枸杞提取物对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的:体外通过过氧化氢(H2O2)诱导视网膜色素上皮(RPE)细胞造成氧化损伤,观察枸杞提取物对人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞活性的影响,探讨枸杞提取物通过抗氧化对ARPE-19细胞的保护作用。方法:采用不同浓度H2O2诱导体外ARPE-19细胞的氧化损伤,确定最佳浓度;采用MTT法检测枸杞含药血清对ARPE-19细胞活力的影响,确定安全有效的药物浓度;观察各组细胞的形态,划痕试验检测各组ARPE-19细胞的活力;Western Blot法检测各组细胞Nrf2/ARE信号通路相关因子Nrf2的质蛋白和核蛋白的表达水平;试剂盒检测氧化应激水平的相关指标活性氧(ROS)含量、还原型谷胱甘肽(GSH)含量及过氧化氢酶(CAT)活力。结果:当H2O2浓度为200μmol/L,作用2 h时,ARPE-19细胞出现明显的氧化损伤(P<0.01);不同浓度的枸杞含药血清对ARPE-19细胞的干预效果不同,在2.5%、5%、10%的浓度下对损伤的ARPE-19细胞具有明显的促进增殖的作用(P<0.05),故选择2.5%、5%、10%浓度的枸杞含药血清进行下一步实验,与模型组相比,枸杞含药血清组细胞形态良好,长势均匀;细胞内的ROS含量显著降低(P<0.01),GSH含量明显上升(P<0.05),CAT活力显著升高(P<0.01);Nrf2质蛋白表达增强(P<0.05),核蛋白表达减弱(P<0.05)。结论:枸杞含药血清能够提高ARPE-19细胞自身的抗氧化能力,从而对ARPE-19细胞产生保护作用。

基于静息态fMRI原发性闭角型青光眼的百分比波动振幅研究

目的 使用静息态功能磁共振成像(resting-state functional magnetic resonance imaging, rs-fMRI)技术研究原发性闭角型青光眼(primary angle-closure glaucoma, PACG)患者在静息状态下百分比波动振幅(percent amplitude of fluctuation, PerAF)的变化。材料与方法 共纳入江西省人民医院眼科诊断的PACG患者31例。同期,31名性别、年龄、受教育时间与之匹配的健康对照(healthy control, HC)被纳入对照组。对每个受试者进行全脑rs-fMRI扫描,以收集PerAF信号。分别采用单样本t检验和双样本t检验比较各组组内和组间PerAF数据。结果 与HC组相比,PACG患者组在左侧额上回背外侧(t=-3.9421,P<0.001)、眶部(t=-3.4619,P<0.001),左侧眶部额中回(t=-3.6709,P<0.001),右侧额中回(t=-3.8257,P<0.001),右侧额下回三角部(t=-3.6708,t=-4.0375,P<0.001);左侧缘上回(t=-3.9570,P<0.001)、顶下缘角回(t=-3.8230,t=-3.8730,P<0.001),右侧顶上回(t=-4.4581,P<0.001)、中央后回(t=-3.7825,P<0.001),中央旁小叶(t=-4.0816,P<0.001);右侧颞中回(t=-3.8402,P<0.001);左侧舌回(t=-3.5758,P<0.001);左侧前扣带和旁扣带脑回(t=-3.4718,P<0.001)、补充运动区(t=-3.7209,P<0.001)以及右侧小脑下部7b区(t=-3.9479,P<0.001)的PerAF均显著降低(体素水平P<0.001,聚类水平P<0.05,高斯随机场校正)。结论 PACG患者在多个大脑区域存在异常的PerAF值,涉及与视觉、情绪和认知调节相关的初级和高级视觉皮层和大脑区域。

基于Nrf2/ARE信号通路研究四物五子丸对碘酸钠诱导小鼠视网膜氧化损伤的保护作用及机制

目的:观察四物五子丸对碘酸钠(NaIO3)诱导小鼠视网膜氧化损伤的保护作用,并通过Nrf2/ARE信号通路研究四物五子丸防治干性AMD的作用机制。方法:选用6~8周龄的C57BL/6小鼠50只,随机分为空白组,模型组,四物五子丸低、中、高剂量观察组,每组10只。空白组正常饮食、饮水;模型组予腹腔注射NaIO3溶液(30.00 mg/kg^(-1))进行造模;观察组在腹腔注射NaIO3基础上予四物五子丸浸膏灌胃给药,给药剂量为低剂量组1.95 g/(kg·d)、中剂量组3.90 g/(kg·d)和高剂量组7.80 g/(kg·d)。每日1次,持续1周后,电镜下观察RPE细胞、下沉积物及Bruch膜厚度情况;比色法测定小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力;荧光定量PCR、Western blot检测Nrf2、HO-1、GCL的mRNA转录及蛋白表达。结果:与空白组比较,电镜下观察的模型组RPE细胞空泡化严重、RPE细胞下沉积物和Bruch膜明显增加、增厚;与模型组相比,四物五子丸低、中、高剂量组均能减轻RPE细胞损害、减少沉积物的形成、抑制Bruch膜的增厚。比色法测定模型组小鼠血清中SOD、GSH-Px活性较空白组均有明显降低(P<0.05);四物五子丸低、中、高剂量组SOD、GSH-Px活性较模型组均有不同程度的上调(P<0.05)。荧光定量PCR、Western blot检测模型组小鼠视网膜Nrf2、HO-1、GCLmRNA及蛋白表达较空白组均明显下降(P<0.05);四物五子丸低、中、高剂量组Nrf2、HO-1、GCL的mRNA转录及蛋白表达较模型组均有不同程度的上调(P<0.05)。结论:四物五子丸可有效减轻NaIO3诱导的小鼠视网膜氧化损伤,其作用机制可能与其激活Nrf2/ARE通路有关。