猫冠状病毒病诊断技术研究进展

猫冠状病毒病是由猫冠状病毒(feline coronavirus,FCoV)感染引起的一种以上呼吸道、肠道和胸腹膜炎症为主的猫传染性疾病,主要通过粪口途径传播,在全世界均有流行,目前无有效疫苗和特效治疗药物。其中由猫传染性腹膜炎病毒引发的猫传染性腹膜炎致死率极高,且不易诊断和预防,已成为病死率最高的猫病毒性疾病之一。猫冠状病毒病的临床诊断和大部分实验室检测技术均不具有特异性,对于区分猫肠道冠状病毒和猫传染性腹膜炎病毒感染还存在一些困难。目前,基于PCR技术的RT-PCR和RT-qPCR特异性相对较高,RT-LAMP和RT-RAA等新技术的开发和应用可逐步填补临床快速检测的空白。本文通过对猫冠状病毒病诊断技术研究进展进行综述,以期为建立猫冠状病毒病快速诊断方法和制定诊断技术标准奠定基础。

禽流感病毒M基因的重组慢病毒构建

旨在建立针对禽流感病毒(AIV)的实验室快速分子检测方法。构建重组慢病毒作为分子检测方法中的阳性对照品,采用PCR扩增技术获得AIV M基因的保守区片段,并构建pLVX-M-IRES-ZsGreen1重组慢病毒穿梭载体;将鉴定成功的重组穿梭质粒与骨架质粒pMD2.G和psPAX2共转染293T细胞,获得携带AIV M基因保守区的重组慢病毒;将重组慢病毒感染293T细胞,观察其荧光表达情况,收集、浓缩病毒液并测定其滴度;用AIV实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测方法检测M基因。结果表明:携带AIV M基因的重组慢病毒成功拯救,且其病毒滴度高、安全性强,可作为分子检测方法的阳性对照标准品。综上,本研究成功构建了AIV M基因的重组慢病毒,可高效包装出含有M基因保守区的慢病毒颗粒,为后续AIV分子检测试剂盒的研制提供参考。

赤羽病病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立一种快速、灵敏的赤羽病病毒(Akabanediseasevirus,AKAV)核酸检测方法,以AKAV S基因为靶基因,设计特异性引物和Taq Man探针,通过优化反应体系和条件,建立了AKAV荧光定量RT-PCR检测方法,随后开展了敏感性、特异性及重复性评估,并利用该方法与AKAV检疫行业标准推荐方法同时对临床采集的80份牛羊血液样品进行检测,以检验方法的临床应用效果。结果显示:本研究建立的检测方法敏感性较高,最低检测限为13.4 copies/μL;特异性良好,与口蹄疫病毒、牛冠状病毒、牛结节性皮肤病病毒、牛病毒性腹泻病毒、传染性牛鼻气管炎病毒、蓝舌病病毒、牛白血病病毒等均无交叉反应;组内试验变异系数为0.93%~2.47%,组间试验为1.25%~2.76%,重复性良好;利用建立的方法从80份临床样品中检出AKAV阳性样品21份,该检测结果与AKAV检疫行业标准推荐方法的符合率为98.75%。结果表明,本研究建立的AKAV荧光定量RT-PCR检测方法敏感性高,特异性及重复性好,适用于赤羽病临床检测,为赤羽病病原学监测和诊断技术标准开发提供了技术支撑。

从动物防疫角度浅谈实验动物运输的法律规定

实验动物运输活动应按照相关法律规定做好动物防疫工作,以防止实验动物疫病远距离跨地区传播。本文从动物防疫的角度概括了国内机构通过道路运输实验动物,尤其是向无规定动物疫病区运输实验动物,在运输前、中、后不同环节应遵循的法律规定及相关要求,并指出运输环节易出现的违规问题及处罚规定,提出了动物防疫部门应加强运输实验动物的动物卫生监管及相关法律法规宣传,实验动物运输机构应加强动物防疫相关法规的学习,做到依法运输实验动物。本文为相关单位及人员做好实验动物卫生防疫工作提供参考。

藏羊的品种特征、生产性能及放牧技术

藏羊原动物即西藏羊（Tibetansheep）.藏系绵羊是中国三大（西藏羊、蒙古羊、哈萨克羊）粗毛绵羊品种之一,主要有草地型（高原型）和山谷型两大类.藏羊的中心产区位于北纬26.50＇-36.53/,东经78°25＇-99°06＇,地处青藏高原的西南部.北有昆仑山脉及其支脉,南有喜玛拉雅山脉,西为喀喇昆仑山脉.

