microRNAs在肿瘤干细胞中的研究进展

microRNAs(miRNAs)是一类非编码的小RNA,在肿瘤发生发展及侵袭转移中发挥着至关重要的作用。肿瘤干细胞是导致恶性肿瘤复发、转移和耐药的主要根源。研究发现miRNAs可以促进或抑制肿瘤干细胞"干性"的维持,调控肿瘤干细胞的分化及自我更新,从而参与肿瘤的发生发展过程。本文详细介绍了肿瘤干细胞中miRNAs的表达情况及调控机制,阐述其在肿瘤诊断及治疗中的潜在作用。

RNA干扰人永生化食管上皮恶变细胞中核干细胞因子对PI3K/AKT表达的影响

目的:研究抑制人永生化食管上皮恶变细胞(SHEEC)中核干细胞因子(NS)对PI3K/AKT信号转导通路中相关分子表达的影响。方法:将干扰试剂(NS-RNAi)转染至SHEEC中以抑制NS的表达,以SHEEC组、阴性对照组(NC组)和MOCK组为对照,采用RT-PCR和Western blot方法检测干扰后PI3K/AKT通路中相关因子mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:NS-RNAi成功转染至SHEEC中。抑制SHEEC中NS的表达后PI3K和AKT mRNA的相对表达量为(0.460±0.207)和(0.492±0.233),与SHEEC组、NC组和MOCK组比较,差异有统计学意义(P均<0.05);干扰NS表达后PI3K和AKT蛋白的相对表达量为(0.353±0.361)和(0.312±0.068),与SHEEC组、NC组和MOCK组比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论:抑制SHEEC中NS表达后PI3K/AKT信号通路中相关因子的表达均明显下降,PI3K/AKT信号通路可能是NS发挥作用的一种非依赖P53作用的信号途径。

永生化食管上皮恶变细胞中核干细胞因子、细胞周期蛋白B1和PTEN的表达

目的观察核干细胞因子(nucleostemin,NS)、细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)及抑癌基因PTEN mRNA和蛋白的表达情况。方法正常食管上皮细胞(shantou human embryonic esophageal epithelial cell line,SHEE)和永生化食管上皮恶变细胞(shantou human embryonic esophageal carcinoma epithelial cell line,SHEEC)连续传代培养,取对数生长期SHEE和SHEEC细胞,采用RT-PCR及Western blot方法检测细胞中NS、Cyclin B1及PTEN mRNA和蛋白的表达并做相关性分析,MTT法检测抑制NS表达后的细胞增殖活性。结果以SHEE细胞中NS、Cyclin B1和PTEN mRNA的表达量为1,SHEEC细胞中对应的相对表达量分别为(2.047±0.507)、(2.214±0.213)及(0.668±0.188),两组比较差异均有统计学意义(P<0.05);SHEE及SHEEC细胞中NS、Cyclin B1及PTEN蛋白表达量分别为(1.142±0.113),(3.161±0.108)、(1.585±0.056),(2.173±0.058)及(1.894±0.341),(1.162±0.524),两组比较差异均有统计学意义(P<0.05);NS mRNA和蛋白与Cyclin B1 mRNA和蛋白的表达呈正相关(r=0.832,P<0.01;r=0.991,P<0.05),与PTEN mRNA和蛋白的表达呈负相关(r=-0.924,P<0.01;r=-0.769,P<0.05);MTT检测结果显示,NS RNA干扰(RNA interference,RNAi)组与空白对照组和阴性对照组在干扰后12 h细胞增殖能力差异无统计学意义(P>0.05),而在干扰后24、36、48 h差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SHEEC细胞中NS、Cyclin B1 mRNA和蛋白的表达量均高于SHEE,而PTEN的表达量低于SHEE,NS可能对细胞恶变有影响。

