋及CD4＋/CD8＋指标.结果 恶性淋巴瘤组、肝癌组、结直肠癌组及肺癌组CD3＋百分比明显低于对照组（P〈0.05）,恶性淋巴瘤组、肝癌组及结直肠癌组CD4＋百分比明显低于对照组（P〈0.05）,恶性淋巴瘤组、结直肠癌组、肺癌组及乳腺癌CD8＋百分比高于对照组（P〈0.05）,恶性淋巴瘤组、肝癌组、结直肠癌组及肺癌组CD4＋/CD8＋百分比低于对照组（P〈0.05）.结论 恶性肿瘤患者机体免疫存在紊乱或抑制现象,检测外周血T淋巴细胞亚群便于临床诊断疾病与评估预后.

人β-防御素3的cDNA克隆和表达载体的构建

目的 克隆人 β 防御素 3 (hβD 3 )cDNA并构建其原核表达载体 ,为更深入的抗菌肽活性研究及制备新型肽类抗生素创造条件。方法 从人扁桃体组织中提取总RNA ,经RT PCR扩增编码hβD 3成熟肽的cDNA序列 ,将其克隆至pUC18载体进行序列测定 ,然后构建于新型原核表达载体pQE 80L中。结果 RT PCR扩增得到约 13 5bp的目的DNA片断 ,序列分析与GenBank中报道的编码hβD 3成熟肽的cDNA序列完全一致。 结论 hβD 3cDNA的克隆和原核表达载体的构建 ,为进一步制备抗耐药菌的肽类抗生素奠定了基础。

PDP-PEG_(2000)-DSPE修饰的长春新碱脂质体的制备及其包封率测定

目的研制载有长春新碱并用PDP-PEG2000-DSPE对脂质体膜修饰的脂质体并且测定其包封率。方法采用薄膜蒸发超声分散法制备长春新碱脂质体,并用PDP-PEG2000-DSPE对脂质体膜修饰。应用激光电位粒度仪Zeta3000,以去离子水为分散介质测定样品的体积平均粒径。以高效液相色谱法测定其含量和包封率。结果长春新碱脂质体的平均体积粒径大约150nm左右,包封率40%。结论薄膜蒸发超声分散法适用于制备长春新碱脂质体;高效液相色谱法操作简单,准确,重复性好,可用于测定长春新碱脂质体的含量和包封率。

军民融合海上应急医学救援模式构建

目的探讨军民融合海上应急医学救援模式。方法利用地方海难资源和海上救援直升机与救护艇(船)救护平台,军队医院主动加入,形成军地海上联合医学救援的格局,实行联合救援行动。根据事发性质、程度和距离,以救护艇(船)或救援直升机单独驰援施救,或两者联合驰救,军队医院医疗队员多随救护艇(船)参加海上救援的捞、救、送等过程,再进行医院后续医疗救治。结果 26起海难或突发事件39例各类伤病员的救治均获成功,且后送时间明显缩短,救援的针对性、时效性明显增强。通过联合救援,初步形成了三位一体的军民融合式海空一体化海上应急医学救援模式,救治效能明显提高,同时,增强了军队医务人员海上适应性,体能素质和专业技能得到锤练,成为海上应急卫勤保障"实战"练兵平台。结论该模式能较好地适应海难或海上突发事件的应急医学救援。还可通过完善机制、加强基础与装备建设,使救援效能提高,为完成多样化军事任务的海上卫勤保障提供借鉴。

人HMGB1的制备及功能鉴定

目的在克隆人HMGB1(highmobilitygroupbox-1)全长cDNA的基础上,用大肠杆菌进行表达并鉴定其生物学活性。方法用RT-PCR方法扩增人HMGB1cDNA,克隆至载体pUC19行序列测定后,再构建于原核表达载体pQE-80L并转化大肠杆菌DH5α,以IPTG诱导HMGB1蛋白表达,Ni2+-NTA和多粘菌素B亲和层析柱进行纯化后,用培养的人单核细胞系THP1检测重组蛋白活性。结果构建了人HMGB1蛋白的重组表达质粒pQE-80L/HMGB1,获得了纯度约96%的纯化蛋白产物,该蛋白能刺激THP1细胞产生TNF-α。结论成功制备了具有生物学活性的人HMGB1蛋白纯品,为进一步的功能研究奠定了基础。

B细胞活化因子的纯化和复性参数的优化研究

目的 获得高纯度和高活性的B细胞活化因子 (BcellactivatingfactorbelongingtotheTNFfamily ,BAFF)。 方法 重组原核表达载体 pQE 80L BAFF112 2 85在大肠杆菌DH5α中经IPTG诱导表达rhBAFF112 2 85,超声碎菌 ,提取包涵体 ,经Ni2 + NTA亲和层析和SepharcrylS 2 0 0凝胶过滤层析纯化后 ,选择不同氧化还原条件进行复性 ,进而检测其生物学活性。 结果 得到了有较高纯度和较好生物学活性的rhBAFF112 2 85蛋白。结论 优化了BAFF蛋白的纯化和复性的参数 ,所获结果为进一步研究创造了条件。

人TRAIL分子胞外区的克隆及新型表达载体的构建

目的 利用基因工程技术克隆人TRAIL分子胞外区 4 1～ 2 81片断的cDNA ,构建其原核表达载体 ,从而建立原核表达体系。方法 采用RT PCR方法从人早幼粒白血病细胞系HL 6 0的总RNA中扩增TRAIL分子 4 1～ 2 81片断的cDNA ,以限制性酶切和DNA测序进行鉴定 ,并将目的片断克隆至原核表达载体pQE 80L。结果 克隆到人TRAIL分子 4 1～ 2 81片断的cDNA ,DNA测序结果与报道的完全一致 ;构建了该片断的原核表达载体 ,为后续基因工程研究打下了基础。结论 成功克隆人TRALL分子4 1～ 2 81片断的cDNA并构建了其原核表达载体。

人TRAIL分子胞外区的纯化及活性检测

目的 :利用大肠杆菌表达hTRAIL4 1～ 2 81 蛋白 ,并纯化复性成生物活性形式。方法 :以IPTG诱导表达 ,使用Ni NTA层析柱分离纯化蛋白 ,透析法复性 ,SDS PAGE和Westernblot法进行鉴定 ,DNA断裂实验检测hTRAIL4 1～ 2 81 蛋白的凋亡诱导活性。结果 :表达的蛋白以包涵体的形式存在 ,纯化后得到分子量为 30 5kD、纯度在 90 %以上的蛋白 ,Westernblot证实为hTRAIL4 1～ 2 81 分子。经复性 ,DNA断裂实验检测出该蛋白有较好的诱导肿瘤细胞凋亡活性。结论 :成功地利用大肠杆菌表达、Ni NTA层析柱分离纯化、透析法复性hTRAIL4 1～ 2 81 蛋白 ,并证实其具有诱导肿瘤细胞凋亡的生物学活性。

救护艇医疗队海上卫勤支援保障训练体会

通过对本院救护艇医疗队参加海上卫勤演练情况总结分析,查找救护艇医疗队在海上卫勤支援保障训练中存在的问题,提出组织实施海上卫勤支援保障训练的方法,探讨提高救护艇医疗队海上卫勤支援保障能力的对策。