溶氧量及搅拌速率对青贮玉米秸秆微曝气水解效果的影响

为提高秸秆好氧水解的生物可降解性,试验选用切碎揉丝的青贮玉米秸秆,水解液按照体积比为10%的量添加,以水解液溶氧量(1、2、3、4、5、6mg/L)和搅拌速率(50、100r/min)为变化因素,温度控制在35～38℃、总固体为5%,进行优化设计。研究发现,进行8 d,pH值及氧化还原电位(oxidation-reduction potential,ORP)值趋近于稳定;搅拌速率为50 r/min、溶氧量为1～4 mg/L;以及搅拌速率为100 r/min、溶氧量为1～2 mg/L范围内,曝气量的提高,对脂肪酸的积累显著,且搅拌和曝气都可促进乙酸、丙酸和正丁酸的积累;搅拌速率为100 r/min,可溶性需氧量(soluble chemicaloxygendemand,s COD)的浓度整体呈现出高于搅拌速率为50 r/min时的状况;以纤维素降解为例,在搅拌速率为100 r/min条件下,溶氧为2 mg/L时,木质纤维素具有较高的降解率,达到48%。

序批式玉米秸秆牛粪混合厌氧干发酵产甲烷工艺优化研究

随着中国农业集约化水平的提高,秸秆、畜禽粪便等资源相对集中,为序批式厌氧干发酵产甲烷技术应用创造了良好条件。而国内对干发酵技术研究尚不成熟,尤其是关键因素对发酵性质的影响极其相互作用关系尚不明确,限制了工艺优化效果。该文着重研究了不同喷淋频率、接种量、物料配比作用下,玉米秸秆-牛粪混合原料序批式厌氧干发酵产甲烷、中间产物生成特性及其相互关系。结果表明:不同物料配比下,喷淋频率和接种量促进甲烷产量的作用方式不同,增加牛粪比例可显著提高产甲烷效率和产量。在甲烷产量快速增加阶段(第7～20天),不同关键因素的变化对中间产物总量及其组分影响显著(P<0.05),丙酸积累至约350mg/L以上时导致干发酵体系产甲烷能力下降,而氨氮浓度提高则有利于甲烷产量的提高。最优工艺参数,秸秆-牛粪干物质比为3∶7、喷淋频率为间隔6 h,接种量为30%获得最大甲烷产量为135.7 L/kg。该研究可为规模化养殖场利用序批式厌氧干发酵技术处理农业废弃物高效生产清洁能源提供理论指导。

喷淋次数和接种量对序批式秸秆牛粪混合干发酵产气性能的影响

序批式干法厌氧发酵产沼气技术可明显提高有机废弃物处理能力,但在提高以秸秆为主的农业废弃物发酵效率核心工艺及产气性能方面还缺乏系统的研究。该文通过调节喷淋次数和接种量研究了以玉米秸秆为主要原料的序批式干法厌氧发酵产气性能,并通过模型拟合、水解产物分析等手段揭示了影响水解和甲烷生产的制约因素。结果表明,调节喷淋次数和接种量均对沼气产量具有显著性影响(P<0.05)。喷淋次数为4次/d,接种量不低于质量分数20%时,沼气产量最大为251.6 L/kg。而且,产气高峰期甲烷体积分数平均为55%左右。增加接种量、提高喷淋次数可有效促进底物的水解。但是,甲烷产量、最大产甲烷率却呈现先增加后降低的趋势,并明显受到有机酸(丙酸)、氨氮积累浓度的制约,水解产物高效转化对提高产气效率具有重要作用。该研究可为改善秸秆序批式干法厌氧发酵工艺优化提供理论指导。

