基于二代测序的HLA-Ⅱ类等位基因多态性研究及等位基因丢失防范策略

目的:研究二代测序技术(NGS)检测深圳地区随机健康无关汉族人群HLA-DRB1、DQB1、DQA1、DRB3、DRB4、DRB5、DPA1、DPB1等位基因多态性的精确性,探讨HLA-DRB1等位基因丢失的原因及室内关键质控体系建立策略。方法:采用Mi Seq DxTM NGS平台对1012例样本完成HLA-II类等位基因分型。对质控体系软件提示的疑难样本和HLA-DRB1纯合子样本采用PCR-SSOP法或PCR-SBT法进行确认。结果:检出HLA-DRB1、DRB3、DRB4、DRB5、DQA1、DQB1、DPA1、DPB1等位基因分别有45、7、5、7、17、21、10、27种。常见等位基因(频率>10%)有HLA-DRB1*09:01(17.09%)、15:01(10.72%);DRB3*02:02(25.99%)、03:01(10.18%);DRB4*01:03(36.46%);DRB5*01:01(15.42%);DQA1*01:02(20.01%)、03:02(17.19%);DQB1*03:01(19.47%)、03:03(17.98%)、05:02(11.66%)、06:01(10.67%);DPA1*02:02(54.45%)、01:03(31.18%);DPB1*05:01(39.13%)、02:01(16.90%)。HLA-DRB1和DQB1位点基因频率与中国常见及确认的HLA等位基因表(CWD2.4)进行统计学比较,差异无统计学意义(χ^(2)=12.68,P>0.05)。对NGS检出的94例HLA-DRB1纯合子样本采用PCR-SSOP法进行复检,检出HLA-DRB1位点漏检等位基因1例,通过SBT法确认为漏检DRB1*04:03等位基因,为此建立了本实验室室内质控体系。检出新等位基因2例,获WHO HLA系统因素命名委员会命名。结论:基于NGS-HLA分型方案的HLA分型结果,模棱两可结果比率更低。HLA-II类等位基因在深圳地区无关健康供者汉族人群中存在遗传多态性。在临床组织相容性试验中独立使用NGS方法存在局限性,需要内部质量控制策略来防范偶发的等位基因丢失事件。

为提升IPTR患者血小板输注后CCI值建立分级规避HLA抗体对应抗原方法及HLAMatchmaker的应用研究

目的:建立分级规避HLA抗体MFI阈值对应抗原方法,联合应用HLAMatchmaker表位计算法,选择供患者表位最小错配评分值,评估两种方法为免疫性血小板输注无效(Immune platelet transfusion refractoriness,IPTR)患者选择HLA相容性血小板供者,在提升血小板输注后校正增加值(CCI)的应用价值。方法:采用SPRCA法完成51例IPTR患者的7807次血小板交叉配型实验,判断其免疫反应阴/阳性结果。采用Luminex单抗原流式微珠法检测患者的HLA-I类抗体,获得不同特异性抗体对应HLA-I类抗原MFI值,并将其分组及分级,强阳性组(MFI>4000,1级)、中阳性组(1000中阳性组>弱阳性组)。强阳性和中阳性组与阴性对照组之间的SPRCA实验免疫反应阳性结果检出数存在统计学差异(P<0.001),弱阳性位组和阴性对照组之间的SPRCA实验免疫反应阳性结果检出数无统计学差异(P>0.05)。设置强阳性组为相应特异性HLA位点对应抗原1级规避阈值,中阳性组为2级规避阈值,弱阳性组为3级规避阈值,在供者血小板紧缺情况下,可以不需要规避弱阳性组。规避1和2级HLA-I类抗体对应供者抗原及选择HLAMatchmaker表位错配评分数≤7血小板供者策略,24 h内CCI值均>4.5×109/L,均可获得临床血小板输注有效。结论:在为IPTR患者选择HLA-I类相容性供者时,分级规避HLA-I类抗体对应供者抗原,综合选择供受者HLAMatchmaker表位错配评分数≤7,经血小板交叉配型实验确认为阴性结果的供者选择策略,对提升IPTR患者血小板计数具有一定实际应用价值。

