产前应激对子代大鼠心脏代谢物轮廓变化的影响

目的探讨产前应激(PS)对子代大鼠心脏代谢物轮廓变化的影响,分析关键差异信号通路中关键差异物的潜在作用。方法构建产前束缚应激大鼠模型(PS组),采用UHPLC-Q-TOF/MS分析法检测对照组和PS组子代大鼠心脏组织中代谢物轮廓的变化,通过KEGG通路注释与分析,筛选出关键信号通路的代谢差异物并定量其表达水平,进而推测这些关键分子影响PS对子代大鼠心脏组织的潜在作用。结果与对照组相比,PS组子代大鼠心脏组织中显著变化的信号通路包括氨基酸的生物合成、嘌呤代谢、嘧啶代谢、丙氨酸/天冬氨酸盐和谷氨酸代谢、cAMP信号通路、精氨酸的生物合成、GABA能突触、谷氨酸能突触、尼古丁成瘾和肌动蛋白细胞骨架调节。其中富集在嘌呤代谢、嘧啶代谢和精氨酸的生物合成通路中的L-谷氨酰胺、假尿嘧啶、尿酸、黄嘌呤、2′-脱氧腺苷5′-单磷酸、胞氨酸3′-单磷酸、胞氨酸5′-单磷酸水平显著上调,精氨琥珀酸水平显著下调。结论PS导致子代大鼠心脏组织中L-谷氨酰胺、假尿嘧啶、尿酸、黄嘌呤异常变化,PS可能是子代大鼠心血管疾病发病的高危因素。

植物蛋白肉超声振动3D打印方法与试验

为提高3D打印的植物蛋白肉(plant protein-based meat,PPM)产品品质,该研究通过分析超声振动对植物蛋白凝胶化的作用机理,引入超声振动辅助,结合流变特性测试,开展3D打印喷头数值模拟与分析,探究超声振动对植物蛋白肉凝胶化及3D打印过程的影响。通过开发的超声振动3D打印装置进行试验,研究超声振动对3D打印植物蛋白肉品质的影响规律。结果表明,在超声振动作用下,3D打印过程中植物蛋白承受更高的剪切应力及挤压应力,为植物蛋白凝胶化提供有利的物理条件。超声振动3D打印产品相较于常规3D打印产品,其硬度下降,弹性和咀嚼性较为接近,在硬度、弹性、咀嚼性品质参数稳定性方面的波动程度均低于无超声振动打印样品,其中在硬度、弹性、咀嚼性品质参数方面的稳定性分别提升27.75%、83.14%、59.30%。该研究将超声振动引入植物蛋白肉3D打印过程提升了植物蛋白肉的品质稳定性,可为后续高品质3D打印植物蛋白肉研究与生产提供参考。

莪术醇对人宫颈癌CASKI细胞增殖抑制及促凋亡作用的研究

目的:探讨莪术醇对人宫颈癌CASKI细胞体外增殖和凋亡的影响。方法:12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml和100μg/ml不同浓度莪术醇作用于人宫颈癌CASKI细胞后,MTT法检测CASKI细胞的增殖抑制率;流式细胞仪分析细胞周期分布及细胞凋亡率变化;电镜观察肿瘤细胞凋亡的形态学特征。结果:12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml和100μg/ml的莪术醇对宫颈癌CASKI细胞均有不同程度的增殖抑制作用,在一定范围内,具有浓度-时间依赖性。流式细胞仪分析结果显示:50μg/ml、100μg/ml莪术醇作用于宫颈癌CASKI细胞24h,可阻滞细胞周期于G2/M期,并诱导部分细胞凋亡。电镜下可见凋亡细胞及凋亡小体,且100μg/ml组细胞凋亡改变较50μg/ml组更明显。结论:莪术醇能明显抑制CASKI细胞的体外增殖,且可阻滞CASKI细胞周期于G2/M期并诱导细胞凋亡。

