结核分枝杆菌H37Ra热休克蛋白16.3敲除菌株对小鼠骨髓来源巨噬细胞炎性细胞因子表达及趋化功能的影响

目的初步探讨结核分枝杆菌H37Ra热休克蛋白16.3敲除菌株对小鼠骨髓来源巨噬细胞炎性细胞因子表达及趋化功能的影响。方法从BALB/c小鼠胫腓骨中提取骨髓细胞,与GM-CSF共培养获得骨髓来源的巨噬细胞,流式细胞术检测巨噬细胞表面F4/80和CD11b的表达;分别用H37Ra野生型菌株(WT)、H37Ra热休克蛋白16.3回补菌株(COMP)、H37Ra热休克蛋白16.3敲除菌株(MUT)感染小鼠骨髓来源巨噬细胞,Real-time PCR检测巨噬细胞炎性细胞因子TNF-α、IL-6和iNOS以及趋化因子CCL2、CCL3、CCL4、CCL5和CCL12 mRNA的相对表达水平;ELISA以及Western blot检测TNF-α、IL-6和iNOS的表达水平;Transwell实验检测巨噬细胞的趋化功能;流式细胞术检测F4/80^(+)CCR1^(+)、F4/80^(+)CCR2^(+)和F4/80^(+)CCR5^(+)的细胞数量。结果F4/80^(+)CD11b^(+)的细胞数量占比为97.8%,提示小鼠骨髓来源巨噬细胞诱导成功;相较于WT和COMP菌株感染组,在感染巨噬细胞3 h后MUT感染组CCL2、CCL3、CCL4、CCL5和CCL12 mRNA的相对表达水平上调,继续感染24 h,相较于WT和COMP菌株感染组,MUT菌株感染组TNF-α和IL-6mRNA的相对表达水平更高,各感染组间iNOS mRNA的相对表达水平没有差异,而在感染48 h后,各感染组间TNF-α和IL-6mRNA的相对表达水平没有差异,MUT菌株感染组相较于WT和COMP菌株感染组iNOSmRNA的相对表达水平更低;ELISA结果显示TNF-α和IL-6的分泌水平在各感染组间没有差异;Western blot结果显示iNOS的表达在各感染组间也没有明显差异;Transwell实验结果显示,MUT感染组能够趋化更多数量的巨噬细胞至下室;流式结果显示,各感染组间F4/80^(+)CCR1^(+)的细胞数量没有差异,MUT菌株感染组F4/80^(+)CCR2^(+)和F4/80^(+)CCR5^(+)的细胞数量相较于WT和COMP菌株感染组明显上调。结论MTB Hsp16.3能在基因表达水平调控小鼠骨髓来源巨噬细胞炎性细胞因子TNF-α、IL-6和iNOS的表达且可能通过CCL3、CCL4、CCL5/CCR5和CCL2、CCL12/CCR2抑制小鼠骨髓来源巨噬细胞的趋化功能。

