pH值对大豆11S球蛋白结构和表面疏水性的影响

采用Lowry法、8-苯氨基萘-1-磺酸铵盐(8-anilinonaphthalene-1-sulfonic acid ammonium salt,ANS)荧光探针法研究pH值对大豆11S球蛋白的溶解性和表面疏水性的影响,并利用圆二色光谱和荧光光谱对不同pH值条件下11S球蛋白二级结构和三级结构进行分析,为研究大豆蛋白结构与表面疏水性之间的构效关系提供理论基础。结果表明:除等电点外,大豆11S球蛋白溶解性和表面疏水性呈负相关,并且随着pH值的升高,大豆球蛋白二级结构中发生β-折叠和无规卷曲向α-螺旋的转变,三级结构中色氨酸(Trp)残基微环境极性降低。大豆球蛋白的表面疏水性与α-螺旋结构含量呈负相关。

ASE-GPC-GC法测定大豆及豆制品中六六六、滴滴涕农药残留

建立一种同时测定大豆及豆制品中α-HCH、β-HCH、γ-HCH、δ-HCH、ρ,ρ′-DDE、ρ,ρ′-DDD、ο,ρ′-DDT、ρ,ρ′-DDT8种有机氯农药残留的气相色谱分析方法。样品经加速溶剂系统萃取(ASE)和凝胶渗透色谱净化(GPC)后,采用气相色谱配备电子捕获检测器进行分离测定。0.005～0.100mg/kg范围内各残留药物线性良好,相关系数r均在0.9990以上;在0.005、0.020、0.050mg/kg3个加标水平下进行了方法验证,平均回收率为78.3%～107.6%,相对标准偏差为2.1%～5.5%;方法检测限(LOD)为0.2～1.8μg/kg。该方法重现性好、灵敏度高、分析迅速,各项指标均满足国内外法规要求,适用于大豆及豆制品中六六六和滴滴涕残留的分析检测。

唾液酸生物活性及其应用的研究进展

对唾液酸的来源、检测手段、生物活性及其在食品医药领域应用等方面的研究进行了综述,并对其未来的发展方向进行了展望。

pH值对大豆分离蛋白构象及表面疏水性的影响

采用Lowery法、ANS荧光探针法、圆二色光谱、荧光光谱方法分别对不同pH值大豆分离蛋白溶解度、表面疏水性、蛋白质二级、三级结构进行分析。结果表明:随着pH值的升高,大豆分离蛋白的二级结构发生由β-折叠结构向α-螺旋结构的转变,其Trp残基所处微环境极性增强。大豆分离蛋白表面疏水性与溶解度呈负相关关系,同时大豆分离蛋白表面疏水性也与α-螺旋结构含量呈负相关关系。

不同品种大豆分离蛋白结构与表面疏水性的关系

采用傅里叶变换红外光谱法(FTIR)对不同品种大豆分离蛋白的二级结构与表面疏水性之间的关系进行研究。对不同品种大豆分离蛋白在酰胺Ⅰ带位置中各个特征峰相互叠加,采用Gauss峰型进行拟合、解析,判断其α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲的相对含量,对其含量与表面疏水性数值之间的关系进行分析,为研究大豆分离蛋白结构与表面疏水性之间的构效关系提供理论基础。结果表明:大豆分离蛋白表面疏水性与α-螺旋含量呈负相关(r=-0.945,P=0.004),与β-折叠(r=0.904,P=0.013)及无规则卷曲(r=0.866,P=0.026)的含量呈正相关,与β-转角线性关系不明显(r=-0.698,P=0.123)。

豆酱的加工现状与安全性分析

对豆酱的国内外生产现状、安全性及发展前景进行了阐述,对豆酱生产过程及其产品中易出现的安全隐患进行了分析,并对涉及质量问题的不安全因素及其控制技术进行了探讨,提出了改进措施。

城市新区商业融资的研究——以安徽省蚌埠市为例

随着全国掀起以高铁为承载的城市新区突飞猛进的发展,新区社会资金供给渠道不断拓宽,高铁经济带来融资方式的转变,形成了依托于商业银行,以传统信贷融资为主流融资方式,地下钱庄、私募基金、担保公司、投资公司等多种融资渠道并存的融资现状。通过以安徽省蚌埠市高铁新区为例,探究蚌埠市高铁新区现有商业融资情况(仅指外部融资),构建三线城市所适合的有偏向性的过渡性融资模式,研究蚌埠市商业融资对经济可持续性发展方面的影响。