营养状况对中国食管癌疾病谱和精准防控策略的影响

全世界每年新发生的60余万例食管癌患者中,一半以上发生在中国[1-2],其突出的流行病学特征主要表现在:①显著的地域性分布差异,形成明显的高、低发区,二者发病率和死亡率最高相差500倍[3]。河南、河北和山西三省交界的南太行山地区,特别是河南林州及其毗邻的辉县、安阳、磁县、涉县、长治等地区是中国,也是世界上食管癌发病率和死亡率最高的地区。

牙龈卟啉单胞菌:从毒力因子到疫苗研发

牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)是革兰氏阴性口腔致病菌之一,其定植于牙龈内厌氧菌生物膜中,引起局部牙周炎。Pg由定植的牙龈局部通过体液扩散到全身引起多种疾病,如:心脑血管疾病、自身免疫性疾病、阿尔兹海默症、癌症等。药物难以到达牙龈部位且持续给药易引起菌体的耐药,不能达到根除的效果。因此,选择合适的抗原位点刺激机体免疫系统产生中和抗体是疫苗研究的关键。本文对Pg的致病及其机制进行了概括,并全面综述了相关的毒力因子,为清除和预防Pg感染提供靶标,同时从疫苗学角度评价和分析这些毒力因子作为疫苗的潜力。

谷氨酰胺转运载体SLC1A5对食管鳞癌细胞恶性生物学的影响及其机制

目的探讨谷氨酰胺转运载体SLC1A5在食管鳞癌细胞系中的表达、对增殖和侵袭的影响及其作用机制。方法采用实时定量PCR及免疫印迹法检测人正常食管上皮细胞系(SHEE)和食管鳞癌细胞系(KYSE30、KYSE70、KYSE140、TE1)中SLC1A5的表达水平。在SLC1A5高表达的KYSE70细胞中采用CRISPR/Cas9方法敲除SLC1A5,采用CCK8测定和划痕实验检测对照、敲除SLC1A5和使用SLC1A5抑制剂V-9302后KYSE70细胞的增殖和迁移能力。采用GSH/GSSG试剂盒检测对照、敲除SLC1A5和使用SLC1A5抑制剂V-9302后KYSE70细胞的谷氨酰胺代谢情况。结果SLC1A5在食管癌细胞系KYSE70中高表达,与正常食管上皮中的表达有统计学差异(P<0.05)。SLC1A5敲除或被抑制的KYSE70细胞的增殖能力低于未处理细胞(P<0.05),处理组划痕的迁移面积较未处理组明显减少(P<0.05),处理组的GSH/GSSG比率较未处理组的显著降低(P<0.05)。结论SLC1A5在ESCC细胞系中表达增高,抑制SLC1A5可降低ESCC细胞的增殖迁移能力与谷氨酰胺代谢,SLC1A5可能是食管癌治疗的潜在靶点。

牙龈卟啉单胞菌通过miR-21-5p/RASA1/ERK信号通路促进食管鳞癌自噬

目的探讨牙龈卟啉单胞菌(Pg)促进食管鳞癌(ESCC)细胞自噬发生的分子机制。方法Pg感染siAtg7或氯喹(CQ)预处理的KYSE70细胞和KYSE140细胞,Western blot检测Atg7、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和p62蛋白,荧光共聚焦显微镜检测mRFP-GFP-LC3标记ESCC细胞自噬流,CCK-8法检测ESCC细胞活性,迁移小室检测ESCC细胞迁移及侵袭能力。miR-21-5p inhibitor、RASA1过表达或U0126分别阻断miR-21-5p/RASA1/ERK信号通路,如上检测自噬相关表型变化。免疫组化检测ESCC组织中Pg丰度和LC3蛋白表达,RT-PCR检测ESCC及其癌旁组织中miR-21-5p的表达,统计分析Pg、LC3和miR-21-5p相关性。结果Pg感染诱导KYSE70细胞和KYSE140细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达上调、p62蛋白表达下调,增加了mRFP-GFP-LC3标记细胞中的红色、绿色和黄色荧光斑点数目和荧光强度,同时促进KYSE70细胞和KYSE140细胞增殖、迁移和侵袭能力增加,上述Pg诱导的ESCC细胞表型改变被CQ或siAtg7预处理逆转。miR-21-5p inhibitor、U0126或RASA1过表达质粒的预处理,也同样逆转了Pg对ESCC细胞自噬的促进作用。Pg丰度与miR-21-5p、LC3蛋白表达呈正相关。结论Pg通过miR-21-5p/RASA1/ERK信号通路促进ESCC自噬发生。