MTB Hsp16.3重组蛋白通过Fractalkine/CX3CR1信号轴调控小鼠肺泡巨噬细胞M2型极化

目的初步探讨Fractalkine/CX3CR1信号轴在MTB Hsp16.3重组蛋白诱导小鼠肺泡巨噬细胞向M2型极化中的作用及机制。方法提取小鼠肺泡巨噬细胞,观察细胞形态后用其特异性标志CD68鉴定;MTB Hsp16.3(100 ng/mL)刺激肺泡巨噬细胞后,采用Real-time qPCR检测TNF-α、Arg-1等极化相关分子mRNA表达水平,Western blot检测Fractalkine、CX3CR1的表达情况。用慢病毒干扰肺泡巨噬细胞CX3CR1的表达后,荧光显微镜观察病毒感染情况;流式细胞术检测感染效率;Real-time qPCR和Western blot检测感染前后肺泡巨噬细胞CX3CR1的表达情况。采用MTB Hsp16.3刺激慢病毒感染过的肺泡巨噬细胞,Real-time qPCR检测各组极化相关分子mRNA表达水平;Western blot检测CD206、Arg-1的蛋白表达情况。利用Western blot检测各组中JNK、p38、ERK的磷酸化水平。结果显微镜下观察发现新分离的肺泡巨噬细胞为圆形,大小不等,约2 h后贴壁较牢,24 h后,肺泡巨噬细胞呈圆形、梭形等多种形态,且胞体更大,通过CD68鉴定为肺泡巨噬细胞;经MTB Hsp16.3处理后巨噬细胞TGF-β、IL-10、Arg-1、Fizz1的mRNA水平明显增高(P<0.05),巨噬细胞表面Fractalkine、CX3CR1的表达增高(P<0.05),与JNK、p38的磷酸化水平升高(P<0.05)相关。干扰肺泡巨噬细胞CX3CR1的表达后,慢病毒感染效率在72 h达到最高峰,并且可降低巨噬细胞表面CX3CR1的表达。经MTB Hsp16.3刺激慢病毒感染过的肺泡巨噬细胞发现,TGF-β、IL-10、Arg-1、Fizz1 mRNA水平降低(P<0.05),CD206、Arg-1的表达水平降低(P<0.05),与JNK、p38磷酸化水平被抑制(P<0.05)相关。结论Fractalkine/CX3CR1信号轴可能参与调控MTB Hsp16.3重组蛋白诱导的肺泡巨噬细胞M2型极化,并且可能通过激活JNK、p38的磷酸化水平发挥作用。

猫爪草醇类提取物对小鼠骨髓来源巨噬细胞极化的影响

目的探讨猫爪草(RTR)醇类提取物对于小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)极化的影响。方法提取6~8周BALB/c雌鼠骨髓细胞,用DMEM完全培养基(含有20 ng/mL GM-CSF)培养7 d诱导为BMDM。用CCK8摸索RTR刺激巨噬细胞的最适浓度,并观察巨噬细胞的形态变化。ELISA检测细胞培养液中iNOS、TGF-β、TNF-α、IL-10的变化;qRT-PCR检测细胞内的IL-6、TNF-α、iNOS、TGF-β、IL-10、Arg-1的表达;FCM检测细胞表面标志物NOS2和CD206的表达。结果RTR刺激BMDM的最佳浓度为100μg/mL,刺激24 h后呈梭形改变。RTR处理组与对照组相比,TNF-α和iNOS分泌水平升高,TNF-α、iNOS和IL-6的mRNA表达水平升高(P<0.05);TGF-β和IL-10分泌水平降低,TGF-β、IL-10和Arg-1的mRNA表达水平降低(P<0.05);刺激36 h后,巨噬细胞表面高表达NOS2,CD206低表达(P<0.05)。结论猫爪草醇类提取物可刺激小鼠骨髓来源巨噬细胞产生M1型极化。

月经紊乱,下肢浮肿,急性肾损伤--罕见盆腔占位的“瘤栓事件”

低级别子宫内膜间质肉瘤(low-grade endometrial stromal sarcoma,LG-ESS)是一种罕见的子宫恶性肿瘤,在所有子宫恶性肿瘤中占比不足1%,目前国内外尚无关于LG-ESS导致急性完全性下腔静脉阻塞的报道。2020年11月,北京协和医院血管外科接诊1例LG-ESS患者,临床表现为月经紊乱、右下肢凹陷性水肿、突发恶心、少尿、肌酐升高,影像学提示下腔静脉完全性阻塞,通过多学科协作共同决策,采用分期手术联合内分泌治疗成功救治该患者,其诊疗过程体现了多学科协作在疑难重症患者诊治中的重要作用。

基于Fragmented Learning的中医药高效学习软件——“我药学”手机APP设计实现

基于Fragmented Learning的中医药高效学习软件——"我药学"手机APP通过手机解锁记忆中医药知识,充分利用了学生日常生活中碎片化的时间,帮助记忆枯燥的学习内容,大大提高了学生的学习兴趣和学习效率,最终解决中医药知识记忆难的难题。