风味酶控结合乳化修饰技术制备多肽脱苦豆乳(粉)工艺

基于传统湿法制备豆乳(粉)工艺基础,采用连续密闭蒸煮浓缩、麦芽糊精/β-环糊精乳化及风味蛋白酶低限制性酶解风味修饰处理技术制备多肽脱苦强化型豆乳(粉),研究风味修饰联控技术制备工艺对豆乳(粉)中多肽得率、苦味值的影响,并确定最佳加工工艺。采用响应面优化分析法对低酶—风味修饰联控制备多肽脱苦豆乳(粉)工艺进行优化,确定最佳工艺参数为风味蛋白酶添加量0.5%、限制性酶解时间18 min、麦芽糊精与β-环糊精添加量比值为2.5∶1、麦芽糊精与β-环糊精总添加量为16%,此条件下多肽得率达到最高为10.21%,并消除豆乳苦味。通过各理化性质发现,风味蛋白酶酶解修饰与麦芽糊精/β-环糊精乳化修饰具有协同作用。

快速基质分散净化-超快速液相色谱-串联质谱法同时测定玉米中22种三嗪类除草剂残留

建立了玉米中扑灭津、莠去津、敌草净、特丁通等22种三嗪类除草剂多残留的分析方法。样品以乙腈为提取剂,经高速匀浆方法提取并浓缩后,以增强型脂质去除净化剂（EMR-Lipid）净化,除去了样品中的脂质,有效地降低了样品中的复杂基质所带来的背景干扰,净化液再经增强型脂质去除萃取剂（EMR-Polish）盐析萃取,以Kinetex XB-C_（18）柱为分离柱,用乙腈和0.1%甲酸溶液进行梯度洗脱,电喷雾正离子（ESI＋）多反应模式监测,超快度液相色谱-串联质谱（UFLC-MS/MS）测定,基质匹配标准曲线法定量。加标水平为5,10和20μg/kg时,22种农药的回收率为72%~105%,相对标准偏差小于15%。22种农药的检出限为0.16~1.8μg/kg,在1.0~50μg/L范围内线性关系良好（r〉0.993）。本方法具有快速、准确、灵敏度高等优点,能够准确测定玉米中22种三嗪类除草剂的残留量。

大豆7S球蛋白结构特性与表面疏水性相关性研究

以具有代表性的6个大豆品种制备的大豆7S球蛋白为研究对象,采用ANS荧光探针法测定表面疏水性,Ellman试剂分析法测定巯基和二硫键含量,激光拉曼光谱和荧光光谱分析空间构象,探讨大豆7S球蛋白结构特性与表面疏水性的相关性。结果表明:大豆7S球蛋白的表面疏水性与二级结构的α-螺旋含量和β-折叠含量呈负相关,与二级结构的β-转角含量和无规则卷曲含量呈正相关;与色氨酸残基荧光峰λ_(max)呈正相关,与拉曼光谱色氨酸费米共振I_(1360)/I_(1340)值呈负相关,与拉曼光谱酪氨酸费米共振I_(850)/I_(830)值呈正相关,与暴露的酪氨酸残基克分子数呈正相关,与N_(暴露)和N_(包埋)的比值呈正相关;与暴露巯基含量、巯基暴露程度呈正相关,与游离巯基含量、二硫键含量、二硫键构象的相关性均不显著。

大豆7S球蛋白热力学特性、溶解性和溶液性质与表面疏水性相关性研究

以6个具有代表性的大豆品种制备的7S球蛋白为实验对象,采用ANS荧光探针法测定表面疏水性,采用差示扫描量热法分析热力学特性,采用体积排阻-凝胶色谱法分析溶液的相对分子质量及其分布,采用Zeta Plus电位及激光粒度分析仪分析流体动力学粒径及其分布并测定ξ-电位,研究大豆7S球蛋白热力学特性、溶解性和溶液性质与表面疏水性的关系。结果表明:大豆7S球蛋白的表面疏水性与变性温度、变性焓、ξ-电位绝对值均呈显著负相关;大豆7S球蛋白的溶解性与表面疏水性呈极显著负相关;大豆7S球蛋白溶液可溶性聚集物的平均相对分子质量、平均粒径与表面疏水性呈显著正相关。