宫颈癌患者HPV16型E6蛋白的表达纯化及血清抗体检测

背景与目的:人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirustype16,HPV16)是宫颈癌组织中最常见的高危HPV,其相应蛋白的血清抗体与宫颈癌的发生发展相关。本研究构建HPV16E6重组表达载体并表达纯化获得HPV16E6重组蛋白,用于检测不同人群血清相应抗体,初步探讨本地区HPV16E6血清抗体反应与宫颈癌的相关性。方法:将HPV16E6基因与pRSET-A融合表达载体连接,获得E6表达重组体,转化大肠杆菌BL21(DE3)并用异丙基硫代-$-D-半乳糖苷(isopropylthio-$-D-galactoside,IPTG)诱导表达。表达的包涵体变性后经Ni柱纯化,复性并经活性鉴定后,用以包被ELISA板,检测正常女性、慢性宫颈炎患者和宫颈癌患者血清抗体。同时采用荧光偏振方法分型检测宫颈癌组织HPVDNA。结果:pRSET-16E6表达重组体的工程菌经IPTG诱导后可表达Mr24×103的HPV16E6组氨酸融合蛋白,表达量占菌体蛋白的22.3%。表达形式为包涵体,重组蛋白纯度达95%以上,其活性经ELISA法证实。80例正常女性、46例慢性宫颈炎和32例宫颈癌患者血清抗体阳性率分别为5.0%、6.5%和31.2%,宫颈癌患者HPV16E6血清抗体阳性率显著高于正常人(P<0.002)及慢性宫颈炎患者(P<0.01),而正常人与慢性宫颈炎患者间的差异无显著性。32例宫颈癌患者癌组织中,HPVDNA阳性率90.6%,HPV16DNA阳性率46.9%。HPV16DNA阳性组血清HPV16E6抗体阳性率(46.7%)高于阴性组(17.6%),但两组间的差异无显著性(P>0.05)。结论:在pRSET-A/BL21中表达获得的HPV16E6融合蛋白,可用于宫颈癌相关HPV的血清学研究;宫颈癌患者HPV16E6血清抗体阳性率明显高于正常人和慢性宫颈炎患者。

尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒11型L1基因的克隆及序列分析

目的克隆和分析HPV11的晚期表达基因序列L1及其编码的氨基酸序列,为HPV感染的检测和基因工程疫苗研制提供基础。方法采用PCR技术扩增了1例尖锐湿疣患者疣组织中HPV 11 L1基因,并对其进行了克隆及全序列分析。结果本例尖锐湿疣临床标本HPV 11 L1基因与GenBank收录的原型(收录号:M14119)比较有8个碱基变异。结论 中国地区尖锐湿疣HPV 11 L1基因存在着变异。

宫颈癌组织高危HPV18 L1基因的克隆及序列分析

目的克隆和分析人乳头瘤病毒18型晚期表达基因L1序列,为HPV感染的检测和基因工程疫苗研制提供基础。方法采用PCR技术扩增了1例HPV18阳性宫颈腺癌患者癌组织中HPV18L1基因,并对其进行了克隆及全序列分析。结果本例宫颈癌临床标本HPV18L1基因与GenBank收录的原型比较有12个碱基变异,推导其编码的氨基酸也发生了变化。结论本例中国人宫颈癌HPV18L1基因有一定的变异。

宫颈癌患者人乳头瘤病毒16型E6基因的克隆及序列分析

目的 分析中国陕西地区宫颈癌患者人乳头瘤病毒 16型 (HPV16型 )E6基因的结构特点。方法 采用PCR技术扩增了 1例HPV16阳性宫颈癌患者癌组织中HPV16E6基因 ,并对其进行了克隆及全序列分析。结果 成功地克隆了HPV16E6基因 ,与GenBank收录的原型相比 ,E6基因中有 2个碱基发生突变 ,推导其编码的氨基酸有 1个发生了变化。