中国南方汉族急性淋巴细胞白血病与HLA基因相关性研究

为了研究中国南方汉族急性淋巴细胞白血病与人类白细胞抗原HLA-A、B、DRBI基因的遗传相关性,找 出ALL的易感基因,对以DNA作HLA基因分型的南方汉族人群的201例ALL患者进行甄选,并以4707例南方汉 族的志愿捐献造血干细胞的健康供者作为正常对照组,对两组间HLA等位基因多态性分布,通过HIA等位基因频 率(GF)分布的x2检验、显著性差异进行比较,计算疾病的危险率(RR)、病因分数(EF)和预防分数(PF),研究 ALL与HLA等位基因相关性。结果表明:南方汉族ALL患者的HLA-A26(GF=4.32％,x2=4.90,RR=1.774,EF =0.036),B56(GF=1.92％,x2=4.65,RR=2.116,EF=0.023),DR9(GF=1.29％,x2=3.99,RR=1.349,EF =0.092)3个基因频率显著高于正常对照组(P<0.05);HLA-A30(GF=1.25％,x2=3.92,RR=0.415,PF= 0.081),A33(GF=1.78％,x2=4.842,RR=0.612,PF=0.110)和B58(GF=1.83%,x2=7.21,RR=0.516,PF= 0.149)3个基因频率显著低于正常对照组(P<0.05)。结论:HLA-A26、B56、DR9 3个HLA基因与ALL有较强的 相关性,对南方汉族ALL患者可能有遗传易感作用;HLA-A30、A33、B58 3个基因可能是保护性基因。

安徽汉族HLA-A、B、DRB1基因多态性和单倍型的分布特征

目的分析安徽汉族人群中人类白细胞抗原(HLA)-A、B、DRB1基因和单倍型的分布特征。方法根据2816例安徽汉族无关骨髓供者的HLA基因型数据,分别采用方根法和最大似然性方法计算HLA-A、B、DRB1基因频率和单倍型频率,并进行群体比较。结果安徽汉族中共检出78个HLA基因,其中A*02、A*11、A*24、A*33、A*30、B*13、B*46、B60、B62、B*58、B61、DRB1*09、DRB1*15、DRB1*04、DRB1*07、DRB1*12、DRB1*08、DRB1*13、DRB1*11和DRB1*14最常见。440条A-B单倍型和481条B-DR单倍型中,A2-B46、A30-B13等26条A-B单倍型以及B13-DR7、B46-DR9等27条B-DR单倍型最常见;另外,至少80条A-B单倍型和102条B-DR单倍型呈现显著的正连锁不平衡,其中A2-B46、A30-B13、A33-B58、A33-B44、A2-B38等17条A-B单倍型以及B13-DR7、B46-DR9、B58-DR17、B44-DR13、B54-DR4、B52-DR15、B58-DR3、B57-DR7等18条B-DR单倍型表现为强连锁不平衡。3488条A-B-DR单倍型中,537条A-B-DR单倍型的频率大于等于3.55×10-4,A30-B13-DR7和A2-B46-DR9等27条单倍型频率高于0.005。结论安徽汉族人群HLA-A、B、DR基因和单倍型的分布比较接近中国北方汉族人群,但一定程度上受到南方汉族人群的影响。

