沙眼衣原体、溶脲脲原体感染致精浆TNF-α、IL-6升高在男女不育发病中的意义

采用聚合酶链反应技术（PCR）检测不育双方生殖道沙眼衣原体（CT）及溶脲脲原体（UU）DNA，酶标双抗体夹心法测定不育患者精浆TNF－α、IL－6含量。发现感染在不育双方呈平行性表达（P＞0．05），并导致不育患者精浆中TNF－α、IL－6明显增高（P＜0．05）。感染致精浆细胞因子的升高可能影响精子的密度、活动率、液化程度，并参与生殖器官的炎性损伤。提示精浆炎性细胞因子及CT、UU感染参与男女不育的发病过程。

前列腺细胞高表达的CD59分子活性位点的封闭研究

目的观察噬菌体肽库筛选的短肽(SP22)对前列腺癌细胞高表达的正常或突变CD59分子活性位点的封闭效果。方法将正常和突变CD59基因、pIRES空质粒分别转染PC-3细胞;流式细胞术检测细胞表面CD59分子的表达;RT-PCR检测CD59基因的mRNA表达;补体溶解试验观察SP22对补体介导的PC-3细胞溶解的影响。结果CD59基因成功转染并表达;wPC-3细胞(转染正常CD59基因)和mPC-3细胞(转染突变CD59基因)内CD59 mRNA表达水平显著高于pPC-3细胞(转染空质粒)(P<0.01);SP22使3种细胞的溶解率明显提高(P<0.01),但升高的模式和幅度显著不同。结论SP22不能封闭突变CD59分子的补体结合位点,但可与PC-3细胞表面的正常CD59分子高效结合并中和其补体抑制活性,进而显著增强补体对PC-3细胞的溶解。

高表达衔接蛋白Src羧基端激酶结合蛋白对Jurkat细胞形态及功能的影响(英文)

背景:衔接蛋白分子的联动和协同有效调控T细胞的信号转导,形成级联放大或限制,最终实现T细胞复杂的免疫功能。蛋白分子Src羧基端激酶结合蛋白正是衔接蛋白的一种,其主要是通过负反馈调节Src家族激酶活性。而这种负反馈调节作用依赖于Src羧基端激酶结合蛋白的Y317,可能涉及Src羧基端激酶的SH2结构域。目的:探索衔接蛋白Cbp对Jurkat细胞形态及功能的作用。方法:构建仅表达增强绿色荧光蛋白的融合蛋白和Src羧基端激酶结合蛋白-增强绿色荧光蛋白的融合蛋白的病毒颗粒。将Jurkat细胞分为未转染组、阴性对照组和Src羧基端激酶结合蛋白组,后2组转染仅表达增强绿色荧光蛋白的病毒和转染Src羧基端激酶结合蛋白-增强绿色荧光蛋白的病毒。结果与结论:细胞转染效率大于95%,Src羧基端激酶结合蛋白定位于细胞膜上。转染Src羧基端激酶结合蛋白-增强绿色荧光蛋白病毒的Jurkat细胞,皱缩细胞增多,大小均一性较差,细胞坏死凋亡的数量增加,细胞中Src羧基端激酶结合蛋白基因表达上调,Src羧基端激酶表达下降,而酪氨酸蛋白激酶表达增加。提示Jurkat细胞转染Src羧基端激酶结合蛋白后,可使细胞存活率下降,细胞信号转导功能减弱。

高压GIS用三工位隔离接地开关的结构类型

文中介绍了72.5 kV及以上气体绝缘金属封闭开关设备(简称GIS)常用的3种结构类型的三工位隔离接地开关:双导电杆连杆传动的三工位隔离接地开关、滚珠丝杠传动的三工位隔离接地开关、齿轮齿条传动的三工位隔离接地开关。这3种三工位隔离接地开关有别于传统的旋转闸刀式结构,都是属于国内外主流的动触头直动插入式结构。通过对这3种三工位隔离接地开关结构、滑动电联接形式以及运动形式的阐述,分析了各种结构的优势,为GIS核心模块部件的改进和优化设计提供技术指导。

血清细胞因子与原发性高血压患者相关性的临床观察

目的:观察原发性高血压(EH)患者血清IL-6、IL-8、IL-10、INF-α水平及临床意义。方法:采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)对100例高血压病患者(高血压病组)及100例正常人(对照组)的血清细胞因子(IL-6、IL-8、IL-10、INF-α)进行测定并将结果进行比较。结果:高血压病组除IL-10水平低于对照组外,IL-6、IL-8、INF-α均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:监测血清IL-6、IL-8、IL-10、INF-α水平可作为判断原发性高血压病病情的参考指标。