大豆11S球蛋白热力学特性和溶液性质与表面疏水性关系研究

以6个具有代表性的大豆品种制备的11S球蛋白为实验对象,研究大豆11S球蛋白热力学特性、溶解性和溶液性质与表面疏水性的关系。采用ANS荧光探针法测定表面疏水性,差示扫描量热法分析热力学特性,体积排阻-凝胶色谱法分析溶液的分子量及其分布,应用动态光散射技术分析流体动力学半径及其分布,Zeta-电位仪测定蛋白ξ-电位。结果表明,大豆11S球蛋白的表面疏水性与变性温度(p=0.010)和变性焓(p=0.012)均呈现显著负相关;大豆11S球蛋白的溶解性与表面疏水性极显著负相关(p=0.003);大豆11S球蛋白溶液可溶性聚集物的平均分子量与表面疏水性极显著正相关(p=0.005),平均直径与表面疏水性极显著正相关(p=0.007),ξ-电位绝对值与表面疏水性显著负相关(p=0.034)。

马铃薯淀粉汁水中Patatin的纯化及结构研究

马铃薯淀粉汁水经分离与纯化后得到马铃薯糖蛋白Patatin。通过对Patatin纯度、结构的测定与分析表明:Patatin纯度在90%以上,分子量为40.6 k Da。Patatin是糖和蛋白质的复合物。单糖组成为:鼠李糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖。Patatin中含有α-糖苷键,糖苷类型为吡喃型;糖链和肽链之间由O-型糖肽键连接。Patatin的热变性温度为75℃。

高效液相色谱-串联质谱法测定食品中的乙二胺四乙酸二钠

应用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定了食品中EDTA二钠盐。液态食品(5g)直接加水40mL提取;固态或酱状食品(5g)加水15mL及三氯甲烷20mL匀质后离心,取其上清液,残渣重复提取2次。合并上清液,在提取液中加入三氯化铁溶液超声10min衍生化后,定容至50mL。取样品溶液5mL,经MAX阴离子交换柱净化,用甲酸-甲醇-水(10+50+40)混合液6mL洗脱,洗脱液经80℃吹氮蒸干,用水溶解后进行HPLC-MS/MS分析。EDTA二钠盐的质量浓度在1.0~50.0mg·L-1范围内呈线性。方法的检出限(3S/N)为5mg·kg-1。应用提出的方法分析了4种食品样品并进行加标回收试验,测得回收率在88.3%~96.0%之间,测定值的相对标准偏差(n=6)均小于10%。

不同处理条件对马铃薯糖蛋白Patatin构象的影响研究

运用荧光和圆二色光谱手段研究了不同物理和化学条件处理后,马铃薯糖蛋白Patatin二级和三级结构的变化。结果表明:当p H4~5时,Patatin的二级结构以α-螺旋为主。当p H6~9时,Patatin的二级结构以β-折叠为主;随着p H增加,荧光强度下降,最大发射波长蓝移,并且p H对Patatin结构的影响是可逆的;在温度为20~60℃时,Patatin的二级结构以β-折叠结构为主,当温度达到80℃时,Patatin的二级结构以无规则卷曲结构为主;随着温度升高,荧光强度下降,最大发射波长红移;当Patatin处于不同浓度的DTT环境时荧光强度下降,当Patatin处于不同浓度的尿素环境时荧光强度增加,出现红移。在变性剂存在条件下,无规则卷曲结构逐渐取代β-折叠结构成为含量最多的构型。

高湿挤压纤维状大豆蛋白仿真烤鸡工艺研究

以高湿挤压纤维化大豆蛋白仿真鸡肉为原料,添加一定量香辛料,通过卤制、腌制和烘烤等工序开发仿真熟鸡肉产品。结果表明:通过感官评价和正交实验及中心组合实验确定最佳配方如下:咖喱粉3%,白糖1%,食盐3%。烘烤温度为120℃,烘烤时间为15 min。在整个二次加工过程中,蛋白质损失率2.60%,产品的损失率10.2%,氨基酸含量明显高于鸡肉。该研究结果为大豆深加工提供一条新的途径和方法,为其他仿真肉的开发提供参考。