中国部分汉族人群362种HLA单倍型的家系调查及重组单倍型分析

本研究旨在发现中国人群人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-A-B-DRB1新单倍型,调查HLA单倍型分布特征。采用179个家庭及子女HLA-A、B、DRB1位点的基因分型结果,通过家系和HLA遗传模型特征分离分析791条HLA单倍型。结果发现4条新的HLA重组单倍型,重组位点位于HLA-DRB1基因座位,其中3条重组单倍型来自父源染色单体,1条来自母源染色单体,其比例为3∶1。HLA-DRB1与A或B基因位点重组率为0.92%(4/433)。通过家系调查HLA分离分析得到362种HLA-A-B-DRB1单倍型,其中A33-B58-DR17、A2-B46-DR9、A30-B13-DR7、A11-B13-DR15、A11-B75-DR12和A2-B46-DR14单倍型检出频率最高,与应用非血缘供者人群的HLA基因分布调查资料的结果一致,但A1-B63-DR12、A29-B46-DR15、A1-B61-DR10、A34-B35-DR9、A29-B54-DR4、A23-B13-DR16、A34-B62-DR15等单倍型是非血缘供者人群HLA基因分布调查资料为未被报道过的罕见单倍型。结论:通过家系HLA单倍型调查能清楚地确定HLA-A-B-DRB1单倍型型别。本研究结果将为人类HLA研究、器官移植及HLA疾病相关性分析等提供重要依据。

流式磁珠反向SSO法HLA分型结果判读影响因素及解决对策的研究

目的研究流式磁珠反向SSO法HLA-A、B、DRB1分型结果判读中出现的常见问题,并提出相应的解决策略。方法对3 219名随机抽取的深圳市无关造血干细胞供者及组织配型患者的DNA采用流式磁珠反向SSO法进行HLA-A、B、DRB1低分辨基因分型,模棱两可结果用PCR-序列特异性引物(Sequence Specific Primer,SSP)法及PCR-SBT测序方法等方法复核确认。结果3 219份样本中发现有95份(95/3 219)28种类型的模棱两可结果,其中HLA-A位点有3(3/28)种,HLA-B位点有25(25/28)种,91.6%的模棱两可结果其样本的荧光值在阳性控制线上,本研究观察到的模棱两可结果通过基因频率分析、PCR-SSP法及PCR-SBT基因测序等方法得以定型。结论建立流式磁珠反向SSO法HLA-A、B、DRB1基因分型模棱两可结果解决策略,对提高HLA数据分析的速度和分型的准确性有重要的意义。

中国人群HLA-DRB1*1454等位基因和HLA-DRB1第3外显子鉴定意义(英文)

目的:在中国人群中鉴定人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)DRB1*1454等位基因,分析供受者HLA-DRB1第3外显子DNA序列信息对器官移植、细胞移植及人类遗传学研究的重要现实意义。方法:应用聚合酶链反应-直接测序分型方法对58例等待造血干细胞移植供受者进行人类白细胞抗原测序分型,1268例广东地区随机健康供者采用聚合酶链式反应-序列特异寡核苷酸探针反向杂交法进行HLA-DRB1中高分辨基因分型,部分模棱两可结果采用聚合酶链式反应-序列特异引物PCR-SSPHLA-DRB*14高分辨方法分型法。结果:在1268例广东地区随机健康人群中检出HLA-DRB1*1403,1406,1410,1412,1418,1425和1454等位基因,HLA-DRB*1401/1434/1454等位基因模棱两可结果的8例样本被确认为HLA-DRB1*1454等位基因,DRB1*1454等位基因可能是广东人群最为常见的HLA-DRB1*14基因。中国人群HLA-DRB1*14第3外显子存在多态性。结论:中国人群HLA-DRB1*1454等位基因确认了DRB1等位基因第3外显子多态性的存在,进一步明确了开展中国汉族人群及少数民族HLA-DRB1第3外显子检测的意义。

“地理信息系统”实验教学改革研究

目前军事领域的信息化建设已经离不开地理信息系统(GIS)的支持。针对地理信息系统的实际应用,立足于军事需求,充分考虑学员特点,将GIS知识与指挥作战知识结合,精心设计了"地理信息系统"的实验内容,通过目标导向型分步骤的实施以及问题导向型学习指导学员学习地理信息系统相关知识,为学员将来使用信息化的应用系统打下了良好的基础。