食管癌手术治疗及预后研究进展

食管癌是我国危害国民健康的重大疾病之一,切除或破坏瘤体是治疗食管癌的基本方法。食管癌手术治疗包括开放式切除术、腔镜微创切除术以及内镜下的切除和非切除疗法等。根据肿瘤的大小、部位、类型和患者的身体状况、疾病分期等选择合适的术式,预防和减少并发症,是延长生存期、提高生存质量、改善预后的基本途径。本文结合国内外进展,总结当前临床上在用的各种食管癌治疗术,以及各种术式的预后及其影响因素等,供临床治疗方案选择和相关研究者参考。

牙龈卟啉单胞菌通过GARP促进TGF-β/SMAD轴介导食管鳞状细胞癌细胞的上皮间质转化

目的:阐明牙龈卟啉单胞菌(Pg)诱导食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞发生上皮间质转化(EMT)的分子机制。方法:KEGG分析Pg诱导的ESCC差异表达基因富集的生物学通路,WB和/或免疫荧光法检测Pg诱导的ESCC细胞中糖蛋白A重复优势蛋白(GARP)、TGF-β、pSMAD/SMAD、Snail、Oct4和EMT相关分子表达的变化,ELISA检测TGF-β1水平的变化,免疫组织化学法检测ESCC组织中GARP和TGF-β1的表达规律,Transwell实验和动物实验验证Pg对ESCC的促进作用。结果:ESCC细胞感染Pg后,TGF-β、Hippo、PI3K/Akt等信号通路被激活;Pg感染刺激ESCC细胞分泌总TGF-β1和活性TFG-β1的水平升高(均P<0.01),使SMAD2/3磷酸化并发生核转位,诱导N-cadherin、Snail、Oct4等蛋白表达升高、E-cadherin蛋白表达降低,由此促进ESCC细胞的迁移、侵袭和裸鼠皮下移植瘤的生长(均P<0.01)。在ESCC细胞中沉默GARP表达后,逆转了Pg所诱导的上述ESCC细胞表型变化。Pg丰度高的ESCC组织中TGF-β1和GARP蛋白表达高于低丰度的ESCC组织,且Pg丰度与TGF-β1、GARP表达存在正向关联(P=0.0015)。结论:Pg通过GARP激活TGF-β/SMAD轴促进ESCC细胞发生EMT,进而促进ESCC细胞的迁移、侵袭和生长,清除Pg或阻断TGF-β信号转导则可阻断上述Pg对ESCC的促进作用。