试论仿真器对C语言应用程序调试的支持

试论仿真器对Ｃ语言应用程序调试的支持（１０００３７北京轻工业学院自动化系）魏世萌近几年来，Ｃ语言不仅在操作系统环境下得到广泛应用（如ＭｉｃｒｏｓｏｆｔＣ或ＢｏｒｌａｎｄＣ），而且在嵌入式控制系统中亦得到人们普遍关注和使用。尤其是在单片机应用领域中，Ｃ...

如何编写C－51与汇编语言接口程序

如何编写Ｃ－５１与汇编语言接口程序（１０００３７北京轻工业学院自动化系）魏世萌Ｃ－５１是一种可直接访问ＭＣＳ－５１系列单片机硬件资源的嵌入式Ｃ语言，它不仅具有Ｃ语言结构化程序设计和功能丰富的库函数等高级语言特性，而且还可以与汇编语言混合编程，使高级语...

SARS-CoV-2细菌样颗粒的构建与鉴定

目的 表达新型冠状病毒(SARS-CoV-2)RBD与乳酸乳球菌锚钩(protein anchor,PA)基因编码的融合蛋白,使其高密度展示在GEM颗粒表面,制备SARS-CoV-2细菌样颗粒并进行鉴定。方法 选取SARS-CoV-2武汉分离株刺突蛋白(S)基因序列,利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统构建带有SARS-CoV-2 S蛋白受体结合域(Receptor Binding Domain,RBD)的重组杆状病毒rBV-RBD-linker-PA3,通过感染昆虫细胞Sf9制备融合蛋白RBD-linker-PA3,使其与GEM(Gram Positive Enhancer Matrix)技术颗粒化的乳酸乳球菌MG136结合形成细菌样颗粒(Bacterium-like particies,BLPs) GEM-RLP3。结果 成功合成Linker-PA3(720 bp)和RBD-linker(687 bp)基因片段,并获得转移杆粒DNA,基因组PCR鉴定显示重组杆状病毒构建成功,通过细菌样颗粒间接免疫荧光试验可观察到RBD-GEM的颗粒状绿色荧光信号,表明融合蛋白成功展示在GEM颗粒的表面,SDS-PAGE及Western blot结果表明,成功表达可溶性融合蛋白RBD-linker-PA3并被展示在GEM颗粒表面。结论 成功制备SARS-CoV-2细菌样颗粒,利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统制备SARS-CoV-2 RBD真核蛋白,配合锚钩蛋白利用柔性Linker将RBD高密度的展示在GEM颗粒表面,为新型疫苗的开发提供了新思路。

长春地区犬细小病毒VP2基因的遗传进化及基因型分析

目的了解吉林省长春地区犬细小病毒(Canineparvovirus,CPV)的流行及VP2基因的遗传进化特征。方法通过比对GenBank中已收录的不同地区、不同时间的CPV毒株基因序列,筛选保守区,设计特异性扩增完整VP2基因的通用型引物,采集疑似犬细小病毒病的犬粪便样品15份,提取DNA,PCR扩增获得完整的VP2基因并测序。将15份样品的测序结果与GenBank中已收录的22株CPV的VP2基因进行同源性比对并构建进化树,分析亚型以及遗传进化情况。结果PCR检测15份样品均为CPV阳性。样品株与参考株的核苷酸同源性为98.7%~99.9%,与4株商品化疫苗株的核苷酸同源性在98.1%~98.9%,遗传进化分析显示,15个分离株均为CPV-2c亚型,且所在分支十分接近,但未与所选CPV-2c亚型参考株在同一分支上。结论长春地区CPV流行亚型由CPV-2a、CPV-2b逐渐转变为CPV-2c,表明CPV-2c亚型的流行性越来普遍,CPV遗传变异趋势的监测和新型疫苗的研发应得到更多关注。