地中海贫血患者找到人类白细胞抗原A-B-DR单倍型及抗原全相合供者的可能性

背景:选择适合的人类白细胞抗原匹配供者是实施造血干细胞移植治疗的关键,不同人种、地区和疾病人群的人类白细胞抗原与单倍型频率分布是评估地中海贫血患者选择适合供者的重要遗传学依据。目的:分析地中海贫血患者人类白细胞抗原A-B-DRB1单倍型和表型频率分布格局,估算其与骨髓库相合供者相配的概率。设计:病例-对照分析。对象:患者组为2000-06/2006-12广东地市级以上13家医院诊断为地中海贫血的108例患者,广东籍,彼此无血缘关系。正常对照组为2000-08/2006-12中华骨髓库招募的5352名广东籍健康供者,与患者无血缘关系。方法:应用最大似然性算法计算两组人类白细胞抗原A,B,DRB1单倍型及表型频率分布。根据人类白细胞抗原单倍型遗传特征,某一个体人类白细胞抗原A,B,DRB1表型频率等于相应的基因型频率之和。在由n个供者组成的供者群体找到至少1例与患者表型全相同供者的概率P,应用公式P=1-(1-Df)n计算,Df为供者表型频率。结果:患者组和对照组最常见单倍型和表型频率分布格局不同。正常对照组常见的单倍型为A2-B46-DR9,A33-B58-DR17,A11-B75-DR12,A11-B13-DR15和A33-B47-DR13;患者组常见的单倍型为A2-B46-DR9,A33-B58-DR17,A2-B46-DR14,A11-B60-DR12和A11-B75-DR12。正常对照组常见的表型频率分布情况为A2,33;B46,58;DR9,17,A2,11;B46,75;DR9,12,A11,33;B58,75;DR12,17,A2,2;B46,46;DR9,9和A2,11;B13,46;DR9,15;患者组常见的表型为A2,33;B46,58;DR9,17,A2,2;B46,46;DR9,9,A2,2;B46,46;DR9,14,A2,11;B46,60;DR9,12和A2,11;B46,75;DR9,15。两组之间相匹配的表型有19种,表型匹配概率为0.44%(19/4282)。人类白细胞抗原A24-B51-DR8,A3-B38-DR7,A24-B50-DR12,A3-B38-DR4,A24-B51-DR8和A24-B60-DR7等34条单倍型及A2,33;B46,58;DR9,17,A2,2;B46,46;DR9,9和A2,11;B46,75;DR9,15等67种表型,其频率在正常对照组有不同程度的降低,携带有这些单倍型或表型患者找到人类白细胞抗原单倍型相合或全相合供者的概率降低。结论:地中海贫血患者人类白细胞抗原A-B-DR单倍型频率分布呈高度遗传多态性,患者找到人类白细胞抗原全相合供者的概率取决于供者群体人类白细胞抗原表型频率。

应用不同类型白血病患者群体HLA-A、B和DRB1遗传学数据评估HLA相合供者的概率

目的探讨不同类型白血病汉族患者群体找到HLA-A、B和DRB1低分辨全相合无关供者可能性。方法依据1201名急性淋巴细胞白血病(ALL)、1065名急性非淋巴细胞白血病(AML)和1432名慢性粒细胞白血病(CML)汉族患者群体HLA-A、B和DRB1低分辨分型结果,计算这3类白血病汉族患者群体的HLA-A、B和DRB1抗原频率,单体型频率和表型频率,联合应用中华骨髓库(CMDP)中健康汉族供者HLA表型频率数据,进一步推导出这3类白血病汉族患者群体找到至少1名HLA低分辨全相合供者概率及回归方程。结果ALL、AML、CML汉族患者群体表型种类数分别为416851、373903和464373种,其中31%的表型频率均>1/100万;ALL、AML、CML汉族患者群体在CMDP的汉族供者群体中找到至少1名HLA表型相同供者回归方程分别为:P=0.0824LgN-0.3667、P=0.0825LgN-0.3636和P=0.0829LgN-0.3644;计算出81.6%的ALL、81.9%的AML、82.4%的CML汉族患者要找到1名HLA低分辨表型相同的无关供者,CMDP中汉族有效供者群体数平均146.7万。结论应用不同类型白血病患者群体HLA-A、B和DRB1遗传学数据评估患者找到HLA相合供者概率较仅以健康供者群体HLA遗传学数据评估更为精确。为有效地提高患者的移植效果,需要征募更多的无关供者。