高效液相色谱法测定食品中乙二胺四乙酸二钠

建立了食品中乙二胺四乙酸二钠的高效液相色谱测定方法。样品经去离子水提取,三氯甲烷净化后,采用紫外检测器检测,外标法定量。乙二胺四乙酸二钠的线性范围为1.0-100.0μg/mL,相关系数为0.9997;其检出限为10mg/kg,定量限为25mg/kg。不同基质平均回收率为88.64%-96.25%,相对标准偏差不大于12.59%。

基于双启动引物特异性检测单核细胞增生李斯特氏菌的PCR方法

以单核细胞增生李斯特氏菌iap基因为靶基因，利用一新型PCR引物设计方法——双启动引物（Dual-primingoligonucleotide，DPO），建立了特异性检测单核细胞增生李斯特氏菌的DPO—PCR方法，测试了DPO—PCR方法退火温度不敏感性、特异性及灵敏度，并在实践检测中进行了初步应用。结果显示：该方法检测单核细胞增生李斯特氏菌的灵敏度为1．51×10^2CFU／mL；退火温度不敏感性测试中，与常规PCR引物相比，DPO引物在48～68℃退火温度范围内均能够高效率地扩增靶基因；特异性测试中，DPO—PCR方法能特异地检测出目标菌，与其他菌株无非特异性扩增反应，比常规PCR方法显示出更强的特异性。实践应用证明，利用DPO—PCR方法对130份样本进行检测，共计检出9份单核细胞增生李斯特氏菌阳性样本，经国标法（GB／T4789．30—2008）复检，两者检测结果一致，显示出良好的实用性，为单核细胞增生李斯特氏菌的快速准确检测提供了新方法。

应用DPO技术检测番茄斑萎病毒方法的建立

为了准确、高效地检出番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV),利用双启动寡核苷酸引物(DPO)技术,以TSWV外壳蛋白(CP)基因为靶基因,设计了一对DPO引物,对PCR反应体系中的引物、d NTPs、Taq DNA聚合酶用量进行优化,建立了TSWV的DPO-PCR检测方法,并对其灵敏度、特异性以及退火温度敏感性进行了评价。结果表明,应用DPO引物建立的PCR技术能够成功地扩增出TSWV的208 bp特异性条带,与预期目标相符。经过优化后,DPO-PCR反应体系(25μL)为:DNA模板1μL,10×Buffer(含Mg2+)2.5μL,d NTPs(每种2.5 mmol/L)2.0μL,Taq DNA聚合酶(5 U/μL)0.2μL,上、下游DPO引物(20μmol/L)各1.0μL,以去离子水补充至25μL。利用该检测方法,在49.8~70.0℃的退火温度范围内,均可实现目标基因片段的高效扩增,说明其对退火温度不敏感;利用病毒RNA进行检测,该方法的灵敏度为7.5 ng;通过对TSWV、番茄环斑病毒、烟草环斑病毒和番茄黑环病毒的检测表明,仅TSWV呈现阳性反应,说明该方法特异性强。所建立的DPO-PCR检测方法能够准确、高效地检测TSWV,可用于进出境种苗检疫筛查及田间病害诊断。

基于DPO引物的空肠弯曲菌PCR检测方法的建立与初步应用

为建立特异、快速检测空肠弯曲菌的方法，本研究针对其gyrA基因设计了一对双启动寡核苷酸引物（DPO），建立了空肠弯曲菌DPO-PCR检测方法。试验结果显示，该方法的检测下限为1．2×10^2cfu／mL，在48℃～68℃退火温度范围内均可高效扩增靶基因片段，表明该方法退火温度范围宽，同时DPO引物特异性强，PCR反应过程中不会产生非特异性扩增。利用该方法对采集的184份样品进行检测，共计检出17份空肠弯曲菌阳性样品，经国标法（GB/T 4789．9-2008）复验，两者检测结果一致，显示了良好的实用性。该DPO-PCR方法设计简单、特异性强，为致病微生物的快速准确检测提供了新方法。