原发性血小板增多症血小板更新率与血栓形成的关系

为了对原发性血小板增多症血小板更新率(turnover)变化与血栓形成的关系进行分析,根据有无血栓症状将26例原发性血小板增多症(ET)患者分成两组,应用流式细胞术检测网织血小板(RP),选择26名健康献血者作为对照。应用羟基脲加α-干扰素对血栓病例进行治疗。结果表明:有血栓ET病例的RP百分数(14.8%±7·2%)比无症状病例的(4.5%±2.3%)和健康对照的(3.3%±1.5%)显著增高(P<0.05);RP百分数在无血栓病例和健康对照中无差异。有血栓病例的RP绝对值比无血栓病例显著升高[(176±37)×109/Lvs(46±12)×109/L]。有血栓ET病例接受羟基脲加α-干扰素治疗后,RP百分数和绝对数均明显降低(P<0.05)。结论:ET病例形成血栓时,与无血栓病例和健康对照相比,其RP百分数和绝对数均显著升高,有血栓的ET患者用羟基脲加α-干扰素治疗疗效良好。

原发性血小板增多症血栓形成与血小板更换率观察

目的观察原发性血小板增多症血栓形成与血小板更换率的相关性。方法根据有无血栓症状将原发性血小板增多症患者分成两组,应用流式细胞仪检测网织血小板,以健康献血者做对照。结果原发性血小板增多症(ET)伴有血栓者的网织血小板(14.6±7.3)%,比无症状病例(4.3±2.4)%和健康对照(3.2±1.4)%显著增高(P<0.05);网织血小板(RP)在无血栓病例和健康对照中无差异。血栓病例的RP绝对值比无血栓病例显著升高[(175±35)×109/L,(47±13)×109/L]。ET病例接受羟基脲加α-干扰素治疗后,RP和网织血小板的绝对值(ARP)均明显降低(P<0.05)。结论ET病例血栓形成与RP和ARP均显著升高有关,适当羟基脲加α-干扰素治疗能使其降低。

人NKp44基因克隆及其在大肠埃希菌中的表达和纯化

目的:对人NKp44进行基因克隆及其在大肠埃希菌中重组表达,为进一步研究NK细胞抗肿瘤作用奠定基础。方法:提取人外周静脉血单个核细胞,培养并加入IL-2进行诱导后收集细胞,分离纯化外周血总RNA。用巢式PCR扩增hNKp44片段(约860bp),克隆至质粒载体pMD18-T,并对克隆的DNA片段进行序列分析。用限制酶EcoRⅠ和NcoⅠ消化pMD18-T-hNKp44重组质粒,分离hNKp44片段,并插入原核表达载体pET30a(+)的相应限制酶位点,酶谱分析鉴定重组表达载体pET30a(+)-hNKp44。转化菌株BL21(DE3)经IPTG诱导,用SDS-PAGE和WesternBlot鉴定表达的重组蛋白。采用His.BindPurificationKit对重组蛋白进行纯化。结果:巢式PCR扩增的DNA片段与hNKp44cDNA大小一致。重组质粒pMD18-T-hNKp44的DNA序列分析显示,克隆的DNA序列与文献报道的hNKp44的cDNA序列一致。SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为35.4×103,其表达量达菌体总蛋白的40%左右。WesternBlot分析显示,重组蛋白能特异地与抗His.Tag抗体结合。纯化得到纯度为95%的重组蛋白,纯化回收率达40%。结论:已经成功地构建了表达重组hNKp44的工程菌株。

NK细胞受体NKp46的研究进展

NKp46是最主要的自然细胞毒受体,在自然杀伤作用中起关键作用,选择性地表达在静息和活化的NK细胞上,其显著特征是以HLA I类分子非依赖方式诱导NK细胞活化直接杀伤靶细胞。NKp46是近年来免疫学领域研究的热点之一。本文介绍NKp46的分子结构和生物学功能的研究进展。