宫颈癌分子靶向药物的研究进展

晚期及复发性宫颈癌预后差,尚缺乏有效的治疗手段。许多研究以宫颈癌形成过程中的各种信号转导环节为靶向,寻找新药物和治疗策略,包括靶向抑制肿瘤血管生成、表皮生长因子、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、环氧合酶-2、组蛋白去乙酰化酶等。虽然还没有任何药物被准予临床应用,但有关贝伐单抗的临床试验结果显示出靶向肿瘤血管生成通路是颇具吸引力的宫颈癌治疗策略。随着宫颈癌成因机制的明了,分子靶向药物的产生及应用将会为宫颈癌的治疗开辟新的途径。

应用TDI-FP技术分析宫颈癌组织HPV16 E7基因A647G点突变(英文)

模板指导的末端碱基掺入反应结合荧光偏振检测技术(templatedirectdye-terminatorincorporationwithfluorescence-polarization,TDI-FP)是SNP检测新技术.应用TDI-FP方法分析中国陕西HPV16阳性宫颈组织HPV16E7基因第647位核苷酸A→G热点突变(即A647G),首先在HPV16阳性的91例宫颈癌及49例正常/宫颈炎妇女宫颈DNA标本中,PCR扩增含647位点在内的HPV16E7部分基因,然后将紧邻647位点5′端的寡核苷酸探针与PCR产物内的模板杂交,并延伸一个与647位点碱基互补的荧光标记碱基:TAMRA-ddTTP或R110-ddCTP.用荧光偏振仪读取荧光偏振(FP)值,根据升高的相应FP值判断647位点碱基.结果表明,宫颈组织HPV16E7A647G的总体检出率为35.71%(50/140).宫颈癌组的A→G突变率为42.86%(39/91),显著高于正常/宫颈炎组22.45%(11/49)的突变率(x2=5.778,P=0.016),两组间的OR值为2.59(95%CI=1.17￣5.71).提示TDI-FP可用于HPV有意义点突变的分析;我国陕西地区妇女HPV16A647G突变率及其对宫颈癌的警示性与其他地区相比有明显差异,该地区携带此突变病毒株的妇女患宫颈癌的风险可能较高.

高危HPV16 E4基因的表达纯化及临床应用

目的:构建人乳头瘤病毒(HPV)16 E4重组表达体并表达纯化获得HPV16 E4重组蛋白,用于检测不同人群血清相应抗体,初步探讨本地区HPV16 E4血清抗体反应与宫颈癌的相关性。方法:将HPV16E4基因与pRSET-A融合表达载体连接,获得E4表达重组体,转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG诱导表达。表达的包涵体变性后经Ni柱纯化,复性并经活性鉴定后,用以包被酶联免疫吸附实验(ELISA)板,检测正常女性、慢性宫颈炎和宫颈癌患者血清抗体。结果:pRSET-16E4表达重组体的工程菌经IPTG诱导后可表达Mr15×103的HPV16 E4组氨酸融合蛋白,表达量占菌体蛋白的30%。表达形式为包涵体,重组蛋白经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,纯度达95%以上,其活性经ELISA法证实。80例正常女性、46例慢性宫颈炎和32例宫颈癌患者中,其血清抗体阳性率分别为10.00%,39.13%和28.13%,宫颈癌患者HPV16 E4血清抗体阳性率显著高于正常人,且慢性宫颈炎患者HPV16 E4血清抗体阳性率也显著高于正常人,但宫颈癌组HPV16 E4血清抗体阳性率与慢性宫颈炎组间的差异无统计学意义。结论:在pRSET-A/BL21中表达获得的HPV16 E4融合蛋白,可用于宫颈癌相关HPV的血清学研究;宫颈癌和慢性宫颈炎患者HPV16E4血清抗体阳性率均明显高于正常人。

HPV58在宫颈癌组织中的感染分析及其转化基因的克隆(英文)