神经外科医院感染的调查分析

目的探讨神经外科住院患者医院感染临床特征及对策。方法采用前瞻性调查的方法对神经外科2005年1月至2007年12月1315例住院患者的临床资料进行调查分析。结果神经外科医院感染发生率7.15%,例次医院感染率为7.76%,医院感染部位以下呼吸道、泌尿道、手术切口为主,细菌学检查共检出医院感染病原菌110株,居前4位的细菌分别是大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌。表现为较高的多重耐药。结论神经外科患者医院感染危险因素多,耐药情况突出,加强病原菌耐药监测,合理使用抗菌药物,严格执行无菌操作规程,积极治疗原发病,可减少医院感染发生。

一种基于SURF的图像配准改进算法

为了更好地构造逼真的虚拟环境,提高虚拟场景中图像配准的效率,提出了一种改进的SURF算法。改进算法根据特征点的数量和其间疏密关系作为判定条件,可以在更短时间内得到数量适当且分布相对均匀的图像特征点,同时在特征点匹配阶段利用Hessian矩阵迹的正负性提高特征点匹配的速度。针对误匹配影响图像拼接准确性的问题,采用随机采样算法(RANSAC)提高匹配的精确度。实验结果表明该算法节省了特征点检测和匹配的时间,提高了匹配效率。

腹部手术后低氧血症的原因分析及护理

为了解腹部手术后低氧血症的相关因素 ,有针对性地加强术后低氧血症的预防及护理 ,对 63例腹部中等以上手术病人手术前后的动脉血氧分压(PaO2 )的变化进行观察 ,结果手术后PaO2 较术前下降2 .2 1kPa± 1.5 6kPa ,并有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;术后79.4%病人出现了低氧血症 ,其中 66.0 %病人于术后 5d～10d恢复。显示上腹部手术、术前有肺部并发症、5 0岁以上病人术后的PaO2 变化明显 ,低氧血症发生率高 ,且持续时间长。建议 :护理人员充分认识腹部手术后的低氧血症 ,并采取术前健康宣教 ,围手术期给予正规的氧疗及有效的呼吸系统管理 ,以防治腹部手术后低氧血症的发生。

无偿捐献外周血造血干细胞后供者健康状况的研究

目的研究皮下注射粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员剂及捐献外周血造血干细胞(PBSC)对无关健康供者的影响.方法28名外周血造血干细胞捐献者在采集前1～5天,皮下注射粒细胞集落刺激因子5mg/kg,连续1～5天皮下注射,观察G-CSF动员和采集时供者出现的不良反应;并对供者在G-CSF动员前、外周血干细胞采集后的健康状况及血常规进行分析.结果经G-CSF动员并采集了干细胞的28名供者中,23名供者(81.4%)未出现任何不良反应;5名供者(18.6%)出现轻微不良反应,并于采集时或采集后一周内自行消失.28名供者捐献造血干细胞后,经健康状况咨询和体格检查,结果未见异常.供者的血常规大多在捐献的15天后恢复到基础水平,与G-CSF动员前无显著性差异(P＞0.05);但血细胞计数基础值偏低的供者,采集后白细胞和血小板恢复较慢.结论本研究通过对供者捐献造血干细胞后的体检、血常规检测和随访,结果表明无偿捐献造血干细胞对供者是安全的.