库存时间对浓缩红细胞临床疗效的影响

2002年1月～2004年7月,我们将库存不同时间的浓缩红细胞应用于临床,并对输血后非溶血性输血反应(NHFTR)的发生率进行了比较.现报告如下. 1 资料与方法 选择反复输血且发生过NHFTR的184例患者为研究对象,其中急性白血病32例,再生障碍性贫血68例,慢性粒细胞白血病72例,骨髓增生异常综合征4例,多发性骨髓瘤8例.均经血、骨髓细胞形态学及组织化学检查确诊.随机分为A、B、C、D组各46例,分别输入库存时间＜2天、2～7天、7～14天、＞14天的浓缩红细胞.每组又分为观察组和对照组各23例,另取20例外科创伤无输血者为阴性对照组. 按一次性去白细胞过滤器说明书规范操作,过滤4种库存时间的浓缩红细胞,观察组每例输注2U;对照组输注未过滤白细胞浓缩红细胞,每例2U.记录各组发生NHFTR的情况.发生NHFTR者输血过程中或输后3小时内腋下体温＞38.5℃时,立即抽取外周静脉血4ml(肝素抗凝),2000r/min离心10分钟取上清液无菌分装,-20℃冻存待检;无NHFTR者输血后3小时,对照组早晨空腹抽4ml外周静脉血,处理同上;测定IL-1β、IL-6和IL-8(按说明书操作),设空白对照,标准溶液和标本均设复孔.终止反应在酶标仪上,波长450nm读取OD值,以标准溶液和相应OD值做出标准曲线,标本含量在标准曲线上得到.统计学分析采用方差分析、t检验和χ2检验;P＜0.05为有显著性差异.

人NKp46基因克隆及其在大肠杆菌中的表达和纯化

目的:对人NKp46进行基因克隆并探讨其在大肠杆菌中重组表达和纯化。方法:用RT-PCR法自人外周血单个核细胞总RNA扩增hNKp46片段(约900 bp),克隆至质粒载体pMD18-T,并对克隆的DNA片段进行序列分析。用限制酶EcoRⅠ和NcoⅠ消化pMD18-T-hNKp46重组质粒,分离hNKp46片段,并插入原核表达载体pET30a(+)的相应限制酶位点,酶谱分析鉴定重组表达载体pET30a(+)-hNKp46。转化菌株BL21(DE3)经IPTG诱导,用SDS-PAGE和Western Blotting鉴定表达的重组蛋白。采用His.BindPurification Kit对重组蛋白进行纯化。结果:RT-PCR扩增的DNA片段与hNKp46 cDNA大小一致。重组质粒pMD18-T-hNKp46的DNA序列分析显示,克隆的DNA序列与文献报道的hNKp46的cDNA序列一致。SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为38.5 kD,其表达量达菌体总蛋白的40%左右。Western Blotting分析显示,重组蛋白能特异地与抗His.Tag抗体结合。纯化得到纯度为95.5%的重组蛋白,纯化回收率达40%。结论:成功构建了人NKp46表达载体,并获得了稳定表达的工程菌株,纯化了重组蛋白。

血标本存放温度和时间对ALT检测结果的影响

目的探讨血标本存放温度、时间对丙氨酸氨基转移酶检测结果的影响。方法采集血标本存放于不同温度,于不同时间测定葡萄糖(Glu)、pH值、丙酮酸(PYR)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)含量,比较其含量的变化。结果16℃以下温度存放时间低于4h的血标本转存4℃冰箱后72h内对ALT活性单位变化的影响不大,但随着存放时间的延长,温度的升高,对ALT检测结果的影响越显著。结论ALT检测的活性单位与血标本存放的温度高低、时间的长短有密切的关系。

Rh(D)阴性手术患者输血方案探讨

目的探讨Rh(D)阴性手术患者的输血方案。方法术前制定不同的输血方案,将Rh(D)阴性手术患者分为4组:第1组为择期手术,术中出血可能性小,放弃常规备血,只备以冷冻红细胞;第2组为择期手术,术中出血可能性大,符合自身输血标准,对患者进行储存式自体输血;第3组为择期手术,但不符合自身输血标准,采集新鲜血液;第4组为急诊手术,采用冷冻红细胞(第1、3组分别备有冷冻红细胞的情况下进行)。结果第1组20例,均未输注红细胞;第2组14例未输异体血,仅有1例输用2U冷冻红细胞;第3组1例输注2U冷冻红细胞,19例输用备用血液后未再输血;第4组3例全部输用冷冻红细胞,所有手术均顺利实施,且没有造成血液浪费及耽误临床用血。结论针对Rh(D)阴性患者不同情况术前制定合理的输血方案可以保证临床用血并可有效节约血源。

不同储存时间后过滤白细胞对浓缩红细胞临床疗效的影响

白细胞是人体自然防御系统的重要组成部分,但随同血液制品异体输用时可产生许多副作用,如非溶血性发热反应(NHFTR),血小板输注无效(PTR),输血后移植物抗宿主病(TA-GVHD)以及可能传播细胞相关病毒CMV、HTLV-Ⅰ/Ⅱ等[1,2].去白细胞过滤器滤除白细胞简单、易行、有效,已得到较广泛的应用,笔者对储存不同时间的浓缩红细胞滤除白细胞后在临床应用中的效果作了初步探讨,供同行参考.

