miR-141及成骨基因Dlx5、Msx2、Runx2在去卵巢骨质疏松模型小鼠BMSCs成骨分化中的表达

目的:观察去卵巢骨质疏松模型组与假手术组小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化中miR-141及成骨基因Dlx5、Msx2、Runx2的表达差异和变化趋势,探讨绝经后骨质疏松症的发生机制。方法:选用20只4周龄清洁级C57雌性小鼠,按照随机数字表法分为模型组和假手术组,每组各10只。模型组采用卵巢切除法建立小鼠绝经后骨质疏松症模型,假手术组保留卵巢,只切除卵巢周围脂肪。造模2个月后模型组小鼠经鉴定建模成功,此时采用全骨髓法分离培养2组小鼠BMSCs,进行细胞形态学观察,运用流式细胞技术进行细胞表型鉴定。对BMSCs成骨诱导分化,分别于第3天、8天、13天时采用碱性磷酸酶染色、定量和茜素红染色,观察BMSCs成骨能力。成骨诱导第3天、8天、13天时运用q-PCR检测miR-141及成骨基因Dlx5、Msx2、Runx2的表达,Western blot检测成骨基因蛋白的表达。结果:BMSCs经流式细胞表型鉴定CD29、CD44均阳性表达,CD34、CD45均阴性表达。2组BMSCs成骨诱导后,ALP表达量逐渐提高,第8天达到高峰,随后逐渐下降,呈"Λ"型变化;模型组较假手术组染色浅,活性检测结果与染色深浅程度一致。成骨诱导分化第3天、8天、13天时,模型组ALP表达量均低于假手术组(P<0.05),2组细胞进行茜素红染色,第8天时钙化结节出现,在第13天时,钙化结节数增多;成骨诱导第3天、第8天时,2组钙化结节数无明显差异,第13天时,与假手术组比较,模型组钙化结节数较少,成骨分化明显减缓。2组BMSCs成骨诱导后,成骨基因与蛋白的表达:成骨诱导第3天、8天、13天时,组内比较显示,Dlx5、Runx2表达均呈持续上升,miR-141、Msx2持续下降(P<0.05),与第3天时比较,第8天、13天的各项指标均有明显差异(P<0.05),组间比较显示,模型组miR-141、Msx2表达高于假手术组,Dlx5、Runx2表达低于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:卵巢切除影响BMSCs的成骨分化;BMSCs成骨诱导分化中,miR-141、Msx2是成骨负性调节因子,Dlx5、Runx2是正性调节因子。

基于红外热像技术探讨推拿功法“少林内功”对阳虚质的效应

目的观察推拿功法“少林内功”对阳虚体质者督脉红外热像的效应,从督脉代谢热值的角度探讨推拿功法“少林内功”的效应机制。方法纳入阳虚质志愿者30名(男16,女14名),先进行推拿功法“少林内功”的规范化培训后开始试验。功法训练时间:每次训练60 min,每周5次,共持续12周。采用红外热像技术分别于干预前后检测红外辐射轨迹以及大椎穴、命门穴与督脉循行体表的温度。结果干预后受试者的督脉循经红外辐射轨迹被诱发,与干预前相比,长度更长、范围更大、更加连续。干预后大椎穴、命门穴及督脉线上体表代谢温度较干预前明显升高(P<0.01)。结论推拿功法“少林内功”可以提高阳虚质者督脉的经穴皮肤温度,增强督脉经络能量代谢。

新时期高校辅导员队伍专业化建设的探析

高校辅导员专业化建设是加强和改进大学生思想政治教育、维护高校稳定的重要组织保证和长效机制。加强辅导员专业化建设势在必行。只有认真分析辅导员专业化建设中存在问题,才能更好地探索出专业化建设的途径。