高龄高血压骨科择期手术患者的心理护理

目的探讨高龄高血压骨科择期手术患者心理护理，从而保证手术的顺利进行。方法对本院2012年1月-2012年12月高龄高血压骨科择期手术56例患者进行心理护理。结果通过对不同骨折部位患者心理状态进行分析，然后采用安慰、解释等方式，运用语言沟通，微笑服务，耐心倾听等手段，消除了术前紧张、恐惧等心理障碍，从而建立起良好的护患关系。结论对高龄高血压骨科择期手术的患者针对不同的手术方式给予不同心理护理，能减轻或降低患者因手术而造成心理负担，能消除患者术前恐惧、紧张、焦虑等心理反应，对保证手术顺利进行具有十分重要的意义。

野菊花化学成分的研究

目的:研究野菊(Chrysanthemum indicum L)的干燥头状花序中的化学成分。方法:用硅胶柱色谱法及Sephadex LH-20柱色谱法进行分离纯化,依据理化性质和光谱数据鉴定化合物结构。结果:从野菊花的80%乙醇提取物中分离得到了7个黄酮化合物,分别被鉴定为:金合欢素(acacetin、1)、金合欢素-7-O-(6″-O-乙酰基)β-D-葡萄糖苷[acacetin-7-O-(6″-O-acetyl)β-D-glucopyranoside、2]、蒙花苷(linarin、3)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside、4)、绿原酸(chlorogenic acid、5)、香草酸(vanillic acid、6)和蔗糖(sucrose、7)。结论:化合物2、4、6和7为首次从野菊花中分离得到。

He-Ne激光的免疫作用研究

本文采用8mW He-Ne激光器照射小鼠胸腺区及脾区、观察激光照射对血清IgG、溶血素、AFC及LGL的影响。实验结果表明,激光照射组上述免疫指标明显高于对照组(P<0.01),由此证明He-Ne激光具有增强免疫细胞活性及促进免疫分子产生的作用。

川穹嗪对AngⅡ诱导的大鼠心肌肥大细胞JAK-STAT通路作用

目的:研究川穹嗪对心肌肥大JAK-STAT通路的影响。方法:建立心肌肥大动物模型,分离培养新生大鼠心肌细胞,利用RT-PCR检测试验组和对照组基因ANP相对水平、Western blot检测试验组和对照组心肌肥大信号转导途径分子pJAK2、pJAK1、pSTAT3,并进行统计学分析。结果:川芎嗪可显著抑制ANP mRNA的表达(P<0.01),可明显抑制JAK2 JAK1 STAT3的表达(P<0.01)。结论:川穹嗪能干扰大鼠心肌肥大JAK-STAT信号转导通路,为中药干扰JAK-STAT信号转导通路治疗心肌肥大奠定基础。

下调CD59的表达可以抑制HeLa细胞增殖并促进其凋亡

目的采用RNA干扰与噬菌体肽库展示技术2种方法干预宫颈癌HeLa细胞CD59的表达,以探讨比较2种CD59低表达方式对HeLa细胞增殖与凋亡的影响。方法将10μg/mL的CD59短肽封条作用于HeLa细胞8 h后,联合CD59干扰质粒pSUPER-siCD59稳定转染HeLa细胞系,采用MTT法检测各组细胞增殖率的变化,采用TUNEL染色、annexin V-PE/7-AAD染色结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果 CD59短肽封条组与pSUPER-siCD59质粒稳定转染细胞组HeLa细胞增殖明显弱于对照组,TUNEL及流式细胞术检测结果显示2组处理细胞均存在细胞凋亡现象,且短肽封条的效果要好于pSUPER-siCD59质粒。结论下调CD59表达能抑制其细胞增殖并促进其凋亡,且短肽封条效果要优于CD59 RNA干扰质粒。

锚定蛋白CD59与接头分子Cbp在T细胞上的定位及功能研究

目的研究CD59、Src羧基末端激酶结合蛋白(Cbp)在细胞膜的定位,及其在细胞活化及增殖中的相互作用。方法应用免疫荧光细胞化学技术,通过荧光显微镜分析系统对CD59、Cbp的定位进行了分析;Jurkat细胞转染pSUPER-siCD59重组质粒,并行RT-PCR和Western blot法检测转染细胞中CD59的表达及蛋白酪氨酸激酶癌基因家族(fyn)磷酸化水平。利用MTT比色法检测转染各组细胞的增殖效应。结果 CD59、Cbp主要分布在细胞膜上。转染pSUPER-siCD59重组质粒的Jurkat细胞中CD59表达量减少,磷酸化的fyn含量也随之减少,细胞增殖能力也低于其他各组。结论 CD59是一种膜蛋白,在细胞活化及增殖中与Cbp分子共同发挥作用。