目的分析中国陕西宫颈癌组织中HPV58的感染情况并克隆其E6、E7主要转化基因。方法采用HPVGP5+/GP6+通用引物PCR扩增58例宫颈癌组织DNA粗提物,继之将荧光偏振技术与模板指导的末端延伸反应(TDI-FP)结合,应用探针杂交延伸反应检测HPV58。用特异性引物随机从1例HPV58阳性标本中PCR扩增HPV58E6、E7基因,将其分别与pGEM-TEasy载体连接,所获得的重组质粒经内切酶消化和测序鉴定。结果58例宫颈癌标本中10例(17.24%)为HPV58阳性,克隆获得的HPV58E6、E7重组质粒经BLAST分析证实分别含有HPV58完整的E6、E7基因,与GenBank收录的标准株比较,E6、E7基因分别有5个和2个硷基发生变异,可导致相应的蛋白质氨基酸序列中分别有4个和1个氨基酸替换。结论中国陕西人宫颈癌组织中HPV58感染较为多见,且HPV58E6和E7转化基因的硷基序列与标准株有所差异。本研究为下一步HPV58相关肿瘤诊断试剂及疫苗的研制奠定了基础。

多种形式教学方法在妇产科见习课中的运用

为提高新形势下妇产科临床教学的质量和学生的学习能力,在妇产科临床见习教学中,根据教学内容的不同,合理运用PBL、Seminar、模具教学等多种教学方法,以学生为主体,培养学生理论联系实际、分析问题和解决问题的能力,取得了良好的效果。

153881例围产儿中生殖泌尿系统先天畸形发病情况研究

目的 :探讨生殖泌尿系统畸形的发生率、特征及风险因素。方法 :监测 1985年 12月 - 1990年 12月孕 2 8周至产后 7天内的 15 3881例围产儿中先天畸形 ,尤其是生殖泌尿系统畸形的发生情况 ,并对其中 181例生殖泌尿系统畸形儿设 1:1对照研究。结果 :共检出先天畸形儿 2 5 5 8例 ,先天畸形发生率为 16 .6 2‰ ,其中生殖泌尿系统畸形 2 40例 ,发生率为 1.5 6 ,占总畸形数的 9.38%。生殖泌尿系统畸形中多发畸形 16 2例 ,占 6 7.5 % ,其中以合并中枢神经系统畸形最多。生殖泌尿系统畸形儿的存活率为 35 .83% ,存活者依次以足月隐睾、尿道下裂及外阴性别不明畸形最多见 ,三者共占总活产数的 89.5 3%。 181例配对研究发现孕期感冒发烧 ,接触有害物质 ,丈夫吸烟及有家族史为生殖泌尿系统畸形的风险因素。结论 :生殖泌尿系统畸形为较常见的畸形。应加强孕期防范 ,对存活者适时矫治。

人乳头瘤病毒相关抗体的检测及意义

人乳头瘤病毒感染与多种恶性肿瘤关系密切。分子生物学的进展使人乳头瘤病毒血清学检查成为检测现存或既往人乳头瘤病毒感染,以及预警其相关恶性肿瘤的重要流行病学手段。本文就人乳头瘤病毒相关的抗体反应与病毒DNA携带的关系、与宫颈癌等疾病的相关性,以及影响抗体反应的因素等方面作一综述。

活力碘纱条在游离皮片移植阴道成形术中的应用

31例游离皮片移植阴道成形术用活力碘纱条代替传统的黄碘纱条填塞成形阴道,与同期用黄碘纱条的18例对比,术后发热程度无明显差异。活力碘纱条组术后及更换纱条时疼痛轻,泌尿系症状发生率低,与黄碘纱条组比较,差异显著。

DNA体外PCR扩增鉴定胎儿性别方法的应用

本实验采集4例X连锁遗传病高危中孕胎儿羊水,从中抽提DNA,进行体外Y染色体特异片段扩增鉴定胎儿性别。结果其中2例胎儿为女性,2例为男性,均在引产或足月分娩后证实。