体质因素对代谢综合征影响的回归分析

目的考察中医体质类型对代谢综合征患者发病的影响,为代谢综合征的体质筛查及预防研究提供依据。方法采用病例-对照研究方法,以60例代谢综合征患者为研究对象,以60例健康体检者为正常对照。以单因素logistic回归分析、多因素logistic回归分析探讨性别、年龄、家族史、职业、文化程度、吸烟、饮酒、嗜肥甘厚味、运动锻炼、精神紧张、体质类型等自变量与代谢综合征的相关性,分析体质因素的作用规律。结果单因素Logistic回归分析:自变量痰湿质(OR=23.727,95%CI=8.223-68.461)、阴虚质(OR=5.515,95%CI=2.185-13.925)、气郁质(OR=3.574,95%CI=1.374-9.299)OR值大于1,被选入模型。多因素logistic回归分析:痰湿质、饮酒与代谢综合征关联性极高,对应的比数比分别为:20.016、19.834。积极的运动锻炼与代谢综合征的发病成显著性负相关,比数-38.115。结论痰湿质、阴虚质、气郁质是代谢综合征主要体质相关因素;吸烟、饮酒、嗜肥甘厚味、精神紧张、家族史与代谢综合征患者呈正相关,是代谢综合征发病的危险因素;运动锻炼与代谢综合征呈负相关性。

激素性股骨头坏死早期干预研究进展

随着对激素性股骨头坏死发病机制的深入研究,使得对激素性股骨头坏死进行早期干预,使保存患者自身关节成为可能。本文综述了近年来一些国内外学者对激素性股骨头坏死早期采用药物、骨组织工程及物理治疗等手段,进行早期干预。从而为激素性股骨头坏死的患者寻求有效保存自身关节的治疗方法提供了新的思路。

“五步递进法”在《针灸推拿学》课程教学中的应用探索

针灸推拿学是中医院校的基础课程,为提高其教学效果,在该学科的教学过程中开展五步递进法,从"背诵经典-构建框架-技能操作-问题导向-联系临床"五个方面逐层递进,加强引导。教学实践表明,五步递进法较好地处理了传授知识与培养能力的关系,有助于提高学生的课堂积极性,增加教学效果,促进学科发展。

健骨颗粒含药血清调控miR-141对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的观察健骨颗粒含药血清对去卵巢模型小鼠BMSCs成骨分化的影响,并研究其调控miR-141影响BMSCs分化的可能机制。方法流式细胞计数法鉴定BMSCs;含药血清和空白血清分别干预体外培养的BMSCs;显微镜下观察细胞形态结构,碱性磷酸酶染色、定量检测,茜素红染色;RT-PCR检测miR-141及DLx5、Msx2、Runx2的基因表达情况;Western blot检测DLx5、Msx2及Runx2的蛋白表达情况。结果流式细胞计数法鉴定提取细胞符合实验要求;镜下观察发现两组细胞有差异,含药血清组细胞群落间结晶更为密集;ALP染色及定量、茜素红染色结果含药血清组均优于空白血清组;RT-PCR检测Dlx5、Msx2、Runx2及miR-141的基因表达结果:含药血清组miR-141和Msx2基因表达较空白血清组显著降低(P<0.01),而Dlx5、Runx2的基因表达显著升高(P<0.01);Western blot检测DLx5、Msx2、Runx2的蛋白表达结果:含药血清组较空白血清组相比,Msx2的蛋白表达略微下降(P<0.05),而Dlx5、Runx2的蛋白表达相对升高(P<0.01)。结论健骨颗粒可以调低miR-141的表达,进而调高Dlx5的表达,削弱Dlx5的同源异形基因Msx2对Runx2抑制作用,通过miR-141调控Dlx5/Msx2/Runx2信号通路促进BMSCs成骨分化达到预防和治疗绝经后骨质疏松的目的。