PSME2和STAT3双重抑制通过合成致死效应诱导食管鳞癌细胞死亡

蛋白酶体激活物复合物亚基2(proteasome activator complex subunit 2,PSME2)表达异常与多种肿瘤发生发展密切相关,但在食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中功能及临床意义尚不明确。本研究分析了TCGA-ESCC和GSE53625数据库中ESCC转录物组数据,发现PSME2高表达组ESCC患者预后不良,且ESCC组织中PSME2蛋白表达水平高于癌旁组织。沉默KYSE30细胞和NE6-T细胞中PSME2表达,ESCC细胞的增殖、侵袭、迁移和克隆能力均显著下降,同时伴随着LC3-II/LC3-I蛋白表达明显升高、p62蛋白表达降低和自噬激活。GSEA富集分析表明,PSME2低表达组IL-6/STAT3信号通路激活,沉默KYSE30细胞和NE6-T细胞诱导了IL-6分泌和p-STAT3表达增加。上述PSME2沉默诱导的分子变化,能够被LMT28或WP1066逆转。PSME2沉默联合WP1066,使KYSE30与NE6-T细胞培养上清中LDH含量明显升高,Calcein/PI染色表明,死亡细胞率分别为36.69%和32.55%,显著高于PSME2沉默(6.78%和6.74%)或WP1066单独处理组(18.34%和9.70%)。本研究表明,PSME2促进ESCC恶性进展,PSME2沉默通过IL-6/STAT3信号通路代偿性激活ESCC自噬,联合PSME2沉默和STAT3抑制通过合成致死效应诱导食管鳞癌细胞死亡,表明PSME2是ESCC潜在分子治疗靶点,联合抑制PSME2和STAT3是ESCC治疗的新选择。

放射治疗对食管鳞癌患者口腔牙龈卟啉单胞菌的清除作用

目的检测食管鳞癌患者放疗前、中、后口腔牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)的变化,探讨放射治疗对口腔Pg的清除作用。方法30例经病理证实的食管鳞癌患者,采用Elekta-precise计划系统制定适形调强放疗计划,处方剂量为50~50.4 Gy/25~28次,放疗前、中、后每周1次收集患者口腔拭子(每人6份,共180份),用qPCR法进行Pg定量检测。统计学数据采用秩和检验分析。结果30例食管鳞癌患者初始口腔Pg检测结果为:60%(18/30)为阴性,40%(12/30)为阳性,其中12例阳性患者在放疗结束后83.33%(10/12)转为阴性,16.67%(2/12)仍为阳性(2例未转阴患者口腔Pg量较放疗前明显减少(P<0.05)。结论食管鳞癌患者在接受食管肿瘤部位放射治疗过程中,口腔Pg可被同时清除或减少。

基于16S rRNA基因测序分析食管鳞癌患者食管菌群分布特征

目的描述食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)患者癌组织和邻近癌旁组织食管菌群组成和结构特点,筛选两组差异性菌群。方法收集安阳市肿瘤医院48例经病理学确诊的原发性ESCC的癌组织和邻近癌旁组织,对16S rRNA基因的5个变异区(V2、V3、V5、V6、V8)进行测序,采用Wilcoxon秩和检验比较两组菌群Alpha多样性及相对丰度差异。结果与癌旁对照组相比,ESCC癌组织Alpha多样性升高。厚壁菌门、拟杆菌门、变形菌门和梭杆菌门是ESCC组及癌旁对照组的主要菌门。和癌旁对照组相比,ESCC组含有较高丰度的梭杆菌门及螺旋菌门,较低丰度的放线菌门和蓝藻门(P<0.05)。属水平上,ESCC组梭杆菌属、嗜二氧化碳噬纤维菌属、卡氏菌属和密螺旋体属菌群丰度显著高于癌旁对照组,而葡萄球菌属和微单胞菌属丰度低于癌旁对照组(P<0.05);种水平上,ESCC组具核梭杆菌、牙周梭杆菌、生痰二氧化碳嗜纤维菌和牙龈卟啉单胞菌等丰度高于癌旁对照组,而异乳链球菌和鞘氨醇单胞菌丰度低于癌旁对照组。结论ESCC患者肿瘤和邻近正常肿瘤组织样本的食管微生物组成存在显著差异。

中国食管癌光动力治疗临床应用专家共识(2024年修订版)

光动力治疗是恶性肿瘤的一种新型治疗方法,可应用于多种肿瘤,从而达到根治性或姑息性治疗的目的,光动力治疗创伤小、组织特异性强,而且可以进行反复治疗,在早期或中晚期食管癌的治疗中具有重要作用。本文详细描述了食管癌光动力治疗的适应证、禁忌证、并发症的处理以及疗效评价标准等,并经专家组讨论达成此共识。