CD46 RNAi对CD59介导的T细胞信号转导的作用研究

目的构建携带针对CD46基因的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体,研究糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白CD59与CD46在介导T细胞信号转导中的相关性。方法将能转录产生靶向CD46小发夹RNA(shRNA)的寡核苷酸序列,克隆入逆转录病毒载体pSUPER retro,转化大肠杆菌JM109并转染Jurkat细胞。将Jurkat细胞分为未转染的Jurkat细胞组(Ⅰ组)、转染空质粒的Jurkat细胞组(Ⅱ组)、转染CD59干扰质粒的Jurkat细胞组(Ⅲ组)及转染CD46干扰质粒的Jurkat细胞组(Ⅳ组)。用RT-PCR、Western blot技术检测各组细胞中的CD59、CD46基因的表达水平。用噻唑蓝(MTT)比色法检测CD46与CD59联合作用对4组Jurkat细胞的增殖效应。结果重组载体经PCR及限制性内切酶酶切鉴定初步成功后送测序,结果表明序列正确,构建成功,稳定转染后,Ⅳ组细胞CD46分子的表达被成功抑制,Ⅲ组细胞CD59分子的表达被抑制。Ⅰ组和Ⅱ组细胞CD46与CD59单抗联合作用后,增殖能力明显高于Ⅲ组、Ⅳ组(P<0.05);但Ⅰ组和Ⅱ组,Ⅲ组和Ⅳ组之间无差异。结论 CD59可增强CD46对T细胞信号转导的效应。

CD59-CD2对T细胞信号转导的作用

目的将构建的CD59-linker-CD2融合基因真核表达载体在Jurkat细胞中稳定表达,研究CD59与CD2分子在T细胞信号转导中的相互作用,探讨CD59向T细胞内传递信号的相关机制。方法酶切鉴定构建的pIRES-CD59-linker-CD2融合基因真核表达载体,脂质体法转染Jurkat细胞,G418筛选建立稳定转染细胞系,免疫酶法检测转染细胞表面CD59的表达,Western blot检测转染细胞中CD59蛋白的表达;用CD59单克隆抗体作用于各组Jurkat细胞,使用激光共聚焦显微镜检测细胞浆内的Ca2+,ELISA检测细胞上清中白介素2(IL-2)的变化,比较各组差异。结果经酶切鉴定证实携带CD59-linker-CD2融合基因的重组质粒扩增成功;免疫酶法和Western blot证实CD59在转染细胞中稳定表达,且转染组L-Jurkat细胞比正常组Ju-rkat细胞CD59表达量增加,二者比较其差别有统计学意义(P<0.05);与正常细胞相比,胞浆内Ca2+和IL-2在转染细胞中均高表达,两组细胞比较其差别有统计学意义(P<0.05)。结论 pIRES-CD59-linker-CD2融合基因真核表达载体可在Jurkat细胞中稳定表达,CD59mAb交联刺激后,CD59可通过CD2向细胞内传递信号,引起细胞内信号分子的一系列变化,为研究CD59与CD2在T细胞信号转导中的协同作用及进一步探讨CD59向T细胞内传递信号的机制奠定基础。

CD59在T细胞LAT脂筏内移位及跨膜信号转导中的作用

目的用前期构建好的LAT-EGFP质粒转染Jurkat细胞,探讨单克隆抗体交联CD59前后CD59与接头蛋白分子LAT在Jurkat细胞活化转导中的相关作用。方法采用电转染的方法转染Jurkat细胞,抗体交联CD59后共聚焦显微镜下观察细胞膜上LAT-EGFP分子分布的变化;利用噻唑蓝(MTT)比色法检测CD59抗体交联前后Jurkat细胞的增殖效应;用Western blot技术检测CD59抗体交联前后LAT磷酸化情况。结果共聚焦显微镜下可观察到CD59抗体交联后LAT-EGFP由散在分布为主变为点簇状分布为主;CD59抗体交联刺激组Jurkat细胞增殖能力增加;Western blot结果表明CD59抗体交联后LAT磷酸化水平增加。结论抗体交联CD59能使接头蛋白分子LAT进入脂筏,并增强T细胞信号转导效应。