临床输血工作的质量管理

输血是现代医学中重要的抢救、治疗手段。输血工作质量直接关系到病人的救治效果，甚至影响全院的医疗质量，搞好输血工作的质量管理不仅可以提高输血科的自身水平，而且对提高医院医疗质量有重要作用。由于本院近年来狠抓输血质量管理，因此从未发生过由于输血质量而引起的医疗纠纷。下面就本院的输血工作质量管理谈几点体会。1加强组织管理医院成立了由院长、医务处、输血科及临床用血科室有关人员组成的临床输血管理委员会，业务副院长担任主任，对全院输血工作进行指导，定期召开会议，分析血液及血液使用中存在的问题，并及时处理。

公民逝世后器官捐献体系建设的构想

近年来,我国的器官捐献体系建设已取得突破,但仍存在职责不明、信息不畅、监管不到位、工作效率不高等问题。本文拟就改进和完善我国公民逝世后器官捐献体系作一探讨,目标是建立红十字会主导下的器官捐献行政管理与监督机构,建立全面覆盖、畅通便捷的器官捐献信息网络,建立依附于区域移植中心的器官获取组织。

红细胞单采术在真性红细胞增多症患者中的应用

目的 观察红细胞单采术对真性红细胞增多症患者的疗效。方法 应用全自动细胞分离机采集患者的红细胞 ,抗凝剂与全血比例为 1∶9。首次采集结束后 ,间隔 3d后进行第 2次采集 ,同时口服羟基脲治疗。结果 3名患者RBC及Hb降至正常水平 ,临床症状消失 ,出院后 6个月随访 ,状况良好。结论 单采红细胞术对降低真性红细胞增多症患者的红细胞数、Hb和Hct迅速 ,配合药物治疗 ,其效果快、操作简单 。

单采血小板输注RhD抗原引起的同种免疫作用及其临床应用

目的研究单采血小板(APC)输注中由RhD抗原引起的同种免疫频率及其临床应用效果。方法在没有预防性应用Rh免疫球蛋白的情况下,给予RhD阴性的血小板减少症出血患者RhD阳性血小板,测定输注前及输注后1h的外周血血小板计数(BPC),计算校正血小板增加值(CCI)来评估临床疗效;在接下来的随访中,以低离子强度间接抗球蛋白试验检测每份标本的抗-D水平,计算同种免疫频率。结果输注后27例患者出血症状均得到明显缓解,输注后1h的CCI为(12.7±1.2)×109/L;输注RhD不合血小板引起的同种免疫频率为3.7%。结论输注RhD不合APC临床疗效明显,引起同种免疫反应几率很低,在紧急情况下可给予RhD阴性患者RhD阳性的APC。

人白细胞介素26的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

克隆人白细胞介素-26(human interleukin-26,hIL-26)基因,构建高效稳定的大肠杆菌表达菌株。对GenBank上报道的hIL-26基因进行序列分析后设计合成引物,利用RT-PCR技术从人外周血单个核细胞(PBMC)总RNA中反转录并扩增得到人成熟肽IL-26基因。将得到的基因克隆到pMD18-T载体中,菌落PCR筛选、酶切鉴定并进行DNA序列分析。用BamHI和EcoRⅠ将目的片段切下,插入表达载体pBV220相应的位点。42℃热诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE分析显示表达蛋白约占菌体总蛋白的20%,Western印迹法证实重组蛋白为特异性蛋白,分子筛纯化后纯度达90%以上。表达的重组蛋白经谷胱甘肽复性缓冲液复性,用RT-PCR检测复性的重组蛋白能促进PBMC合成IFN-γ。

结肠癌根治术输入异体白细胞对患者免疫细胞水平的影响

目的探讨乙状结肠癌根治术输血中异体白细胞对患者免疫细胞检出率的影响。方法采用流式细胞术对乙状结肠癌根治术患者外周血的NK细胞、CTL细胞和单核/巨噬细胞的检出率进行了检测和术前后对比分析。结果输浓缩红细胞的乙状结肠癌根治术患者其外周血中的NK细胞、CTL细胞和单核/巨噬细胞的检出率均显著低于相应的无输血对照组(P<0.05);然而,浓缩RBC中的异体白细胞被去除后再输注的乙状结肠癌根治术患者其外周血中免疫细胞的检出率与无输血对照组的检出率无显著性差异(P>0.05)。结论乙状结肠癌根治术输血中的异体白细胞能引起患者免疫细胞水平明显下降。