RgpB通过抑制自噬小体与溶酶体融合避免Cx43降解参与食管癌化疗耐药

目的探讨牙龈卟啉单胞菌(Pg)的毒力因子RgpB在食管鳞癌化疗耐药中的作用机制。方法采用免疫沉淀-质谱联用技术筛选与Pg的毒力因子RgpB互作的自噬调节因子;运用免疫共沉淀实验探索RgpB和自噬调节因子TBC1D5之间的相互作用;采用蛋白免疫印迹法测定Pg感染对食管癌细胞膜受体分子Cx43表达的影响;使用细胞免疫荧光检测Lamp1、Cx43与TBC1D5的关系;利用自噬双荧光观察Pg感染对自噬小体与溶酶体融合的影响;使用平板克隆及CCK-8法检测Pg感染及Cx43抑制剂在使用化疗药后对食管癌细胞系增殖作用的影响。结果免疫沉淀-质谱联用技术筛选出与RgpB互作的自噬调节因子TBC1D5;免疫共沉淀结果显示,Pg分泌的毒力因子RgpB可与自噬调节因子TBC1D5直接结合并相互作用;蛋白免疫印迹法结果显示,感染Pg后食管癌细胞膜Cx43表达量高于未感染组(P<0.05);细胞免疫荧光结果显示,在感染Pg后,Cx43在细胞膜表面的表达量增加(P<0.05);stubRFP-sensGFP-LC3自噬双荧光结果显示,在Pg感染时,自噬体与溶酶体融合受到阻断;平板克隆及CCK-8法结果显示,使用化疗药后,Cx43抑制剂能够逆转Pg感染对食管癌细胞系的促进作用。结论Pg入侵食管癌,其毒力因子RgpB阻碍自噬小体与溶酶体融合,从而使膜受体分子Cx43免受溶酶体降解,导致食管癌化疗耐药。

河南食管鳞癌高低发区口腔健康和牙龈卟啉单胞菌感染状况比较

目的比较分析河南食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)高发区和低发区无症状人群中口腔卫生和牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)感染特征,为ESCC病因学预防提供理论依据。方法选择河南ESCC高发区1388个和毗邻低发区486个无症状当地居民,通过面对面的问询方式收集人口学特征并评估口腔健康状况,采集口腔拭子和外周血样本,实时定量PCR检测Pg,比较分析ESCC高发区和低发区口腔健康状况和Pg感染特征,Logistic回归分析口腔Pg丰度对口腔健康不良的影响。结果河南ESCC高发区无症状研究对象中度和重度牙龈出血、牙齿缺失>17颗、每天刷牙多于1次、Pg感染等百分比高于低发区研究对象,口腔Pg丰度与不良口腔健康指征显著相关,并显著增加ESCC高发区研究对象牙结石、牙龈出血和牙齿缺失的发生风险。结论河南ESCC高发区无症状居民口腔卫生不良和Pg感染率显著高于紧邻的低发区人群,且口腔高丰度Pg显著增加口腔卫生不良指征的发生风险,为ESCC高发区易感人群食管癌病因预防提供了理论依据。

纳米载药系统在食管癌放疗增敏联合多途径治疗中的应用

食管癌治疗通常包括手术、化疗和放射治疗。近年来,放射治疗领域涌现了多项创新治疗方法,放疗增敏通过药物或其他方法提高肿瘤细胞对放射线的敏感性,同时降低对周围正常组织的损伤,从而大幅提高食管癌放疗效果。纳米载药系统作为新兴的药物递送平台,具有尺寸效应和高比表面积等特性,特别是可以实现药物在体内的靶向释放,有优化药物体内分布、降低毒性、增加定向性等优势,在食管癌的放疗增敏方面表现出巨大潜力。本文综述了纳米载药系统在食管癌放疗增敏中的研究进展,并结合目前纳米载药系统研究的几个关键进展方向,探讨了放疗增敏与其他治疗手段联合应用的潜力和优势。