下调CD59对急性T系白血病细胞株Jurkat凋亡相关分子的影响

目的:探讨下调CD59对急性T系白血病细胞株Jurkat凋亡相关分子的影响。方法:运用RNAi慢病毒为载体下调急性T系白血病Jurkat细胞株CD59的表达;激光共聚焦观察转染效率及CD59分子的定位;Real-time-PCR、Western blot筛选下调效果最好的一组细胞,用其做后续的分子生物学水平的实验;Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Survivin蛋白表达量的变化;ELISA检测各组的细胞培养上清中IL-3、TNF-β的表达。结果:激光共聚焦观察到转染各组的转染效率在90%以上,CD59分子主要位于细胞膜;Real-time-PCR筛选得出下调A组的转染效果最好;Western blot结果显示下调A组的CD59蛋白的表达量减少最明显,将RNAi-CD59-A定义为RNAi-CD59作为实验组进行后续实验;实验组能增强Bax、Caspase-3蛋白的表达(P<0.05),抑制Bcl-2、Survivin蛋白的表达(P<0.05);ELISA结果显示下调组IL-3表达水平降低(P<0.05),TNF-β的表达水平升高(P<0.05)。结论:下调D59基因表达可使急性T系白血病细胞株Jurkat的促凋亡分子表达增高,促增殖分子表达降低。

He-Ne激光的免疫学效应

激光医学中的一个重要研究课题是确定激光在免疫学中的作用。本研究的目的是利用动物模型探讨激光照射对机体免疫反应的影响,证实激光治疗疾病的免疫调节作用。 材料和方法 一、仪器:上海医用激光仪器厂产HNZSQ-2型He-Ne激光器,波长6328(?),输出功率为24mW,8mW。 二、动物选择及分组:纯系健康小白鼠54只,体重22—24克,雌雄各半。

CD59促进LAT介导的T细胞活化

目的:研究CD59分子在LAT(Linker for activated T cells)介导的T系淋巴细胞活化中所起的作用。方法:构建LAT-GFP融合蛋白,以逆转录病毒为载体转染Jurkat细胞,建立稳定转染细胞株(Jurkat-GFP)。分别使用CD59抗体刺激和pSUPER-siCD59干扰质粒(GFP标记)沉默Jurkat-GFP细胞。免疫荧光观察CD59和LAT分子在细胞膜的表达和定位;MTT比色法检测细胞增殖率的变化;Western blot检测LAT活化信号转导通路中相关蛋白分子磷酸化水平。结果:荧光显微镜下可见Jurkat-GFP细胞绿色荧光表达于细胞膜,转染干扰质粒后细胞膜和细胞质均有绿色荧光表达。激光共聚焦显微镜下可见CD59抗体刺激前CD59和LAT分子均匀分布于细胞膜,且转染干扰质粒的Jurkat-GFP细胞CD59表达量下降。CD59抗体刺激后CD59分子和LAT分子点状聚集共定位于细胞膜。MTT结果表明相对于正常Jurkat-GFP细胞,抗体活化后细胞增殖速率明显升高(P>0.05),而电转干扰质粒后细胞生长减慢。Western blot结果表明,CD59抗体刺激后细胞ZAP-70、LCK、PLC-r总蛋白表达无明显差异(P>0.05),而磷酸化蛋白表达显著增高(P<0.05)。结论:抗体活化后细胞膜上CD59和LAT分子聚集并共定位于细胞膜,且细胞信号转导通路下游分子磷酸化水平增高,进一步证实CD59分子经抗体活化后可促进LAT介导的T细胞信号转导。

大鼠2型糖尿病与CD59基因突变的相关性研究

目的建立糖尿病动物模型,研究CD59基因点突变与大鼠2型糖尿病的相关性。方法将Wistar大鼠随机分为正常组、双高饮食组和模型组。采用链尿佐菌素(STZ)制备糖尿病模型,设计MRCD59寡核苷酸探针(MRCD59X38 C39 W40 K41 H42 X43 X44 C45 X46),与大鼠肝、肾、胰组织进行原位杂交,以检测大鼠CD59基因点突变。同时采用免疫组化(SABC)法检测正常CD59在大鼠组织中表达情况。结果成功建立2型糖尿病大鼠模型。寡核苷酸探针及SABC证实双高饮食组及模型组大鼠组织正常CD59表达降低,而突变的RCD59增高,与正常组比较(P<0.01)有显著差异。结论RCD59基因突变与糖尿病密切相关。

乙酰胆碱酯酶抗独特型抗体的研制

目的 研制乙酰胆碱酯酶 (Acetylcholinesterase ,AchE)抗独特型抗体并测定酶活性。方法 AchE单克隆抗体是一种IgG1抗体 ,先用木瓜蛋白酶酶切 ,然后采用AchE Sepharose 4B和SPA亲和层析柱进行提取纯化 ,获得纯化的单克隆抗体Fab段。以Fab作为抗原 ,免疫小鼠 ,制备抗Fab独特型抗体 ,采用酶催化ELISA法研究该单克隆抗体的乙酰胆碱酯酶活性。结果 制备出高效价抗乙酰胆碱酯酶抗体Fab段的独特型抗体 ,该抗体具有乙酰胆碱酯酶活性。结论 AchE单克隆抗体的独特型抗体具有AchE活性。