应用DNA PCR法扩增检测苯丙酮尿症基因突变

本文应用PCR和核酸杂交技术,在西安地区14例PKU患儿中检测了目前中国人中唯一确定引起PKU的PAH基因外显子3终止突变,结果发现这些患者的PAH基因均无终止突变,提示在我国有可能因PAH基因其它部位突变导致PKU的发生。我们体会DNA体外PCR扩增结合寡核苷酸探针点杂交方法可用于PKU的产前诊断和携带者检出。

超支化有机硅嵌段水性聚氨酯的合成及应用

以异佛尔酮二异氰酸酯(IPDI)、聚硅氧烷嵌段聚醚、二乙醇胺(DEA)作为原料,通过反应官能团异单体法制备了超支化有机硅嵌段水性聚氨酯抗起毛起球剂(HBP-SiWPU)。探究物料比对乳液性能的影响,采用FT-IR、^(13)C NMR对HBP-SiWPU进行表征;并对腈纶针织物进行抗起毛起球整理。结果表明:当预聚R值[预聚阶段n(—NCO)/n(—OH)]为4、超支化物料比[n(DEA)/n(预聚体)]为1.2时,HBP-SiWPU乳液稳定性较好;整理的腈纶针织物抗起毛起球性能为2~3级,与原布相比提升了1级,色差较小,手感较好。

栲胶脱硫法与改良ADA脱硫法的比较

实验比较了栲胶法脱硫与改良ADA法脱硫,讨论了脱硫效率、碱耗量和副产物Na2S2O3含量随脱硫时间变化的情况。结果表明,两种方法的脱硫效率都很高,连续脱硫10 h,也都在99.87%以上。从脱硫效率来看,两方法均能达到脱硫要求,但栲胶法比改良ADA法略好。从碱耗量和副产物Na2S2O3含量来看,改良ADA法远比不上栲胶法。尽管实验装置与实际生产存在着一定的差距,但所取得的实验数据也能真实地反映出这两种脱硫方法的差异。

PTEN通过AKT介导的细胞代谢途径抑制宫颈癌细胞的增殖

目的研究PTEN基因与宫颈癌细胞增殖能力的关系,以探索PTEN基因在宫颈癌发生发展中的可能作用及其机制。方法 Western blot检测PTEN基因在宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、C33A和CasKi中的表达。利用脂质体法将人工过表达PTEN载体转染低表达PTEN的宫颈癌细胞系HeLa和C33A,通过MTT方法观察转染后PTEN过表达对宫颈癌细胞增殖的影响。采用多功能过程参数分析仪,检测转染PTEN基因后宫颈癌细胞培养基中乳酸、葡萄糖及谷氨酰胺的含量,观察PTEN基因过表达对宫颈癌细胞代谢的影响。Western blot检测PTEN过表达后宫颈癌细胞中丙酮酸激酶(PKM2)、6-磷酸果糖激酶2(PFKFB3)、谷氨酰胺酶(GLS)、AKT和磷酸化的AKT(pAKT)表达情况。结果与正常宫颈上皮细胞相比,PTEN基因在4种宫颈癌细胞系中低表达。与对照组相比,过表达PTEN的HeLa和C33A细胞克隆中,PTEN基因的水平明显升高。细胞计数和MTT法也显示,过表达PTEN能够明显抑制肿瘤细胞的增殖速率(P<0.05);过表达PTEN基因的细胞培养液中葡萄糖及谷氨酰胺含量显著增多,但乳酸含量减少;同时还发现PTEN抑制了AKT的磷酸化水平并使PKM2、PFKFB3及GLS的表达水平降低。结论 PTEN基因可通过AKT途径调节细胞代谢,从而调节宫颈癌细胞的增殖。PTEN基因有可能成为宫颈癌的诊断和治疗的新靶点。