内镜下微波灼扩联合探条扩张治疗食管癌/贲门癌术后吻合口狭窄

目的探讨内镜下微波高温凝固联合探条扩张对食管癌/贲门癌术后吻合口狭窄的疗效。方法采用前瞻性研究,90例食管癌/贲门癌术后吻合口狭窄病人随机分为微波组、探条组、联合组各30例,治疗后跟踪观察吻合口狭窄改善情况。结果治疗1周后有效率(CR+PR):微波组为93.3%,探条组为100%,联合组为100%(与前两组比较P>0.05);1个月后微波组为70.0%,探条组为16.7%,联合组为93.3%(与前两组比较分别为P>0.05,P<0.01);3个月后微波组为53.3%,探条组为6.7%,联合组为86.7%(与前两组比较P<0.01)。结论内镜下微波高温凝固联合探条扩张是食管癌/贲门癌术后吻合口狭窄的最佳选择。

奥沙利铂联合卡培他滨治疗高龄晚期贲门癌的临床研究

目的:观察奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)联合卡培他滨(Capecitabine,CAPE)治疗高龄晚期贲门癌(Gas-tric cardiac adenocarcinoma,GCA)的疗效和安全性。方法:80例GCA患者,根据年龄分为高龄组(≥75岁)38例和对照组(<75岁)42例,均采用XELOX方案化疗,即L-OHP 65mg/m2静脉滴注2h,d1、d8,CAPE1000mg/m2口服,2次/天,d1～d14,21天为1个周期,连续4～6个周期。化疗2个周期后评价肿瘤化疗敏感性和吞咽困难改善情况;化疗结束4周后进行近期疗效和不良反应评价。结果:高龄组和对照组比较,化疗敏感性分别为76.3%(29/38)和78.6%(33/42),无显著性差异(χ2=0.058,P>0.05);吞咽困难改善率分别为86.8%(33/38)和81.0%(34/42),无显著性差异(χ2=0.509,P>0.05);两组近期疗效分别为78.9%(30/38)和78.6%(33/42),无显著性差异(χ2=0.002,P>0.05);两组不良反应均为可逆,两组相比无显著性差异(P>0.05)。结论:L-OHP联合CAPE治疗高龄晚期GCA疗效较好,改善症状快,不良反应患者可以耐受。

贲门癌癌旁和无症状人群贲门黏膜活检组织肠上皮化生检测

目的:探讨贲门癌癌旁组织及无症状人群贲门黏膜活检组织肠上皮化生(IM)的分布特征。方法:采用艾显蓝-雪夫(AB-PAS)和高铁二胺-艾显兰(HID-AB)黏液组织化学染色法,对河南贲门癌高发区70例贲门癌癌旁组织和320例无症状人群贲门黏膜活检组织中的IM进行检测。结果:贲门癌癌旁组织的IM检出率38.5%(27/70),高于无症状人群贲门黏膜活检组织中的IM检出率4.4%(14/320)(χ2=71.3945,P<0.01)。贲门癌癌旁组织IM不完全型占92.6%(25/27),完全型IM占7.4%(2/27);无症状人群贲门黏膜的IM不完全型占7.1%(1/14),完全型IM占92.9%(13/14);2者比较,差异有统计学意义(χ2=29.0157,P<0.01)。贲门癌旁组织的IM大肠型占59.2%(16/27),小肠型占40.8%(11/27);无症状人群贲门黏膜的IM小肠型占92.9%(13/14),大肠型占7.1%(1/14);2者比较,差异有统计学意义(χ2=10.3173,P<0.01)。结论:IM可能是河南贲门癌高发区贲门癌癌前病变的一种重要表现形式;不完全型和大肠型IM可能是贲门癌前病变的独特组织学类型。