NLRP3炎症小体在感染性疾病中的作用研究进展

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nucleotide-bindingoligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)是一类存在于胞浆中的大分子蛋白复合物,作为炎症反应的核心,能够感知外源性病原体和内源性危险信号,在多种感染性疾病的发生发展中发挥重要作用。因此,本文对NLRP3炎症小体的激活机制以及NLRP3炎症小体在感染性疾病中的研究进展予以综述,旨在为感染性疾病的治疗提供新的靶点。

MTB Hsp60重组蛋白对巨噬细胞趋化功能的影响

目的研究结核分枝杆菌H37Rv重组热休克蛋白60(Heat shock protein 60 of Mycobacterium tuberculosis,MTB Hsp60)对巨噬细胞(RAW264.7)趋化功能的影响。方法MTB Hsp60重组蛋白(100 ng/mL)刺激巨噬细胞24 h后,采用实时荧光定量PCR检测下列趋化因子如单核细胞趋化蛋白1(Monocyte chemotactic protein-1,MCP-1,CCL2)、巨噬细胞炎症蛋白1α(Macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α,CCL3)、巨噬细胞炎症蛋白1β(Macrophage inflammatory protein-1β,MIP-1β,CCL4)、调节活化正常T细胞表达与分泌的趋化因子(Regulation of Activation,Expression and Secretion by Normal T Cells,RANTES,CCL5)和单核细胞趋化蛋白5(Monocyte chemotactic protein-5,MCP-5,CCL12)的mRNA表达;ELISA法检测细胞培养上清液中趋化因子CCL2、CCL3、CCL4、CCL5和CCL12的分泌水平;Western bolt检测巨噬细胞表面趋化因子受体CC基序趋化因子受体1(C-C motif chemokine receptor 1,CCR1)、CCR2和CCR5的蛋白表达;流式细胞术检测表达趋化因子受体CCR1、CCR2、CCR5的巨噬细胞;Transwell实验检测巨噬细胞的趋化功能。结果100 ng/mL MTB Hsp60重组蛋白刺激巨噬细胞24 h后,其趋化因子CCL2、CCL3、CCL4及CCL12的mRNA表达水平无明显差异,但CCL5的mRNA水平显著上调(P<0.05);巨噬细胞表面主要的趋化因子受体CCR1、CCR2蛋白表达水平显著增高(P<0.05),而其表面CCR5蛋白的变化不明显;流式细胞术检测结果显示,与未处理组相比,处理组中CCR1^(+)、CCR2^(+)巨噬细胞数量明显增加(P<0.05),而CCR5^(+)巨噬细胞数量无明显差异;Transwell实验表明,经过MTB Hsp60重组蛋白处理后的巨噬细胞有更明显的被募集的趋势(P<0.05);而上清液中趋化因子CCL2、CCL3、CCL4、CCL5及CCL12的释放水平无明显变化。结论MTB Hsp60重组蛋白能上调巨噬细胞中趋化因子CCL5的mRNA表达水平,能增加巨噬细胞表面趋化因子受体CCR1和CCR2的表达,并且能增强巨噬细胞的趋化功能。