健骨颗粒对去卵巢小鼠miR-141及成骨基因Dlx5/Msx2/Runx2的影响

目的:观察健骨颗粒对去卵巢小鼠骨组织中miR-141、Dlx5、Msx2、Runx2表达的影响,探讨健骨颗粒防治绝经后骨质疏松的作用机制。方法:30只C57小鼠按照随机数字表法分为假手术组、生理盐水组和健骨颗粒组,每组10只。假手术组只切除卵巢周围脂肪,不切除卵巢;生理盐水组和健骨颗粒组均手术切除双侧卵巢,并分别灌服生理盐水和健骨颗粒。干预8周后处死取材,采用micro CT观察胫骨形态并计量;realtime PCR检测骨组织miR-141、Dlx5、Msx2、Runx2等mRNA的表达;Western blot法检测骨组织Dlx5、Msx2、Runx2等蛋白含量。结果:与生理盐水组比较,健骨颗粒组骨小梁数量、宽度、长度、形态和分布部分恢复,密度和联结性有所增加,仍无法恢复到假手术组水平,但皮质骨面积增加,骨髓腔缩小,基本恢复到假手术组水平;骨矿物质含量(BMC)、骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨表面积和骨组织体积比值(BS/TV)、骨小梁数量(Tb.N)均明显升高;骨小梁分离度(Tb.Sp)、结构模型指数(SMI)指标均明显降低;小鼠骨组织miR-141、Msx2相对含量明显降低;骨组织Runx2、Dlx5相对含量明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:健骨颗粒可以有效降低miR-141的表达,并通过影响骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化BMP信号通路Dlx5/Msx2/Runx2信号轴来提高Dlx5、Runx2等成骨关键因子的表达,提高成骨能力,达到预防和治疗骨质疏松的目的。

健骨颗粒正丁醇极性部位对去卵巢大鼠OPG/RANKL的影响

目的:观察健骨颗粒正丁醇极性部位对去卵巢大鼠骨保护素(OPG)和核因子-κB配体受体致活剂(RANKL)的影响,探讨其治疗绝经后骨疏松症(PMOP)的作用机制。方法:切除雌性SD大鼠双侧卵巢制造PMOP模型,运用双能X线骨密度仪测定骨密度(BMD);ELISA法检测血清中雌二醇(E_(2))、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、OPG和RANKL的含量,并计算OPG/RANKL比值;Western Blot法测定骨组织中TRAP、OPG和RANKL蛋白表达,并计算OPG/RANKL比值。结果:与生理盐水组比较,正丁醇组术后第12周BMD显著增高(P<0.01),术后第8、12周血清E_(2)和OPG水平显著升高(P<0.01);术后8周TRAP在血清中的含量和在骨组织中的蛋白表达均显著降低(P<0.01);术后第8周骨组织OPG蛋白表达显著升高(P<0.01);术后第4、8周骨组织中RANKL蛋白表达均显著降低(P<0.01);术后3个时间点血清中OPG/RANKL比值都显著升高(P<0.01)。结论:健骨颗粒正丁醇极性部位可调节OPG与RANKL之间的代谢平衡,提高血清中OPG/RANKL的比值,降低骨吸收,改善去卵巢大鼠骨骼的代谢水平,提高BMD。

健骨颗粒乙酸乙酯萃取部位对卵巢切除大鼠骨质量的影响

目的:研究健骨颗粒乙酸乙酯萃取部位对卵巢切除大鼠骨质量的影响。方法:采用切除雌性SD大鼠双侧卵巢建立绝经后骨质疏松症模型。运用双能X线4500W骨密度仪测定骨密度,万能材料试验机检测骨组织的最大载荷。骨组织石蜡包埋切片后行Masson染色,观察骨组织形态,并做骨小梁面积百分比计量。通过酶联免疫吸附法检测血清中的骨碱性磷酸酶(BALP)、雌二醇(E2)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的含量。结果:与空白组比较,乙酸乙酯组术后4、12周BMD显著升高(P<0.01),术后12周胫骨三点抗弯最大载荷显著升高(P<0.01),术后8、12周腰椎、胫骨近干骺端骨小梁面积百分比及血清E2水平显著升高(P<0.01),术后12周血清BALP水平显著升高(P<0.01),术后8周血清TRAP水平显著下降(P<0.05)。结论:健骨颗粒乙酸乙酯萃取部位能有效的改善卵巢切除术后大鼠机体的骨代谢水平,改善骨质量。