供、患者HLA-A、B、DRB1高分辨分型的无关供者外周血造血干细胞移植32例回顾分析

目的探讨供、患者的人类白细胞抗原HLA-A、B、DRB1基因高分辨相合及亚型相合,无关供者外周血造血干细胞移植后效果的情况,为临床造血干细胞移植治疗选择适配供者提供理论依据。方法采用PCR-SSP或SBT技术对供、患者HLA-A、B、DRB1的基因进行高分辨分型,定期随访患者在造血干细胞移植后状况,统计分析移植后效果。结果32例患者与供者的HLA低分辨分型结果完全相合,HLA-A、B、DRB1基因高分辨分型全相合的患者与HLA-A、B、DRB1基因高分辨分型不相合的患者,造血干细胞植活和两年半内的移植存活率比较,无统计学差异。结论HLA低分辨分型结果完全相合是临床医生选择造血干细胞移植的重要条件之一,供、患者HLA-A、B、DRB1高分辨分型是外周血造血干细胞移植治疗前组织配型不可少的实验之一,但HLA-A、B、DRB1基因高分辨分型错配对无关供者外周血造血干细胞移植的造血干细胞植活和两年半内的移植存活率影响较小,HLA基因高分辨分型可以帮助临床医生选择合适的供者。

世界11个不同人群MICA基因遗传多态性研究及聚类分析

目的探讨MICA基N在世界11个不同人群的遗传多态性分布特征，并绘制系统发生树。方法应用11个人群MICA基因频率数据，采用PHYLIP软件，计算不同群体的遗传距离，绘制遗传树，并进行聚类分析。结果MICA＊001基因主要分布在欧洲和美洲地区，MICA＊002基因在亚洲人及高加索人中均有检出，但在黑人和印第安人基因频率相对较高，MICA＊008基因频率在高加索人种中有较高的分布；中国、泰国、日本和韩国等亚洲人彼此遗传关系相对较近聚为一大类；美国、英国的高加索人种聚为一类；中国的浙江和湖北汉族人遗传距离最近。结论MICA基因在不同人种、不同地区人群分布不同，具有高度遗传多态性。建立稳定的MICA基因技术检测平台有助于开展中国人群MICA基因多态性研究，为人类学、MICA基因和疾病相美性和器官夥植等研究提棋黄倍晕泰者数据．

下腔静脉支架置入术治疗Budd-chiari综合征的护理

本文对我院行下腔静脉支架置入治疗Budd－chiari综合征35例患者的术前及术后护理进行了论述。作者认为，术前心理护理是治疗成功不可缺少的环节，首先应使患者树立战胜疾病的信心，积极地回合治疗。肝、肾的功能状态是决定能否行支架置入的重要条件．应细致观察其变化。术后护理的重点是：伤口有无出血，下肢浮肿及腹水消退情况及生命体征的变化。术后抗凝治疗，下床活动时间、强度是保证手术成功的又一重要环节，不可忽视。

周围浅静脉输液技术经验总结

周围浅静脉输液技术是临床工作中最常用、最基本的护理技术操作之一,是抢救和治疗患者的重要途径。传统教科书中所描述的操作方法规范严谨,但在实际工作中,因患者的病情、营养状况等诸多因素的差异,按照传统方法操作不能轻松、方便、顺利地完成部分周围浅静脉穿刺输液操作,这项操作有待改进之处。本文基于笔者多年临床实践经验,从科学实用性出发,对周围浅静脉穿刺输液技术中的握拳法、穿刺时不同患者的进针方法、头皮针的固定、拔针方法、拔针后按压时间等操作环节提出了点滴改进意见并予以总结。

医院感染954例现患率调查分析

目的:了解医院感染的实际情况,为提高医院感染管理水平提供科学依据。方法:采用床旁和病历相结合横断面调查方法,对住院患者进行了医院感染现患率调查。结果:调查954例住院患者,医院感染36例,医院感染现患率为3.77%。感染部位前3位分别为下呼吸道感染10例(27.78%),上呼吸道感染8例(22.22%),手术切口感染5例(13.89%);严重的基础疾病、肿瘤、糖尿病、使用呼吸机、动静脉置管、泌尿道插管等是医院感染的高危因素。结论:加强医院感染控制,重点监测医院感染高发科室,提高病源学送检率,有效预防和控制医院感染。