胸腔镜解剖性肺段切除术在双侧肺癌手术中应用的单中心回顾性研究

目的探讨电视辅助胸腔镜(video-assisted thoracoscopic surgery,VATS)解剖性肺段切除术在同期和分期双侧肺癌手术患者中应用的安全性及有效性。方法回顾性分析北京协和医院胸外科2013年12月—2022年5月收治的100例应用VATS解剖性肺段切除术进行双侧手术患者的临床资料。根据手术时机将患者分为两组:同期双侧手术组52例,其中男17例、女35例,年龄(55.17±11.09)岁;分期双侧手术组48例,其中男16例、女32例,年龄(59.88±11.48)岁。对两组患者的术中情况及术后疗效进行评价。结果100例患者均顺利完成双侧VATS手术,至少一侧行解剖性肺段切除术。同期双侧手术组患者具有年龄小(P=0.040)、合并疾病比例小(P=0.030)、肺癌家族史罕见(P=0.018)及发现至手术间期更短(P=0.000)的特点。同期双侧手术组以肺段联合楔形切除术为主,分期双侧手术组以联合肺叶切除术为主(P=0.000);同期双侧手术苏醒时间较分期一期和二期手术更长(P=0.000,P=0.002),但手术时间、麻醉时间与分期双侧手术组两次叠加时间差异无统计学意义;淋巴结采样/清扫站数(P=0.041)及个数(P=0.026)较分期双侧手术组两次叠加数量更少;两组术中气道压管理差异无统计学意义(P>0.05)。同期双侧手术组出院后日常生活能力评分更低。结论VATS解剖性肺段切除术在同期及分期双侧肺癌手术中的应用安全可行,对侧可联合亚肺叶或肺叶切除术。同期双侧手术组在手术时间和术后并发症与分期双侧手术组大致相同,但出院后日常生活能力评分更低。在综合考虑患者心理因素、身体情况及个人意愿的基础上可优先选择同期双侧手术。

18例原发性纵隔卵黄囊瘤的临床诊治及预后特点

目的探讨原发性纵隔卵黄囊瘤(primary mediastinal yolk sac tumor,PMYST)的临床特点及诊治经验。方法收集北京协和医院胸外科2000年9月—2020年9月收治的PMYST患者的临床资料。对其临床特点、病理学特征、治疗方式及预后情况进行回顾性分析。结果纳入18例患者,其中男17例、女1例,中位年龄22.0(16.6,26.2)岁。患者伴有甲胎蛋白水平升高,病理类型可为单一卵黄囊瘤或与其他纵隔生殖细胞肿瘤合并存在。治疗方式以化疗及根治性手术为主,对肿瘤侵犯其他脏器的患者可行扩大切除。手术患者7例术后出现肺或胸膜转移,其中3例伴有胸腔外(骨、脑)转移;1例术后1年内出现复发。所有患者均通过电话或门诊随访,末次随访时5例生存,9例死亡,4例失访,中位生存期为16.8个月;中位无进展生存期为14.9个月;术后1年、3年、5年生存率分别为73.3%、28.6%和11.8%。结论PMYST常发生于中青年男性患者,术前穿刺能提供有效的诊断依据。R0切除、治疗后甲胎蛋白恢复正常、不伴有转移可能是预后较好的潜在指标。PMYST总体预后较差,经合理诊治后部分患者可获得长期生存。

防御素在抗结核分枝杆菌感染中的作用机制研究进展

防御素是广泛分布于生物界的一类富含半胱氨酸的内源性阳离子抗菌肽,在抵抗病原微生物入侵及调节机体免疫功能等方面发挥重要作用。研究发现,防御素对细菌、真菌或病毒等均具有杀灭作用,其在抗结核分枝杆菌感染中也展现出突出优势。防御素独特的抗菌机理可以破坏结核分枝杆菌的细胞壁、细胞膜等生物学结构,从而抑制结核分枝杆菌。本文对防御素的分子结构、生物学作用、抗结核作用及机制予以综述。

肺部炎性肌纤维母细胞瘤的诊疗:单中心回顾性研究并文献综述

肺部炎性肌纤维母细胞瘤是一种罕见的肺部肿瘤,临床医师缺乏对该疾病的充分认识。本文以本中心肺部炎性肌纤维母细胞瘤患者的病例资料为基础,对该疾病的既往报道做了全面的检索和简要的汇总分析。肺部炎性肌纤维母细胞瘤更容易出现在男性患者和右肺,其临床和影像学表现具有异质性。手术是最为重要的治疗方式,完整切除对患者的预后有很大意义,以克唑替尼为代表的靶向治疗可能对ALK突变阳性的患者有帮助。